Реагенты, реактивы для клинических лабораторных исследований: реагенты к автоматическому анализатору ACL AcuStar:

Беларусь - русский - Министерством здравоохранения Республики (Центр экспертиз и испытаний в здравоохранении)

Доступна с:
Inova Diagnostics, Inc., СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ
класс:
изделия медицинского назначения
Производитель:
Inova Diagnostics
Количество Авторизация:
Мн-7.1198545-2001
Дата Авторизация:
2020-04-30

Прочитать полный документ

Реагенты QUANTA Flash h-tTG lgA,

кат. № 701100, 701103

Для диагностики In Vitro. Уровень сложности по закону CLIA:

Умеренный

701103, 701100

Отпускается

по рецепту

Назначение

QUANTA Flash h-tTG IgA представляет собой реагент для иммунохемилюминесцентного анализа

(ИХЛА),

целью

которого

является

полуколичественное

определение

уровней

антител-

иммуноглобулинов

класса

А

(IgA)

к

ферменту

тканевой

трансглутаминазы

человека

(h-tTG)

в

сыворотке.

Обнаружение

наличия

антител

IgA

к

ферменту

h-tTG

в

сочетании

с

результатами

клинических

обследований

и

других

лабораторных

анализов

способствует

диагностике

глютенчувствительной целиакии (энтеропатии) (ГЦ) и герпетиформного дерматита Дюринга (ГД).

Сводная информация и описание анализа

Целиакия представляет собой хроническое заболевание, основными симптомами которого являются

воспаление и характерное «уплощение» слизистой оболочки кишечника, приводящее к синдрому

пониженного

всасывания

(мальабсорбции),

известному

как

глютенчувствительная

энтеропатия.

Точная этиология заболевания остается неизвестной, но известно, что глиадин, представляющий

собой спирторастворимую фракцию пшеничного глютена, обладает явными токсичными свойствами.

1,2

Первоначально

для

диагностики

целиакии

проводилась

многократная

биопсия

кишечной

ткани.

Относительно

недавно

для

скрининга

пациентов

с

подозрением

на

глютенчувствительную

энтеропатию,

а

также

для

контроля

соблюдения

диеты

было

предложено

серологическое

исследование на антитела к глиадину, эндомизию и тканевой трансглутаминазы (tTG).

3-5

Европейское

общество детской гастроэнтерологии, гепатологии и питания рекомендовало использование маркеров

антител, таких как антитела к глиадину и эндомизию, для уменьшения количества кишечных биопсий,

необходимых для постановки диагноза.

Было выявлено, что антигеном для антител к эндомизию является перекрестносшивающий фермент

белка tTG.

6

Антиген h-tTG антиген был получен

по рекомбинантной технологии и

может

иметь

определенные преимущества по сравнению с антигеном, полученным из печени морской свинки.

7,8

Герпетиформный

дерматит

-

это

кожное

заболевание,

которое,

как

и

целиакия,

вызывается

употреблением белка пшеницы. У большинства пациентов с ГД наблюдается атрофия ворсинок тощей

кишки, идентичная атрофии, возникающей при целиакии, а строгая безглютеновая диета уменьшает

тяжесть поражений как кишечника, так и кожи.

1,2,9

Современные серологические методы, такие как

анализ

на

антитела

к

эндомизию,

нативному

глиадину

и

tTG

обеспечивают

более

низкую

эффективность

при

диагностике

ГД,

имея

чувствительностью

от

60

до

75%

9

по

сравнению

с

чувствительностью более 95% при диагностике целиакии.

3-8

Принципы процедуры

Очищенный рекомбинантный h-tTG наносят на парамагнитные шарики, которые хранятся в картридже

для

реагента

в

условиях,

обеспечивающих

сохранение

антигена

в

его

реакционноспособном

состоянии. Когда картридж для анализа готов к первому использованию, в пробирку, содержащую

шарики, добавляют буферный раствор, и шарики повторно растворяются в буфере. Затем картридж с

реагентами помещают в анализатор Acustar и/или BIO-FLASH.

В анализаторе образец сыворотки пациента разводят в пропорции 1:17 в одноразовой пластмассовой

кювете.

Небольшие

количества

разведенной

сыворотки

пациента,

шарики

с

h-tTG

и

аналитический

б у ф е р

п о м е щ а ю т

в о

в т о р у ю

к ю в е т у

и

п е р е м е ш и в а ю т .

Э т а

к ю в е т а

п о д в е р г а е т с я

и н к у б а ц и и

при

температуре 37°C. После этого шарики намагничивают и несколько раз промывают. Затем в кювету

добавляют антитело IgA, конъюгированное с изолюминолом, после чего происходит инкубация при

температуре 37°C. После этого шарики снова намагничивают

и несколько раз

промывают. При

добавлении

в

кювету

реагентов-триггеров.

конъюгат

изолюминола

вступает

в

реакцию

хемилюминесценции.

В

оптической

системе

анализатора

Acustar

и/или

BIO-FLASH

интенсивность

света, излучаемого в ходе этой реакции, измеряется и выражается в относительных световых единицах

(ОСЕ). Интенсивность света в ОСЕ пропорциональна количеству связанного конъюгата изолюминола,

которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител IgA к h-tTG, связанных с h-tTG на

шариках.

При выполнении анализа QUANTA Flash h-tTG IgA используется специально построенная для каждой

конкретной серии реагента эталонная кривая. Эта кривая в числовом виде загружается в анализатор

при

считывании

штрихкода

с

картриджа

с

реагентами.

На

основе

результатов,

полученных

при

использовании

двух

калибраторов,

строится

рабочая

кривая

для

конкретного

прибора,

которая

используется

программным

обеспечением

для

расчета

значения,

выражаемого

в

хемилюминесцентных единицах (ХЕ), по значению, выраженному в относительных световых единицах

(ОСЕ) для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash h-tTG IgA содержит следующие реагенты в количестве,

необходимом для проведения 50 тестов (артикул 701103) или для 100 тестов (артикул 701100):

a.

Парамагнитные

шарики

с

нанесенным

на

них

ферментом

h-tTG,

законсервированные

перед первым применением.

b.

Аналитический буфер розового цвета, содержащий ТРИС-буферизированный физраствор,

эмульгатор Tween 20 (полисорбат-20), стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Меченный IgA – антитело к человеческому иммуноглобулину IgA, меченное изолюминолом,

со стабилизаторами и консервантами.

2.

Буфер

для

повторного

растворения,

1

флакон,

розового

цвета,

содержащий

буфер,

стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

В качестве консерванта используется азид натрия. Азид натрия ядовит и может оказывать

токсичное воздействие на организм при попадании на кожу или в глаза. Азид натрия может

вступать в

реакцию с свинцовыми

или медными трубами с образованием потенциально

взрывоопасных

азидов

металлов.

Чтобы

предотвратить

накопление

азидов,

тщательно

промойте раковины, используемые для утилизации реагентов, большим количеством воды.

2.

При работе с имеющимися реагентами используйте соответствующие средства индивидуальной

защиты.

3.

В

случае

утечки

реагентов

необходимо

немедленно

произвести

чистку.

Соблюдайте

все

действующие федеральные, государственные и местные нормы и правила по утилизации

отходов.

Меры предосторожности

1.

Продукт предназначен для диагностики In Vitro.

2.

Продукт предназначен только для работы с анализатором Acustar и/или BIO-FLASH.

3.

Необходимо строго соблюдать протокол повторного растворения.

4.

После вскрытия картридж с реагентами должен храниться на карусельном штативе для

реагентов. Соблюдайте осторожность и оберегайте реагенты от случайной утечки при первой

установке картриджа с реагентами в анализатор.

5.

В результате неправильной чистки или промывки анализатора возможно химическое загрязнение

реагентов. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как формалин, отбеливатель,

этанол или моющее средство, могут создавать помехи при работе прибора-анализатора.

Строго

соблюдайте

рекомендуемую

процедуру

чистки,

описанную

в

руководстве

по

эксплуатации анализатора Acustar и/или BIO-FLASH.

Условия хранения

1.

Закрытые картриджи с реагентами и буфером для повторного растворения следует хранить при

температуре 2-8

C. Не замораживать! При условии соблюдения требований к хранению и

обращению реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами следует хранить в анализаторе. Программное обеспечение

анализатора контролирует срок годности реагентов, находящихся в анализаторе во время их

использования, и общий срок годности (дату окончания срока годности) серии, указанной на

картридже с реагентами. Система не будет работать с картриджами, срок годности которых

истек.

Сбор образцов, приготовление и хранение

Ниже

описана

процедура,

выполняемая

с

образцами

сыворотки.

Категорически

запрещается

использовать

образцы,

загрязненные

микроорганизмами,

образцы,

прошедшие

термическую

обработку,

или

образцы,

содержащие

видимые

частицы

примесей.

Категорически

запрещается

использовать сильно гемолизированную или желтушную сыворотку.

После

сбора

образцы

сыворотки

должны

быть

отделены

от

сгустков

крови.

Документ

H18-A4

Института клинических и лабораторных стандартов устанавливает для образцов следующие условия

хранения:

1.

Образцы следует хранить при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, следует поместить образцы в холодильную

камеру с температурой 2-8

C.

3.

Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если планируется транспортировка

образца,

допускается

замораживание

образцов

до

температуры

-20

C

или

ниже.

После

размораживания, перед проведением анализа, замороженные образцы следует тщательно

перемешать.

Описание процедуры

Комплект поставки

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash h-tTG IgA

2.

Буфер для повторного растворения

3.

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Анализатор Acustar и/или BIO-FLASH, подключенный к персональному компьютеру;

Раствор для промывки гидравлической системы анализатора Acustar и/или BIO-FLASH;

Растворы-триггеры Acustar и/или BIO-FLASH;

Кюветы Acustar и/или BIO-FLASH;

Калибраторы QUANTA Flash h-tTG IgA (артикул: 701101)

Контроли QUANTA Flash h-tTG IgA (артикул: 701102)

Применение хемилюминесцентного анализатора Acustar и/или BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с системой Acustar и/или BIO-FLASH приведены в руководстве по

эксплуатации хемилюминесцентного анализатора Acustar и/или BIO-FLASH и в руководстве по

программному обеспечению для анализатора. Для получения дополнительной информации и

устранения

неполадок,

связанных

с

анализом,

обратитесь

в

техническую

службу

Inova

Diagnostics, Inc. по адресу или номеру телефона, указанному в конце настоящего документа.

2.

Чтобы

опорожнить

контейнер

для

твердых

отходов,

откройте

ящик

для

отходов.

Удалите

контейнер

для

твердых

отходов

и

утилизируйте

использованные

кюветы

надлежащим

образом. Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и нажмите

кнопку Yes («Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнение ящика для отходов»).

3.

Чтобы

заменить

реагенты-триггеры,

нажмите

кнопку

Bulks

Inventory

F9

(«Инвентарь

Бестарный») (вверху справа).

a.

В окне Inventory –

Bulks («Инвентарь – Бестарный») нажмите кнопку Triggers

(«Триггеры») слева. Откроется новое всплывающее окно Add Triggers – Remove old

bottles («Добавить триггеры – Удалить старые флаконы»).

b.

Откройте ящик для отходов и удалите отходы из прибора Acustar и/или BIO-FLASH.

Утилизируйте все кюветы, находящиеся в ящике для сухих отходов. Нажмите кнопку Yes

(«Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнить ящик для отходов»). Удалите флаконы

из-под раствора-триггера из держателей и нажмите кнопку Next («Далее»). Отвинтите

колпачки от старых флаконов для растворов-триггеров и установите новые флаконы с

растворами-триггерами. Выполняйте эту операцию для каждого флакона по отдельности,

соблюдая цветовую кодировку колпачков (белый колпачок к белому флакону, красный – к

красному).

c.

Следуйте инструкциям, выводимым в

новом

окне

Add Triggers – Add Trigger 2 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 2»). После считывания и проверки

штрихкода поместите флакон с триггером 2 в держатель белого цвета. Нажмите кнопку

Next («Далее»).

d.

Следуйте инструкциям, выводимым в окне Add Triggers –

Ad d Trigger 1 bottle («Добавить

триггеры – Добавить флакон с триггером 1»). После считывания и проверки штрихкода

поместите флакон с триггером 1 в держатель красного цвета. Нажмите кнопку Finish

(«Готово»). Установите ящик для отходов на место и закройте его.

4.

Чтобы заменить контейнер

для промывочного

раствора

Bulks Inventory F9 («Инвентарь

Бестарный») (в верхнем правом углу). В окне Inventory – Bulks («Инвентарь – Бестарный»)

нажмите кнопку Sys. Rinse («Промывочный раствор»). В новом окне Add System Rinse –

Remove bottles («Добавить раствор для промывки – удалить флаконы») нажмите кнопку Next

(«Далее»). Следуйте инструкциям, выводимым в новом окне Add System Rinse – Add bottle

(«Добавить промывочный раствор – Добавить флакон»). После считывания и проверки

штрихкода, если требуется, нажмите кнопку Finish («Готово»).

5.

Чтобы опорожнить контейнер для жидких отходов, в окне Inventory – Bulks («Инвентарь –

Бестарный») нажмите кнопку

Fluid Waste («Жидкие отходы»). Удалите жидкие отходы и

утилизируйте их надлежащим образом. Нажмите кнопку Next («Далее»). После установки

пустого флакона на место нажмите кнопку Finish («Готово»).

Описание методики анализа

Подготовка картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо тщательно соблюсти все

описанные ниже указания по правильной установке картриджа в анализатор Acustar и/или BIO-

FLASH. Примечание: Запрещается использовать картридж, имеющий признаки повреждения.

1.

Поместите картридж с реагентами на твердую

поверхность. Придерживайте его рукой. Второй

рукой

потяните

за

красный

язычок,

находящийся

на

задней

части

корпуса

картриджа, и достаньте его полностью.

2.

Нажав

на

два

выступа

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(деталь

серого

цвета), надавите на верхнюю часть картриджа с

реагентами таким образом, чтобы он опустился

вниз и зафиксировался до щелчка. Теперь эти

выступы

больше

не

будут

видны.

ЗАПРЕЩАЕТСЯ

ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ

ВСКРЫТЫЙ КАРТРИДЖ!

3.

Повторное растворение микрочастиц фермента h-tTG:

a.

Снимите

колпачок

с

флакона

с

буфером

для

повторного

растворения

и

наберите жидкость в пипетку, входящую в

комплект

поставки.

Следует

использовать

все содержимое флакона.

b.

Сдвиньте

крышку

картриджа

с

реагентами в открытое положение, слегка

нажав

на

узкую

часть

картриджа

с

реагентами,

и

удерживайте

ее

в

этом

положении.

Аккуратно

перенесите

все

содержимое

флакона

в

пробирку

с

реагентами

с

микрочастицами

через

единственное

отверстие

в

верхней

части

картриджа с реагентами.

c.

Перемешайте содержимое пробирки с

реагентами с микрочастицами, всасывая и

выпуская жидкость из пипетки не менее 30

раз

подряд.

Если

после

перемешивания

наблюдаются сгустки шариков, продолжайте

перемешивание раствора еще не менее 30

раз.

Если

суспензия

из

микрочастиц

не

образовалась,

КАРТРИДЖ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ НЕЛЬЗЯ!

d.

Перед

извлечением

пипетки

из

пробирки используйте всю жидкость. После

этого утилизируйте пипетку.

4.

Снимите наклейку с верхней части картриджа реагента, открыв еще три отверстия.

5.

Поместите картридж с реагентами в открытое гнездо на карусельном штативе анализатора

Acustar и/или BIO-FLASH.

Калибровка перед началом анализа

1.

Перед первым применением новой серии картриджей реагента следует произвести калибровку.

Программное обеспечение не допустит новую серию реагентов к работе без калибровки.

2.

Подробные

инструкции

по

калибровке

картриджа

с

реагентами

приведены

в

разделе

«Калибраторы QUANTA Flash® h-tTG IgA, артикул 701101» данного листка-вкладыша.

3.

После валидации калибровки картридж с реагентами, прошедший калибровку, будет готов к

работе.

Программирование и введение образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist («Рабочий список») в верхней части окна и выберите вкладку Racks

(«Стойки») в нижней части окна.

2.

Выберите

нужную

стойку

для

образца,

выделив

его

на

экране

или

путем

считывания

ее

штрихкода

специальным

ручным

считывателем.

Отсканируйте

или

введите

с

клавиатуры

название образца, выберите тип образца (пробирка/чашка) и выберите на панели анализов

опцию «h_tTG_IgA». Повторите эти действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные гнезда на стойке для образцов, а затем вставьте стойку в

карусельный штатив анализатора.

4.

После того как все требуемые материалы будут помещены в анализатор, ярлык запуска анализа

в верхней части экрана компьютера станет активным (зеленый цвет). Чтобы начать анализ,

нажмите кнопку Start («Пуск») F4.

Контроли QUANTA Flash h-tTG lgA, кат. № 701102

Контроли

QUANTA

Flash

h-tTG

IgA

(приобретаются

отдельно,

артикул

Inova

701102)

содержат

материалы

для

положительного

и

отрицательного

контроля

антител

IgA

к

h-tTG.

Подробные

инструкции по вводу всей необходимой информации для каждого контроля в программу и по работе с

контролями описаны в разделе «Контроли QUANTA Flash® h-tTG IgA, артикул 701102» данного

листка-вкладыша. Рекомендуется использовать контроли один раз в день каждый день проведения

анализов. Однако следует соблюдать действующие указания местных или государственных норм и

правил.

Получение результатов

Для каждой новой серии реагента QUANTA Flash h-tTG IgA составлена специальная эталонная кривая.

Параметры этой кривой закодированы в штрихкоде, который нанесен на корпусе каждого картриджа с

реагентами. При калибровке, на основании эталонной кривой строится индивидуальная рабочая

кривая

для

каждого

анализатора.

Она

используется

для

перевода

значений

из

относительных

световых единиц (ОСЕ) в хемилюминесцентные единицы (ХЕ). Реакционная способность антитела IgA

к h-tTG определяется по приведенной ниже таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательный результат

<20

Слабый положительный результат

20-30

Положительный результат

>30

Реакционная способность в единицах ХЕ прямо пропорциональна титру аутогенных антител в образце

с ы ворот ки

пац иент а.

У в е л ич ен ие

ил и

ум еньш ен ие

к о н ц е н т р а ц ии

а ут ог ен ны х

антите л

в сыворотке

п а ц ие н т а

о т р а ж а е т с я

с о о т в е т с т в ую щ и м

ув е л и ч е н и е м

и л и

ум е н ь ш е н и е м

з н а ч е н ия

в единицах

ХЕ,

пропорционального количеству антител.

Диапазон

аналитических

измерений

( ДАИ)

для

данного

анализа,

определяемый

низшей

и

высшей

точками на эталонной кривой, находится в пределах от 1,9 до 4965,5 ХЕ, и в этих пределах результат

анализа

является

прямо

пропорциональным

уровню

антител.

Если

результат,

полученный

для

пациента, не превышает 1,9 ХЕ, анализатор Acustar

выдаст результат «<1,9 ХЕ». Поскольку этот

результат меньше 20 ХЕ, он считается отрицательным. Если результат, полученный для пациента,

превышает 4965,5 ХЕ, анализатор Acustar и/или BIO-FLASH выдаст результат «>4965,5 ХЕ». Он будет

считаться

соположительным.

Программное

обеспечение

Acustar

имеет

функцию

автоматического

повторного анализа. При выборе этой функции анализатор выполнит автоматический повтор анализа,

который ранее выдал результат «>4965,5 ХЕ», выполнив дополнительное 10-кратное разведение

образца, что позволит перенести измеряемое значение в пределы ДАИ. Затем программа выдаст

окончательный результат с учетом коэффициента дополнительного разведения. Поскольку значение

4965,5

ХЕ

является

максимально

возможным,

то

максимальное

значение

в

таком

случае

будет

составлять 49,655 ХЕ.

Интерпретация результатов

Каждой

лаборатории

рекомендуется

проверять

предоставленный

производителем

референтный

диапазон и устанавливать свой собственный нормальный диапазон на основе своих собственных

контролей

и

популяции

пациентов

в

соответствии

со

своими

собственными

установленными

процедурами.

Предполагается,

что

результаты,

представленные

лабораторией,

должны

включать

следующие

сведения:

«Указанные

результаты

были

получены

с

помощью

реагента

для

иммунохемилюминесцентного анализа QUANTA Flash h-tG IgA. Значения, полученные с помощью

методов, разработанных разными производителями, не являются взаимозаменяемыми».

Ограничения

1.

Не у всех пациентов с целиакией или герпетиформным дерматитом могут быть обнаружены

положительные результаты на аутоантитела IgA к h-tTG. Кроме того, отрицательный результат

при проверке уровня антител IgA к h-tTG у пациентов, не получавших лечение, часто может

быть объяснен селективным дефицитом IgA, что является относительно частым явлением при

целиакии. Для этих пациентов компания Inova предлагает использовать набор QUANTA Flash

h-tTG IgG.

2.

Результаты этого анализа должны использоваться в сочетании с клиническими данными и

результатами других серологических исследований.

3.

Неправильное повторное растворение (суспендирование) шариков, покрытых ферментом h-tTG,

может

привести

к

получению

более

низких

результатов,

чем

в

случае

правильного

растворения.

4.

Рабочие характеристики этого анализа не были разработаны для других образцов, отличных от

образцов сыворотки.

Прогнозируемые значения

Порог

отсечки

результатов

анализа

был

определен

путем

анализа

446

надлежащим

образом

охарактеризованных клинических образцов, а именно, единичных проб крови у пациентов, у которых

была четко диагностирована целиакия или ее отсутствие, и которые не находились на строгой

безглютеновой диете. Результаты анализа этих образцов, а именно, 117 клинически положительных и

329 клинически отрицательных результата, были использованы для корректировки порога отсечки до

значения 20 ХЕ для оптимизации чувствительности и специфичности с использованием этой учебной

выборки до уровней 92,3% и 98,2% соответственно.

Сравнение данного метода с аналогами

Образцы для анализа сравнения методов включали в себя образцы, полученные при проведении

клинических валидационных исследований (пациенты с ГЦ, пациенты, не страдающие ГЦ и пациенты

с герпетиформным дерматитом), которые соответствовали заявленному диапазону чувствительности

анализа. Исследование этих образцов производилось по методу QUANTA Flash IgA h-tTG и по

аналогичному методу ИФА/ELISA.

Сравнение методов

(N = 140)

h-tTG IgA ИФА/ELISA

Процентная доля

совпадений

(Доверительный

интервал 95%)

Положительный

результат

Отрицательный

результат

Итого

QUANTA

Flash h-

tTG IgA

CIA

(ИХЛА)

Положительный

результат

69

2*

71

Совпадение

полож. рез. =

100% (94,7-100%)

Отрицательный

результат

0

69

69

Совпадение

отриц. рез. =

97,2% (90,3-

99,2%)

Итого

69

71

140

Итого совпадение

= 99,1%

* Один образец был получен от донора, для которого метод h-tTG IgA ИФА/ELISA выдал сильно

отрицательный результат, а второй был получен от пациента с герпетиформным дерматитом.

Клиническая чувствительность и специфичность

Клиническое валидационное исследование, в которое были включены 200 проб от доноров крови с

нормальными показателями, 71 контрольная проба от пациентов, на страдающих от целиакии, 77

проб из лаборатории по производству tTG (27 контрольных проб с целиакией и 50 без целиакии) и 29

дополнительных проб с целиакией, полученных из хранилища проб сыворотки компании Inova. Эти

образцы

были

проанализированы

с

использованием

комплекта

QUANTA

Flash

h-tTG

IgA.

Результаты проверки приведены ниже:

Клинические (N = 371)

Диагноз

Чувствительность и специфичность

(доверит. инт. 95%)

ГЦ

Нет ГЦ

Итого

QUANTA Flash h-

tTG IgA CIA

(ИХЛА)

Положительный

результат

47

6*

53

Чувствительность = 94,0% (83,5-

98,7%)

Отрицательный

результат

3**

315

318

Специфичность = 98,1% (96,0-

99,3%)

Итого

50

321

371

* Образцы получены от 4 доноров, 3 из которых имели положительные результаты после анализа по

методу ИФА/ELISA, а у 2 имели место положительные результаты на антитела к хеликобактер пилори и

к тиреоглобулину соответственно. ** Все три образца также имели отрицательные результаты после

анализа h-tTG IgA ИФА/ELISA.

Результаты для 25 пациентов с герпетиформным дерматитом приведены в таблице ниже.

Герпетиформный дерматит

(N = 25)

Диагноз

Анализ (доверительный интервал

95%)

ГД

Нет ГД

Итого

QUANTA Flash h-

tTG IgA CIA

(ИХЛА)

Положительный

результат

20

0

20

Чувствительность = 80,0% (59,3-

93,2%)

Отрицательный

результат

5*

0

5

Итого

25

0

25

* Эти 5 образцов также имели отрицательные результаты после анализа h-tTG IgA ИФА/ELISA.

Точность и воспроизводимость

Точность

анализа

QUANTA

Flash

h-tTG

IgA

оценивалась

путем

обследования

7

пациентов

в

соответствии с требованиями CLSI EP5-A2, и результаты этой оценки приведены в следующей

таблице.

Внутрисерийная

Межсерийная

В разные дни

Итого

Образец

N

Среднее (ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

PT 1

100

8,7

0,3

3,5%

0,2

2,5%

0,0

0,0%

0,3

4,0%

PT 2

100

22,9

0,6

2,6%

0,7

3,0%

0,3

1,3%

1,0

4,2%

PT 3

100

25,1

0,5

2,2%

0,8

3,2%

0,5

1,8%

1,1

4,2%

PT 4

100

40,5

1,2

2,9%

1,5

3,6%

0,0

0,0%

1,8

4,5%

PT 5

100

69,6

1,5

2,2%

2,5

3,6%

1,0

1,4%

3,1

4,4%

PT 6

100

342,1

10,6

3,1%

9,9

2,9%

4,6

1,3%

15,2

4,4%

PT 8

84

3476,1

224,3

6,5%

277,4

8,0%

171,6

4,9%

395,8

11,4%

Диапазон аналитических измерений Пределы и линейность

Нижний

предел

обнаружения

для

данного

анализа

определяется

документом

CLSI

EP17-A

и

составляет 465 ОСЕ, что значительно меньше нижнего значения ДАИ (1,9 ХЕ). Полный диапазон

ДАИ в пределах от 1,9 до 4965,5 ХЕ является линейным. Исследование линейности выполнялось в

соответствии с документом CLSI EP6-A, и его результаты приведены в следующей таблице:

Образец

Диапазон

исследования (ХЕ)

Наклон (ДИ 95%)

Точка пересечения с осью

Y (ДИ 95%)

R

2

1

1,9-45,4

1,0 (0,95-1,05)

0,93 (-0,26-2,2)

1,000

2

2,8-118,3

1,03 (0,99-1,06)

0,68 (-1,38-2,7)

1,000

3

3,0-141,3

0,99 (0,95-1,02)

1,05 (-1,46-3,56)

1,000

4

17,6-724,7

1,02 (0,98-1,06)

7,81 (-7,25-22,87)

1,000

5

2,2-2699,0

1,05 (1,0-1,09)

31,18 (-18,39-80,76)

1,000

6

10,0-5428,0

0,92 (0,86-0,98)

-100,9 (-267,2-65,5)

0,990

1

Реагенты QUANTA Flash h-tTG lgG,

кат. № 701108

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA

Flash

h-tTG

IgG

это

иммунохемилюминесцентный

анализ

(ИХЛА),

предназначенный для полуколичественного определения антител класса IgG к человеческой

тканевой трансглутаминазе (h-tTG) в сыворотке крови человека. Наличие антител класса IgG к

h-tTG может использоваться в сочетании с клиническими данными и другими лабораторными

анализами

для

облегчения

диагностики

глютензависимых

энтеропатии

(целиакии),

в

частности у пациентов с селективной недостаточностью IgA.

Общее описание и объяснение анализа

Целиакия – это хроническое заболевание, которое в основном характеризуется воспалением

и характерным гистологическим уплощением слизистой кишечника, что приводит к синдрому

мальабсорбции, известному как глютензависимая энтеропатия. Точная этиология болезни

остается неизвестной, однако установлено, что токсичным веществом является глиадин –

спирторастворимая фракция глютена пшеницы.

1,2

Изначально для диагностики целиакии требовалось проведение серии биопсий кишечника.

Позже было предложено серологическое тестирование на антитела к глиадину, эндомизию и

tTG для обследования пациентов с предполагаемой глютензависимой энтеропатией, а также

для

того,

чтобы

контролировать

соблюдение

режима

питания

3-5

Европейское

общество

детской гастроэнтерологии и питания рекомендовало использовать маркеры-антитела, такие

как

антитела

к

глиадину

и

эндомизию,

чтобы

сократить

количество

кишечных

биопсий,

требуемых для постановки диагноза.

5

Установлено, что эндомизиальный антиген – это фермент tTG, катализирующий образование

перекрестных

связей

между

белками.

6

Антиген

h-tTG,

был

получен

с

помощью

рекомбинантной

технологии

и

может

обладать

определенными

преимуществами

по

сравнению с антигеном из печени морской свинки

7,8

У многих больных целиакией при достаточном уровне IgA не выделяются антитела класса IgG

к tTG. В то же время, у большинства пациентов с недостаточностью IgA антитела класса IgG

выделяются.

Обзор

литературы

показал,

что

106

из

108

(98 %)

больных

целиакией

с

селективной недостаточностью IgA положительны в отношении антител класса IgG к tTG.

9

2

Принципы метода

Рекомбинантный

h-tTG иммобилизован на поверхности парамагнитных микрочастиц, которые

хранятся в картридже для реагентов в условиях, которые позволяют антигену оставаться в

реактивном

состоянии.

Когда

картридж

для

анализа

готов

к

первому

использованию,

в

пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и содержимое

перемешивается. Затем картридж с реагентами помещается в прибор ACUSTAR и/или BIO-

FLASH

®

. Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным

раствором образца, налитым в одноразовую пластиковую кювету. Небольшие количества

разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы, покрытые h-tTG и буфер для анализа

помещаются во вторую кювету и перемешиваются. Данная кювета инкубируется при

температуре 37

°

C.

Затем микрочастицы намагничиваются и несколько раз промываются.

После этого антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и

инкубируются при температуре 37

°

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз

промываются. Конъюгат изолюминола вызывает люминесцентную реакцию при добавлении

реагентов («Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции,

измеряется в относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы

ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Результат, выраженный в ОСЕ, пропорционален количеству

связанного конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству

антител к h-tTG класса IgG, связанных с h-tTG на микрочастицах.

В

анализе

QUANTA

Flash

h-tTG

IgG

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании

результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора, которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы

(ХЕ) для каждого пациента.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash aCL IgG содержащий следующие реагенты:

a.

парамагнитные

микрочастицы,

покрытые

h-tTG,

хранящиеся

до

первого

использования.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченные изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

d.

Буферный раствор образца – забуференный фосфатом солевой раствор с

полисорбатом Твин 20.

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления

азида

раковины,

использованные

для

утилизации

реагента,

следует

промыть большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

3

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в приборе ACUSTAR и/или

BIO-FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

Не допускается использование липемической, желтушной или сильно

гемолизированной сыворотки.

5.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

6.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

ф о р м а л и н ,

о т б е л и в а т е л ь ,

э т а н о л

и л и

д е т е р г е н т

м о г у т

п о в л и я т ь

н а

результаты

анализа. Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве

пользователя ACUSTAR и/или BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

2.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

т е м п е р а т у р е

2-8

°

C.

Не

замораживать.

При

надлежащем

хранении

и

обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 60 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение ACUSTAR и/или BIO-FLASH контролирует даты истечения

срока годности картриджей, находящихся в приборе, а также серий картриджей с

реагентами.

3.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые частицы, не должны использоваться. Не допускается использование липемической,

желтушной или сильно гемолизированной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов: 1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов. 2) Если анализ не

будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в холодильник при

температуре 2-8

°

C. 3) Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец

необходимо транспортировать, он должен быть заморожен при -20

°

C или более низкой

температуре.

Замороженные

образцы

должны

быть

хорошо

перемешаны

после

размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения анализа

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами

QUANTA Flash h-tTG IgG

1

3 мл буфера для ресуспендирования

1

Пипетка с одной меткой

4

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в

комплек т

поставки

Прибор ACUSTAR и/или BIO-FLASH с компьютерным управлением

Ополаскиватель системы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Калибровочные препараты QUANTA Flash h-tTG IgG (номер детали: 701106)

Контрольные препараты QUANTA Flash h-tTG IgG (номер детали: 701107)

Использование хемилюминесцентного анализатора Acustar

и/или

Bio-Flash

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR и/

или BIO-FLASH и программным обеспечением ACUSTAR и/или BIO-FLASH

и з л о ж е н ы

в

р у к о в о д с т в е

оператора, поставляемом с системой ACUSTAR и/или BIO-FLASH. Для

получения дополнительной информации и устранения неполадок в связи с данным

анализом обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics,

Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes»

в окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране

«Inventory – Bulks» нажать

кнопку «Triggers» слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь

т р и г г е р н ы е

ф л а к о н ы

и з

з а ж и м о в

и

нажать

к н о п к у

« N e x t » .

Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2

bottle». После принятия штрих-кода поместить Триггер

2

в

б е л ы й

ш т а т и в ,

на

который нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR и/или BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране «Inventory

–Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse».

В

н

овом

о

кне « Add System Rinse – Remove

bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add System Rinse

– Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste» . Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать

кнопку «Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

5

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо проколоть пробки на

пробирках с реагентами и смешать микрочастицы, покрытые антигеном h-tTG, с буферным

раствором для ресуспендирования. Примечание: Не использовать картридж с реагентами,

если видны какие-либо признаки повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать микрочастицы с h-tTG:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами

и

микрочастицами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее 30 раз. Если видны скопления

микрочастиц,

раствор

необходимо

перемешать

еще

30

раз.

НЕ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы не ресуспендируются.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

другие отверстия.

6

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора ACUSTAR и/или BIO-FLASH. После помещения картриджа в карусель для

реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое смешивание

микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash™ h-tTG IgG Калибраторы 701106 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать

h-tTG_Ig

G

из панели анализа. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы начать анализ.

1

Реагенты QUANTA Flash DGP Screen,

кат. № 701113

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash DGP – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный для

полуколичественного определения антител класса IgG и IgA деамидированным пептидам

глиадина (DGP, ДПГ) в сыворотке крови человека. Наличие антител может использоваться в

сочетании с клиническими данными и другими лабораторными анализами для облегчения

диагностики целиакии и герпетиформного дерматита.

Общее описание

Целиакия – энтеропатия, связанная с чувствительностью к глютену, проявляющаяся в виде

воспаление

и

характерный

гистологических

изменений

слизистой

оболочки

кишечника

(уменьшение

всасывающей

площади

за

счет

исчезновения

ворсинок),

что

приводит

к

синдрому

мальабсорбции.

Точная

этиология

заболевания

остается

неизвестной,

но

доподлинно

известно

токсическое

влияние

спирт-растворимой

фракции

пшеничного

глютена

1,2

Исследования показали, что распространенность целиакии составляет 0,7-1,0% от

общей популяции, с увеличением распространенности до 20% в некоторых в группах.

3,4

Изначально, для диагностики целиакии и подобных расстройств прибегали к серии нескольких

биопсии кишечника. Совсем недавно, Европейское общества детской гастроэнтерологии,

гепатологии

и

нутрициологии

(ESPGAN),

5

а

также

несколько

других

опубликованных

исследований

6-8

рекомендовали использование серологических маркеров, таких как антитела

к

глиадину,

антитела

к

ДГП,

антитела

к

тканевой

трансглутаминазе

и

эндомизиальные

антитела, чтобы уменьшить число биопсий кишечника для постановки диагноза.

Недавняя работа показала, что антитела больных целиакией связывают очень ограниченное

число

специфических

эпитопов

на

молекуле

глиадина,

которые

были

селективно

диамидированы.

9-11

Считается,

что

дезамидирование

связанно

с

действием

фермента,

тканевой

трансглутаминазой.

12

На

основании

приведенных

выше

наблюдений,

были

разработаны

тесты

использующие

определение

антител

дезамидированнных

пептидов

глиадина. Они имеют более высокую диагностическую специфичность для целиакии, чем

стандартный тест на антитела к глиадину.

7,13-16

Для скрининга целиакии используются исследования, включающие в себя тесты обнаружения

антител класса и IgG, и IgA к деамидированные глиадина пептидов, так как значительная доля

больных целиакией низкий титр антител класса IgA.

14

Несколько исследований показали

высокую клиническую эффективность такой стратегии исследований .

17,13-16

Герпетиформный дерматит (ГД) является кожным заболеванием, как и при целиакии, данное

заболевание возникает при попадании в организм белок пшеницы. Большинство пациентов с

ГД

имеют

признаки

атрофии

ворсинок

тощей

кишки,

как

при

целиакией.

При

строгой

безглютеновой диете состояние кишечника и признаки поражения кожи уменьшаются.

18,19

Серологические

методы,

используемые

в

настоящее

время,

такие

как:

эндомизиальные

антитела (EMA) и антитела к тканевой трансглутаминазе, имеют меньшие диагностические

возможности, с чувствительностью в диапазоне от только 45-75%

18-20

по сравнению с 95% и

высокой чувствительности п целиакии. Одно исследование показало, что у пациентов в ГД,

антитела к ДПГ наблюдаются чаще, чем антитела к тканевой трансглутаминзе.

20

QUANTA Flash DGP Screen представляет собой усовершенствованный тест для обнаружения

антител класса

IgG и IgA

избирательным к синтетическому деамидированному пептиду,

2

полученному из глиадина пшеницы, что позволяет диагностировать целиакию даже у лиц с

сопутствующим дефицитом антител класса IgA.

Принципы метода

Синтетический

диеамидированный

пептид

глиадина

иммобилизован

на

поверхности

парамагнитных латексных микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в

условиях, которые позволяют антигену оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж

готов к первому использованию, весь картридж необходимо несколько раз перевернуть,

чтобы тщательно перемешать реагенты.

Затем картридж с реагентами помещается в прибор

Acustar и/или BIO-FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным раствором,

в

одноразовой

пластиковой

кювете.

Небольшое

количество

разбавленной

сыворотки

пациента,

ДГП-микрочастицы

и

буфер

для

анализа

помещаются

во

вторую

кювету

и

перемешиваются.

Смесь

инкубируется

при

температуре

37

C.

Затем

микрочастицы

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

После

этого

человеческие

анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы Acustar и/или

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител к

ДГП антител связанных с ДГП антигеном на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

Flash

DGP

Screen

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании

результатов анализа двух калибраторов строится калибровочная кривая для конкретного

прибора, которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы

(ХЕ) для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash DGP Screen, содержит следующие реагенты:

a.

Парамагнитные микрочастицы, покрытые ДГП, в жидкости, содержащей буфер,

белковые стабилизаторы и консерванты.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Трейсер IgA/IgG – Человеческие анти-IgG и анти-IgА антитела связанные с

изолюминолом, буфер, стабилизаторы белка и консерванты

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

3

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе Acustar и/или BIO-

FLASH.

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

Acustar и/или BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 20 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение Acustar и/или BIO-FLASH контролирует даты истечения

срока годности картриджей, находящихся в приборе, а также серий картриджей с

реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A3 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов: 1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов. 2) Если

анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в холодильник

при температуре 2-8

C. 3) Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если

образец необходимо транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более

низкой

температуре.

Замороженные

образцы

должны

быть

хорошо

перемешаны

после

размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash

DGP Screen

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор Acustar и/или BIO-FLASH с компьютерным модулем

Промывочный раствор Acustar и/или BIO-FLASH

Триггеры Acustar и/или BIO-FLASH

Кюветы Acustar и/или BIO-FLASH

4

Калибраторы QUANTA Flash DGP Screen (Part Number: 701111)

Контроли QUANTA Flash DGP Screen (Part Number: 701112)

Использование хемилюминесцентного анализатора Acustar и/

или BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором Acustar и/или

BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве пользователя,

поставляемом с системой Acustar и/или BIO-FLASH. Для получения дополнительной

информации и устранения неполадок, связанных с данным тестом, обратитесь в

службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе Acustar и/или BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы Acustar и/или BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране

«Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System Rinse –

Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа, для правильной установки картриджа в анализатор

ACUSTAR и/или BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание:

Не используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

Картридж с реагентами QUANTA Flash DGP Screen: Микрочастицы оседают во время

транспортировки и хранения и необходимо провести смешивание для повторного

суспендирования.

5

1.

Во время первого использования

аккуратно перевернуть картридж 30

раз, избегая образования пены.

Проводят проверку на полное

ресуспендирование микрочастиц.

Если микрочастицы

ресуспендированы неполностью,

то продолжают переворачивать

картридж до полного

ресуспендирования микрочастиц.

НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ КАРТРИДЖ,

если микрочастицы не

ресуспендируются.

2.

Сразу после ресуспендирования

микрочастиц помещают картридж с

реагентами на твердую

поверхность для удаления

красного язычка. Держите

картридж с реагентами в одной

руке. Другой рукой крепко

возьмитесь за красный язычок на

задней стороне картриджа с

реагентами и вытащите его

полностью.

3.

Нажать на два фиксатора по бокам

прокалывающего колпачка (серая

часть) и надавить на верхнюю

часть картриджа с реагентами,

пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не

должны быть видны. НЕ

ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для

реагентов прибораACUSTAR и/или BIO-FLASH. После помещения картриджа в

карусель для реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое

смешивание микрочастиц.

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash™ DGP Screen Калибраторы 701111 данного вкладыша.

3.

После

подтверждения

правильности

калибровки

лот

картриджа

с

реагентами,

на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

6

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать Ro52 из панели тестов. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Реагенты QUANTA Flash RNP, кат. № 701118

701118

Для диагностики In Vitro

Назначение

QUANTA Flash RNP - это хемилюминесцентный иммунологический анализ (ХИА) для полуколичественного

определения антител класса IgG к анти рибонуклеопротеину (RNP/РНП) в сыворотке человека. Наличие анти-

РНП антител на ряду с клиническими исследованиями и другими лабораторными тестами может помочь при

диагностике системной красной волчанки (СКВ) и смешанной болезни соединительной ткани (СБСТ).

Общее описание и объяснение анализа

Антинуклеарные антитела (АНА) присутствуют при различных заболеваниях соединительной ткани и по этой

причине выступают в роли чувствительного скринингового исследования.

1

АНА положительная сыворотка крови вступает в реакцию с некоторыми различными ядерными антигенами

включая низкомолекулярные рибонуклеопротеины (snRNP). SnRNP представляют собой РНК протеиновый

комплекс, который связывается с немодифицированным пре-мРНК и другими различными протеинами и

образует сплайсингосому, большой РНК протеиновый молекулярный комплекс, на основании которого

происходит сплайсинг пре-мРНК. SnRNP состоит из низкомолекулярных РНК (snRNA) - U1, U2, U4, U5 и U6, -

а также из группы протеинов называемых Sm рибонуклеопротеинами, которые вместе образуют Sm ядро

малых ядерных нуклеопротеинов (snRNP).

2,3

Sm ядро малых ядерных нуклеопротеинов (snRNP) состояит из

B/B’, D1, D2, D3, E F и G протеинов. Анти-РНП антитела вступают в реакцию в основном с U1 snRNP, их

часто называют анти-U1 РНП антителами. Антигены, с которыми связываются анти-U1 РНП антитела – 70 кДа

протеин, протеин А и протеин С.

2,3

Тем не менее, природный U1-РНП антиген содержит не только эпитопы

либо связующие антитела специфичные к U1 РНП, а также Sm антигены; следовательно, ответ антитела

пациента на отдельные Sm антигены необходимо учитывать при обработке результатов анти-РНП.

Антитела к РНП антигену обнаруживаются в среднем у 25% пациентов с системной красной волчанкой (СКВ),

но они также могут присутствовать при некоторых болезнях соединительной ткани, например, синдроме

Sjögren, при системном склерозе и полимиозите.

3-5

Высокие титры анти-U1 РНП антител очень характерны

для смешанной болезни соединительной ткани (СБСТ).

6-8

Антитела к РНП присутствуют при относительно

доброкачественном течении СКВ, в меньшей степени при заболеваниях почек и центральной нервной системы

(ЦНС).

9

Для определения РНП использовались различные способы включая реакцию двойной иммунодиффузии в гель

по Оухтерлони и пассивную агглютинацию. Также были разработаны клинически пригодные ЭЛИЗА

исследования

для

определения

анти-РНП

антител.

QUANTA

Flash

RNP

высокочувствительный

хемилюминесцентный иммунологический анализ для определения и измерения анти-РНП антител, который

предоставляет полуколичественные результаты в широком диапазоне аналитических мер, с прямым доступом,

постоянной загрузкой образца и коротким временем анализа.

Принципы метода

Природный очищенный РНП находится на поверхности парамагнитных микрочастиц, которые хранятся в

лифоилизированном картридже для реагентов. Когда картридж для анализа готов к первому использованию в

пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и содержимое перемешивается. Затем

картридж с реагентами помещается в прибор «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл

АкуСтар).

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе в отношении 1:17 в одноразовой

пластиковой кювете. Небольшие количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы, покрытые

РНП и буфер для анализа помещаются во вторую кювету и перемешиваются. Данная кювета инкубируется при

температуре 37°C. Затем микрочастицы намагничиваются и несколько раз промываются. После этого антитела

к анти-IgG

человека, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37°C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются. Конъюгат

изолюминола вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов («Триггеров») в кювету.

Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в относительных световых единицах (ОСЕ)

посредством оптической системы «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар).

Результат, выраженный в ОСЕ, пропорционален количеству связанного конъюгата изолюминола, которое, в

свою очередь, пропорционально количеству анти-РНП антител связанных с РНП на микрочастицах.

В

анализе

QUANTA

Flash

RNP

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая для каждой серии, которая загружается в прибор посредством считывания штрих-кода,

нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов анализа двух калибраторов строится

калибровочная кривая для конкретного прибора, которая используется для расчета пересчета ОСЕ в

хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для каждого пациента.

Реагенты

1. Картридж с реагентами QUANTA Flash RNP содержит следующие реагенты для 50 исследований:

a. Парамагнитные микрочастицы, покрытые РНП, лиофилизированные.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис солевой раствор, полисорбат

Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченные изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие буфер, стабилизаторы белка и

консервант.

2. Буфер для ресуспендирования, 1 виала – раствор розового цвета, содержащий буфер, стабилизаторы белка и

консерванты.

Предупреждения

1.

Буфер для анализа содержит химическое вещество (0,02 % хлорамфеникола), которое по данным штата

Калифорния вызывает рак.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть токсичен при принятии

внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид натрия может реагировать со свинцовыми или

медными трубопроводами и образовывать потенциально взрывчатые азиды металлов. Для предотвращения

накопления азида раковины, использованные для утилизации реагента, следует промыть большим количеством

воды.

3. При работе с данными реагентами необходимо пользоваться средствами индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов необходимо соблюдать

все федеральные, государственные и местные экологические нормы.

Меры предосторожности

1. Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в приборе «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или

«ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар).

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для реагентов прибора. При

первом помещении картриджа в прибор следует проявлять осторожность, чтобы избежать проливания

реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки или промывания

прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как формалин, отбеливатель, этанол или детергент

могут повлиять на результаты анализа. Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве

пользователя «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар), должна быть

обязательно выполнена.

Условия хранения

1. Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при температуре 2-8°C. Не

замораживать. При надлежащем хранении и обращении реагенты сохраняют стабильность до истечения срока

годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Программное обеспечение «BIO-

FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар) контролирует даты истечения срока

годности картриджей, находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные

микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие видимые частицы, не должны

использоваться. Образцы содержащие до 10 мг/дл билирубина, 200 мг/дл гемоглобина, 224 мг/дл холестерина

либо 500 МЕ/мл IgM ревматоидного фактора не оказывают влияния на QUANTA Flash RNP.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A3 Института клинических и

лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения для образцов:

1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2)

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в холодильник при

температуре 2-8°C.

3) Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо транспортировать, он

должен быть заморожен при -20°C или более низкой температуре. Замороженные образцы должны быть

хорошо перемешаны после размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения анализа

Предоставляемые материалы

1 Картридж с реагентами QUANTA Flash RNP

1 Буфер для ресуспендирования

1 Прозрачная пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие в комплект поставки

Прибор «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар) с компьютерным

управлением

Ополаскиватель системы «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар)

Триггеры «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар)

Кюветы «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар)

Калибраторы QUANTA Flash RNP (артикул: 701116)

Контроли QUANTA Flash RNP (артикул: 701117)

Использование хемилюминесцентного анализатора «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar»

(ЭйСиЭл АкуСтар)

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором «BIO-FLASH» и/или «ACL AcuStar»

и

программным

обеспечением

изложены

в

руководстве

пользователя,

поставляемом

с

системой

«BIO-

FLASH»®

(БИО-ФЛЭШ)

и/или

«ACL

AcuStar»

(ЭйСиЭл

АкуСтар).

Для

получения

дополнительной

информации и устранения неполадок в связи с данным анализом обратитесь в службу технической поддержки

компании INOVA Diagnostics, Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2. Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов. Извлечь контейнер для

твердых отходов и утилизировать его должным образом. Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть

отсек для отходов и нажать «Yes» в окне «Empty Waste Drawer».

3. Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks» нажать кнопку «Triggers» слева. Появится новое окно с названием «Add

Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе «BIO-FLASH» и/или «ACL AcuStar». Утилизировать все кюветы

в отсеке длясухих отходов. Нажать «Yes» в окне «Empty Waste Drawer». Извлечь триггерные флаконы из

зажимов и нажать кнопку «Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на новые.

Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой маркировки (белая к белому и красная к

красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle». После принятия штрих-

кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После принятия штрих-кода

поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и

закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы «BIO-FLASH» «ACL AcuStar», следует нажать кнопку

«BulksInventory F9» (в верхнем правом углу). На экране «Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В

новом окне

«Add System Rinse – Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне

«Add System

Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует нажать кнопку «Fluid

Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку «Next». После замены пустого флакона

нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие процедуры для

точной

установки

картриджа

на

приборе

«BIO-FLASH»®

(БИО-ФЛЭШ)

и/или

«ACL AcuStar» (ЭйСиЭл

АкуСтар). Примечание: Не используйте картридж с реагентами при наличии признаков повреждения.

1.

Поместите картридж с реагентами на твердую поверхность. Удерживайте на месте картридж с реагентами

одной рукой. Другой рукой крепко возьмите красный язычок на задней стороне картриджа с реагентами и

полностью его удалите.

2.

Нажимая на два фиксатора по бокам прокалывающего колпачка (серая часть) надавите на верхнюю часть

картриджа с реагентами, пока он не окажется в закрытом положении. Язычки больше не должны быть видны.

НЕ ПЕРЕВОРАЧИВАЙТЕ ОТКРЫТЫЙ КАРТРИДЖ.

3. Ресуспендируйте РНП микрочастицы:

a.

Откройте виалу с буфером для ресуспендирования и соберите жидкость прозрачной пипеткой, входящей в

комплект поставки. Все содержимое виалы будет использовано.

b.

Откройте крышку картриджа с реагентами мягко нажав на узкую сторону на картридже с реагентами и

удерживайте его в этом положении. Аккуратно перенесите все содержимое виалы в пробирку с реагентами и

микрочастицами через одиночное отверстие на верхней части картриджа с реагентами.

c.

Перемешайте содержимое пробирки с реагентами и микрочастицами аспирируя и распределяя жидкость

минимум 30 раз. При наличии видимых сгустков частиц продолжайте перемешивать раствор еще 30 раз. Если

микрочастицы не ресуспендировались, НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ КАРТРИДЖ.

d. Убедитесь, что распределили всю жидкость перед извлечением пипетки из пробирки и ее утилизацией.

4. Снимите наклейку с верхней части картриджа с реагентами для того, чтобы открыть другие три отверстия.

5. Поместите картридж с реагентами в любой открытый слот карусели для реагентов прибора «BIO-FLASH»®

(БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар).

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого использования.

Программное обеспечение не позволит использовать новую серию, пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA Flash™ RNP

Calibrators 701116.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на которой проводили

калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1. Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2. Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране или путем сканирования

штрих-кода портативным считывателем штрих-кодов. Сканировать или набрать название образца, выбрать тип

образца, тип контейнера (пробирка/чашка) и выбрать RNP из панели анализа. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить стойку для образцов в

карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана станет зеленым, что

сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок запуска, чтобы начать анализ.

Контроль качества

Контроли QUANTA Flash RNP (продаются отдельно – артикул INOVA 701117) содержат положительный и

отрицательный контроли RNP. Подробные инструкции о том, как вводить единичное значение и стандартное

отклонение каждого контроля в программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA Flash®

RNP Контроли 701117 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать один раз в

каждый день проведения анализа; также следует учитывать национальные/местные нормативные требования.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash RNP рассчитана пятититочечная Обобщающая кривая INOVA.

Параметры логистической кривой зашифрованы в штрих-коде каждого картриджа с реагентами. Во время

калибровки картриджа с реагентами преобразование ОСЕ в ХЕ осуществляется при помощи калибровочной

кривой, специфической для конкретного устройства. После этого реактивность антител к RNP

можно

классифицировать согласно приведенной ниже таблице.

Реактивность образца ХЕ

Отрицательный <20

Положительный ≥ 20

Реактивность, выраженная в ХЕ, непосредственно связана с титром аутоантител в образце пациента.

Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будет отражено в соответствующем повышении

или снижении ХЕ, количество которых пропорционально количеству антител.

Регистрируемый диапазон анализа (установленный по наивысшей и наименьшей точках калибровочной

кривой) составляет от 3.5 ХЕ до 643.8 ХЕ. Если результат пациента будет менее 3.5 ХЕ, система «BIO-

FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар) отобразит его в виде «<3.5 ХЕ». Поскольку

это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если результат пациента будет больше

643.8 ХЕ, система «BIO-FLASH»® (БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар) отобразит его в

виде «>643.8 ХЕ». Этот результат считается положительным. В программном обеспечении «BIO-FLASH»®

(БИО-ФЛЭШ) и/или «ACL AcuStar» (ЭйСиЭл АкуСтар) есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный

анализ). Если эта опция выбрана, прибор будет автоматически производить повторный анализ любого образца,

результат которого превышает 643.8 ХЕ, путем дополнительного разведения его в 10 раз. Фактическое

значение в ХЕ будет рассчитано с учетом дополнительного коэффициента разведения. Поскольку наивысшее

значение, которое может быть измерено равно 643.8 ХЕ, то наивысшее отображаемое значение равно 6438 ХЕ.

Интерпретация результатов

Каждая лаборатория должна установить свой собственный нормальный диапазон на основании собственных

контролей и популяции пациентов согласно процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается, что результаты, полученные лабораторией, должны включать в себя следующие данные:

«Данные результаты получены с помощью хемилюминесцентного иммунологического анализа INOVA

QUANTA Flash® RNP. Значения, полученные с помощью методик анализа разных производителей, не могут

использоваться взаимозаменяемо».

Ограничения методики

1. Не все пациенты, страдающие СКВ, положительны в отношении антител анти-РНП.

2. Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и другими

серологическими тестами.

3. Недостаточное смешивание реагентов перед первым использованием может привести к ошибочным

результатам.

4. Технические характеристики данного анализа не были установлены для матриц, отличных от сыворотки.

Пороговое значение анализа

Пороговое значение анализа было определено путем исследования образцов референтной группы населения

состоящей из 253 человек. Cut-off был определн на >99м процентиле результатов полученных у референтной

группы и был определен как 20 ХЕ.

Ожидаемые результаты

Уровни анти-РНП антител были проанализированы используя

QUANTA Flash RNP

в группе из 101

практически здорового донора крови (71 женщина/30 мужчин в возрасте от 18 до 55 лет, со средним и

медианным возрастом 34 года). Пороговое значение анализа 20 ХЕ, 1 (1 %) образец был положительным на

QUANTA Flash RNP. Среднее значение концентрации было 5.7 ХЕ, значения варьировались от <3.5 до 196.8

ХЕ.

Предел обнаружения

Не существует международного стандарта сыворотки крови для анти-РНП антител, который позволял бы

стандартизировать анти-РНП исследования.

Была исследована контрольная сыворотка из санитарно-эпидемиологического центра для анти-РНП антител

(IS2075 ANA #4 Анти-U1 РНП U1 низкомолекулярный РНП) и получены результаты >643.8 ХЕ.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с использованием 424 образцов пациентов с СКВ и

32 образцов пациентов со смешанной болезнью соединительной ткани (СБСТ). 246 контрольных образцов

было от пациентов с ревматической болезнью, аутоиммунным заболеванием печени и различными

инфекционными заболеваниями.

Результаты клинической чувствительности и специфичности для QUANTA Flash RNP для СКВ SLE (n=146) и

СБСТ (n=32) используя контрольную популяцию (n=246) приведены в следующей таблице:

Клиническая чувствительность и специфичность исследования QUANTA Flash RNP при СКВ:

Клинический анализ

N=392

Диагноз

Анализ (95% Достоверность)

СКВ

Не СКВ/СБСТ

Всего

QUANTA

Flash RNP

Положите

льные

42

12

54

Чувствительность = 28.8% (21.6-

36.8%)

Отрицател

ьные

104

234

338

Специфичность = 95.1% (91.6-97.5%)

Всего

146

246

392

Клиническая чувствительность и специфичность исследования QUANTA Flash RNP при СБСТ:

Клинический анализ

N=278

Диагноз

Анализ (95% Достоверность)

СБСТ

Не СКВ/СБСТ

Всего

QUANTA

Flash RNP

Положите

льные

24

12

36

Чувствительность = 75.0% (56.6-

88.5%)

Отрицател

ьные

8

234

242

Специфичность = 95.1% (91.6-97.5%)

Всего

32

246

278

Распространение заболевания в контрольной группе населения при валидационном исследовании:

Группа пациентов

N

Положительные

Положительный процент

Аутоиммунное заболевание печени

2

0

0%

Склеродермия

76

8

10.5%

Синдром Sjogren's

6

0

0%

Ревматоидный артрит

70

2

2.9%

Полимиозит/дерматомиозит

14

1

7.1%

Другие общие ревматические болезни

48

0

0%

Вирусный гепатит

20

0

0%

Инфекционные заболевания (ВИЧ +

сифилис)

10

1

10%

Всего

246

12

4.9%

Сравнение метода с устройством-образцом

Образцы для анализа сравнения метода включали в себя образцы клинических валидационных исследований

(пациенты с СКВ. СБСТ и другие контрольные заболевания), а также образцы здоровых доноров крови,

которые находились в пределах регистрируемого диапазона анализа. Эти образцы были проанализированы с

помощью анализа QUANTA Flash RNP и эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение методов (N=167)

RNP ELISA

Процентное совпадение

(95% достоверность)

Положител

ьный

Положител

ьный

Полож

итель

ный

QUANTA

Flash™ RNP

ХИА

Положител

ьный

46

6

52

Совпадение положительных

результатов = 80.7% (68.1-90.0%)

Отрицатель

ный

11

104

115

Совпадение отрицательных

результатов = 94.5% (88.5-98.0%)

Всего

57

110

167

Общее соответствие = 89.8% (84.2-

94.0%)

Точность и воспроизводимость

Точность анализа QUANTA Flash RNP была оценена в исследовании 7 образцов содержащих различные

концентрации антител РНП, проведенном в соответствии с руководством CLSI

EP5-A2 Института

клинических и лабораторных стандартов, Оценка точности выполнения процедур количественного измерения

– Одобренное руководство: образцы были измерены в повторностях, дважды в день, минимум в течение 20

дней. Внутри серии, между сериями, через день и общая точность была рассчитана и представлена ниже:

В одном анализе Между анализами

В разные дни

Всего

ID

Образца

СО

%КВ

СО

%КВ

СО

%КВ

СО

%КВ

СО

%КВ

1

92

6.7

0.2

3.5

0.0

0.0

0.4

5.3

0.4

6.4

2

84

24.8

0.9

3.7

0.0

0.0

0.8

3.0

1.2

4.8

3

88

31.6

1.1

3.4

0.7

2.2

2.7

8.5

3.0

9.4

4

92

120.7

4.9

4.1

4.5

3.7

4.5

3.7

8.0

6.6

5

88

218.6

9.3

4.2

7.8

3.6

20.3

9.3

23.6

10.8

6

88

319.5

12.0

3.7

14.0

4.4

11.6

3.6

21.8

6.8

7

96

409.6

19.6

4.8

18.2

4.5

23.3

5.7

35.5

8.7

Аналитический диапазон измерения

Предел обнаружения (ПО) для анализа QUANTA Flash RNP составляет 1129 ОСЕ, что существенно ниже

аналитического диапазона измерения данного анализа. Исследование проведено согласно руководству CLSI

EP17-A с соблюдением ложно положительных (альфа) менее, чем 5% и ложно отрицательных (бета) менее,

чем 5% образцов; основываясь на 140 определениях, с 60 измерениями контрольных проб и 80 измерениями

образцов низкого уровня. ПО составляет 713 ОСЕ.

Аналитический диапазон измерения (АДИ) для данного анализа составляет от 3.5ХЕ до 643.8ХЕ.

Исследование линейности проводили согласно руководству EP6-A CLSI, Оценка линейности процедуры

количественного измерения: Статистический подход, Одобренное Руководство. Пять образцов сыворотки с

различной концентрацией анти-РНП были разбавлены низко отрицательной сывороткой для получения

значений, которые входят в АДИ. Все пять образцов показали уменьшение линейности в отдельности, ниже

представлены сводные данные для линейной регрессии:

Образец

Угол наклона (95% ДИ)

Y-точка пересечения с осью

ординат (95% ДИ)

R

2

Все образцы (n=5)

1.00 (1.00 to 1.02)

-5.17 (-8.27 to -2.07)

1.00

Реагенты QUANTA FLASH Sm,

кат. № 701123

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA FLASH Sm – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный

для полуколичественного определения антител к

Sm класса IgG в сыворотке крови человека.

Наличие антител к Sm может использоваться в сочетании с клиническими данными и другими

лабораторными анализами для облегчения диагностики Системной красной волчанки (СКВ)

Общее описание

Антинуклеарные

антитела

(ANA,

АНА)

обнаруживаются

при

самых

разнообразных

заболеваний

соединительной

ткани

(ЗСТ)

и,

таким

образом

служат

в

качестве

чувствительного скрининга теста

1

.

Положительные в отношении АНА сыворотки могут реагировать с несколькими различными

ядерными антигенами, в том числе с антигеном Смита (Sm). Sm-антиген это комплекс

ядерных

негистоновых

белков,

которые

были

описаны

в

1966

году

и

был

первым

аутоантигенами ядерных белков, которые были описан при СКВ

2,3

.

Антиген, с которым могут

связываться соответствующие антитела к Sm, состоит из серии белков: B; B'; D1; D2: D3; E; F;

и G, в комплексе с небольшими ядерными РНК: U1; U2; U4-6; и U5.

Эти комплексы ядерных

белков и РНК называются малые ядерные рибонуклеопротеидные частицы (мяРНП); они

играют важную роль в процессе сплайсинга предшественника матричной РНК.

Антитела к Sm антигену можно найти в среднем у 5-30% пациентов с СКВ и считают таким же

маркером,

помимо

антител

к

dsDNA

2-5

.

Sm

антитела

были

включены

Американским

колледжем

ревматологии

в

критерии

при

классификации СКВ

6,7

.

Иммунная реакция Sm

состоит во взаимодействии нескольких антител с несколькими антигенами белка. Таким

образом, антитела к

Sm, на самом деле, лучше описать как систему антител. Основные

аутоантигенами при СКВ являются антитела к Sm: D- и B-белки, хотя присутствие антител к

Sm белков D, считается наиболее важным в отношении специфичности

8

.

Разнообразие методов детекции, включая реакцию двойной иммунодиффузии в геле по

Оухтерлони и пассивной агглютинации, были использованы для выявления антител к

Sm.

Клинически полезные ИФА-тесты для обнаружения антител к Sm были также разработаны.

QUANTA

FLASH

Sm,

очень

чувствительны

иммунохемилюминесцентный

тест

для

обнаружения и измерения уровня антител к

Sm, что обеспечивает полуколичественные

результаты

в

широком

аналитическом

диапазоне

измерения,

удобством

произвольного

доступа, непрерывной загрузкой образцов и коротким временем анализа.

Принципы метода

Наптывнй очмщенный Sm антиген иммобилизован на поверхности парамагнитных латексных

микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в лиофилизированном виде.

Когда картридж готов к первому использованию, в пробирку, содержащую микрочастицы,

добавляется

буферный

раствор

и

содержимое

перемешивается.

Затем

картридж

с

реагентами помещается в прибор Acustar и/или BIO-FLASH

®

.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляется

в

приборе,

в

одноразовой

пластиковой кювете, в соотношении 1:17. Небольшое количество разбавленной сыворотки

пациента,

Sm-микрочастицы

и

буфер

для

анализа

помещаются

во

вторую

кювету

и

перемешиваются. Смесь инкубируется при температуре 37

C. Затем микрочастицы

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

После

этого

человеческие

анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы Acustar и/или

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител к

Sm, связанных с Sm-антигеном на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

FLASH

Sm

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая, специфическая для каждой серии, которая заносится в базу прибора посредством

считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора,

которая используется для пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для каждого

образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA FLASH

S

m, содержит следующие реагенты

для проведения 50 тестов:

a.

Парамагнитные микрочастицы, лиофилизированные.

b.

Буфер для анализа – покрашенный в розовый цвет раствор, состоящий из

Трис-буфера, Твин 20, белковых стабилизаторов и консервантов.

c.

Трейсер IgG – Человеческие анти-IgG антитела, связанные с изолюминолом;

буфер, белковые стабилизаторы и консерванты.

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, белковые стабилизаторы и консерванты.

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе Acustar и/или BIO-

FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

5.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

Acustar и/или BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе, где они сохраняют

стабильность, по истечении которых должны быть утилизированы. Программное

обеспечение Acustar и/или BIO-FLASH контролирует даты истечения срока

годности картриджей, находящихся в приборе, а также серий картриджей с

реагентами.

Сбор образцов

Данная

п р о ц е д у р а

д о л ж н а

осуществляться

с

образцом

с ы в о р о т к и

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

в и д и м ы е

частицы,

не

должны

использоваться.

Н е

допускается

и с п о л ь з о в а н и е

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

Образцы, содержащие до 10 мг/дл билирубина,

200мг/дл гемоглобина, 1000мг/дл триглицеридов, или 500 МЕ/мл ревматоидный фактор не

влияют на результаты QUANTA

Sm.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов:

1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2)

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

C.

3)

Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более низкой температуре.

Замороженные образцы должны быть хорошо перемешаны после размораживания и до

проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

1

1

Картридж с реагентами QUANTA FLASH

Sm Буфера для ресуспендирования

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор Acustar и/или BIO-FLASH с компьютерным модулем

Промывочный раствор Acustar и/или BIO-FLASH

Триггеры Acustar и/или BIO-FLASH

Кюветы Acustar и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Sm (кат номер: 701121)

Контроли QUANTA FLASH Sm (кат номер: 701122)

Использование хемилюминесцентного анализатора Acustar и/или BIO-FLASH

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализаторо Acustar и/или

BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве пользователя,

3

1.

поставляемом с системой Acustar и/или BIO-FLASH. Для получения дополнительной

информации и устранения неполадок, связанных с данным тестом, обратитесь в

службу

технической

поддержки

компании

INOVA

Diagnostics,

Inc.

по

адресу

или

телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе Acustar и/или BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и поменять их на новые.

Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой маркировки

(белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы Acustar и/или BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране

«Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System Rinse –

Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При

первом

использовании

картриджа,

для

правильной

установки

картриджа

в

анализатор

Acustar и/или BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание: Не

используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать Sm микрочастицы:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

Если

микрочастицы

не

ресуспендируются,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

ДАННЫЙ

КАРТРИДЖ.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

других отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора Acustar и/или BIO-FLASH.

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash Sm Калибраторы 701121 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки лот картриджа с реагентами, для

которого проводили калибровку, готов к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране,

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать Sm из панели тестов. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Контроль качества

Контрольные материалы QUANTA FLASH Sm (продаются отдельно - номер позиции INOVA

701122) содержат положительный и отрицательный контроли Sm. Подробные инструкции о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA FLASH Sm Контроли

701122 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать один раз в

каждый день проведения анализа.

Расчет результатов

Для

каждой

новой

серии

QUANTA

FLASH

Sm

рассчитана

шеститочечная

обобщающая

кривая. Данная параметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-коде каждого

картриджа

с реагентами.

После

калибровки

картриджа

с реагентами

преобразование

ОСЕ

в

Х Е

о с у щ е с т в л я е т с я

п р и

п о м о щ и

к а л и б р о в о ч н о й

к р и в о й ,

с п е ц и ф и ч н о й

д л я

конкретного

устройства.

П о с л е

э то г о

р е а к т ив н о с т ь

антител к

Sm можно

к ла с с иф и ц и р о в а т ь

согласно

приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с титром

аутоантител

в

образце

пациента.

Увеличение

и уменьшение

концентрации

антител

у

пациента

будет

отражено

в

с о о т в е т с т в у ю щ е м

п о в ы ш е н и и

и л и

с н и ж е н и и

Х Е ,

к о л и ч е с т в о

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый диапазон теста составляет от 3.3 ХЕ до 693.5 ХЕ. Если результат пациента

будет менее 3.3 ХЕ, то система Acustar и/или BIO-FLASH отобразит его в виде «<3.3 CU».

Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если

результат пациента будет больше 693.5 ХЕ, система Acustar и/или BIO-FLASH

отобразит его

в виде «>693.5 CU». Этот результат считается положительным. В программном обеспечении

Acustar и/или BIO-FLASH есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный анализ). Если

эта опция выбрана, прибор будет автоматически производить повторный анализ любого

образца, результат которого превышает 693.5 ХЕ, путем дополнительного разведения его в

10

раз.

Фактическое

значение

в

ХЕ

будет

рассчитано

с

учетом

дополнительного

коэффициента разведения.

Интерпретация результатов

Результаты теста

QUANTA

Flash

могут иметь небольшие различия между популяциями

пациентов. Для каждой лаборатории рекомендуется подтверждать нормальный диапазон,

указанный производителем. Также, лаборатория может установить свой собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается, что результаты, полученные лабораторией, должны включать в себя

следующее утверждение: «Данные результаты получены с помощью

иммунохемилюминесцентного теста

INOVA

QUANTA

Flash

S

m. Значения, полученные с

помощью тестов разных производителей, не могут использоваться взаимозаменяемо.

Указанные значения содержания аутоантител не всегда соотносятся с титром конечной

точки».

Ограничения методики

1.

Не все пациенты, страдающие СКВ, положительны по Sm антителам.

2.

Результаты данного теста следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное ресуспендирование

Sm микрочастиц может привести

к получению

меньших значений, чем при должном ресуспендировании.

4.

Технические характеристики данного теста были установлены только для сыворотки

крови.

Cut-off

Исследование

в

отношении

значения

cut-off

(порога

отсечки)

было

проведено

путем

исследования образцов от референсной популяции 232 референсных субъектов. Значения

порога отсечки была установлена по результатам на > 99м процентиле, полученными у

референской группы, и было установлено значение 20 ХЕ.

Ожидаемые значения

Уровень аутоантител к Sm были проанализированы на панели 101 здорового донора крови

(71 женщина и 30 мужчин в возрасте от 18 до 55 лет, обычный средний возраст - 34 года) с

использованием QUANTA Flash Sm. С порогом отсечки 20 ХЕ, 1 (1,0%) образцов были

положительными на QUANTA Flash Sm. Средняя концентрация составила 3.6 ХЕ, а значения

в диапазоне от <3.3 до 20.5 ХЕ.

Прослеживаемость

В

настоящее

время

нет

международной

стандартной

сыворотки

для

стандартизации

исследования уровня антител к Sm. Была протестирована референсная сыворотка из Центра

по контролю и профилактике заболеваний (IS2076 ANA #5 anti-Sm), по результатам такого

тестирования, были получены следующие результаты >693.5 ХЕ.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое исследование с использованием 378 образцов, включая 146

образцов от пациентов с СКВ. Как контроль, мы включили 233 образца от пациентов с

другими ревматическими заболеваниями, аутоиммунными заболеваниями печени, а также

образцы положительными в отношении маркеров различных инфекционных заболеваний.

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Sm при СКВ (n=146),

используя контрольную группу (n=223), представлены в таблице ниже:

Клинический анализ

n = 379

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СКВ

Нет СКВ

Всего

QUANTA

Flash

®

Sm

Положительных

21

5

26

Чувствительность =

14.4% (9.1-21.1%)

Отрицательных

125

228

353

Специфичность =

97.9% (95.1-99.3%)

Всего

146

233

379

Распределение

заболеваний

в

контрольной

популяции,

используемых

в

валидационном

исследовании:

Группа пациентов

Кол-

во

Положительные

Процент

положительных

Аутоиммунные заболевания печени

Вирусные гепатиты

Склеродерма

Синдром Шегрена

Ревматоидный артрит

Системные

ревматические

заболевания,

другие

МЕфекционные заболевания (ВИЧ + сифилис)

2

19

74

5

70

53

10

0

0

3

0

0

1

1

0%

0%

4,1%

0%

0%

1,9%

10%

Всего

233

5

2,1%

Сравнение метода

Образцы

для

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований

(СКВ

и

контроля

заболевания),

а

также

образцы

из

допущенных

к

исследованию и здоровых доноров крови с результатов в AMR анализа. Эти образцы были

проанализированы с помощью теста QUANTA Flash Sm и ИФА.

Сравнение методов

(N=19)

Sm ELISA

Анализ

(95% достоверность)

Отриц.

Положит.

Всего

QUANTA

Flash

Sm

Положительных

35

6

41

Положительное согласование =

92,1% (78,6–98,3%)

Отрицательных

3

75

78

Отрицательное согласование =

92,6% (84,6–97,2%)

Всего

38

81

119

Общее согласование =

92,4% (86,1–96,5%)

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость теста QUANTA Flash Sm была оценена с использованием 5 образцов сыворотки,

содержащие различные концентрации Sm антител в соответствии с CLSI EP5-A2, Оценка

точности

исполнения

количественных

методик

выполнения

измерений

Утвержденное

руководство: обследование образцов в двух экземплярах, два раза в день, по крайней мере

не менее 20 дней. Результаты исследования представлены ниже:

Воспроизво

димость

Точность

между

прогонами

Точность

между днями

Общая

точность

Образец

N

Средне

е

значен

ие (ХЕ)

SD

%CV

SD

%CV

SD

%CV

SD

%CV

1

80

13,1

0,9

6,5

0,2

1,5

0,78

5,6

1,1

8,7

2

80

22,0

2,1

9,7

1,0

4,6

0,9

4,2

2,5

11,5

3

84

93,0

6,0

6,4

0,5

0,5

4,8

5,2

7,7

8,3

4

88

237,7

20,6

8,7

16,8

7,1

6,4

2,7

27,3

11,5

5

84

338,6

18,1

5,3

9,9

2,9

19,7

5,8

28,5

8,4

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

Нижний предел обнаружения данного теста равен 560 ОСЕ, что равнозначно 0,4 ХЕ, что

значительно ниже регистрируемого диапазона. Верхний предел обнаружения данного теста

равен 1,100,000 ОСЕ, что приблизительно на 340% выше регистрируемого диапазона (РД).

Весь РД 3,8 ХЕ – 969,8 ХЕ является линейным. Исследование на линейность проводили в

соответствии с CLSI EP6-A, были получены следующие результаты:

Предел обнаружения (LoD) для анализа QUANTA Flash Sm составляет 803 ОСЕ, которая

находится ниже аналитического диапазона измерения. Было установлено, что в соответствии

с CLSI EP17-A руководству о пропорции ложно положительных (альфа) меньше, чем 5% и

ложно отрицательных (бета) меньше, чем 5%; на основе 140 определений, с 60 измерений на

холостых пробах и 80 измерений образцов низкого уровня. LoD составил 540 ОСЕ.

Аналитический

диапазон

измерения

(AMR)

из

анализа

составляет

3,3

ХЕ

в

693,5

ХЕ.

Линейность AMR оценивали с помощью исследования, в соответствии с CLSI EP6-A, Оценка

линейности

количественных

методик

выполнения

измерений:

статистический

подход;

Утвержденное руководства. Пять образцов сыворотки с различными концентрациями Sm

антитела были разбавлены с низкой отрицательной сывороткой для получения значений,

которые

охватывают

AMR.

Все

образцы

показали

линейность

по

отдельности,

и

по

объединенным данным были получены следующие результаты по линейной регрессии:

Образец

Отклонение (95%

доверительный интервал)

Y – точка пересечения с осью

ординат (95 % доверительный

интервал)

Все

образцы

(n=5)

0,99 (0,97-1,00)

0,81 (-3,2-4,8)

0,99

Реагенты QUANTA Flash CCP3,

кат. № 701125

Для диагностики In Vitro. Уровень сложности по закону CLIA:

Умеренный

701125

Отпускается

по рецепту

Назначение

QUANTA

Flash

CCP3

представляет

собой

реагент

для

иммунохемилюминесцентного

анализа,

предназначенного для полуколичественного определения уровня антител класса IgG к циклическому

цитруллинированному пептиду CCP3 в сыворотке человека. Наличие антител к CCP3 в сочетании с

результатами клинических обследований и других лабораторных анализов способствует диагностике

ревматоидного артрита.

Сводная информация и описание анализа

Ревматоидный

артрит

(РА)

-

это

хроническое

воспалительное

заболевание,

характеризующееся

отеком суставов, болезненными ощущениями в суставах и разрушением синовиальных соединений,

поражающее примерно 0,5% населения мира.

1

До недавнего времени его диагностировали на основе

критериев

классификации

Американской

коллегии

ревматологов

(ACR),

ранее

именовавшейся

Американской ассоциацией по изучению ревматизма, для ревматоидного артрита, принятых в 1987

году

2

,

в

соответствии

с

которыми

единственным

серологическим

маркером

для

диагностики

РА

являлся ревматоидный фактор (РФ). Однако РФ также может обнаруживаться у людей с инфекциями,

другими аутоиммунными заболеваниями и у некоторых здоровых людей.

3, 4

Давно известно, что у людей с РА обнаруживается антиперинуклеарный фактор, также называемый

антикератиновыми аутоантителами.

5

В 1998 году было обнаружено, что эти антитела распознают

эпитоп, который содержит деамидированную форму аргинина, называемую цитруллином.

6,

7

Было

обнаружено, что антитела к циклическому пептиду, содержащему цитруллин, называемому CCP

(циклический цитруллинированный пептид), позволяют лучше отличить пациентов с РА от других

пациентов,

чем

тесты

на

перинуклеарный

фактор

или

тесты

на

РФ.

5-10

Антитела

к

цитруллинированным белкам/пептидам (ACPA), как правило, имеют более высокую чувствительность,

чем

РФ

на

ранней

стадии

РА,

лучшую

специфичность

и

хорошую

прогностическую

ценность.

10

Антитела

некоторых

пациентов

с

РА,

которые

при

проведении

наиболее

широко

используемых

анализов на антитела к CCP2 (второе поколение) получили отрицательный результат, реагируют с

другими цитруллинированными белками

11-14

, что указывает на наличие дополнительных эпитопов,

которые отсутствуют в последовательности антигена CCP второго поколения.

Было

признано,

что

раннее

терапевтическое

вмешательство

улучшает

клинические

исходы

и

уменьшает

совокупное

повреждение

суставов

и

вероятность

инвалидности.

15

Критерии

классификации ACR 1987 года для РА подвергались критике за их недостаточную чувствительность

на ранних стадиях заболевания. В 2010 году в результате совместной инициативы Американской

коллегии

ревматологов

и

Европейской

лиги

против

ревматизма

был

опубликован

новый

набор

критериев классификации

16

, в котором ACPA были включены в качестве одного из серологических

маркеров

в

дополнение

к

РФ,

а

также

была

произведена

дифференциация

между

низкими

положительными и высокими положительными уровнями ACPA и РФ.

16

Пептидный антиген CCP третьего поколения, используемый в реагенте QUANTA Flash CCP3, был

разработан путем тестирования большого количества пациентов с РА и контрольных субъектов с

различными

цитруллинированными

пептидами.

17,

18

QUANTA

Flash

CCP3

-

это

реагент

для

высокочувствительного иммунохемилюминесцентного анализа, предназначенного для выявления и

измерения уровня антител к CCP3, который позволяет получить полуколичественные результаты в

широком диапазоне аналитических измерений, и обеспечивает такие удобства как произвольный

доступ, непрерывная загрузка образца и быстрота проведения анализа.

Принципы процедуры

Синтетический

циклический

цитруллинированный

пептид

наносится

на

парамагнитные

шарики,

которые хранятся в картридже с реагентами в лиофилизированном состоянии. Когда картридж для

анализа готов к первому использованию, в пробирку, содержащую шарики, добавляют буферный

раствор, и шарики повторно растворяются в буфере. Затем картридж с реагентами помещают в

анализатор ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

В анализаторе образец сыворотки пациента разводят в пропорции 1:17 в одноразовой пластмассовой

кювете. Небольшие количества разведенной сыворотки пациента, шарики с CCP3 и аналитический

буфер помещают во вторую кювету и перемешивают.

Эта кювета подвергается инкубации при температуре 37°C. После этого шарики намагничивают и

несколько

раз

промывают.

Затем

в

кювету

добавляют

антитело

IgG,

конъюгированное

с

изолюминолом, после чего происходит инкубация при температуре 37°C. После этого шарики снова

намагничивают и несколько раз промывают. При добавлении в кювету реагентов-триггеров. конъюгат

изолюминола вступает в реакцию хемилюминесценции. В оптической системе анализатора BIO-

FLASH

интенсивность

света,

излучаемого

в

ходе

этой

реакции,

измеряется

и

выражается

в

относительных световых единицах (ОСЕ). Интенсивность света в ОСЕ пропорциональна количеству

связанного конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител к

CCP3, связанных с CCP3 на шариках.

При количественном определении уровня антител к CCP3 с помощью реагента QUANTA Flash CCP3

используется специально построенная для каждой конкретной серии реагента эталонная кривая. Эта

кривая

в

числовом

виде

загружается

в

анализатор

при

считывании

штрихкода

с

картриджа

с

реагентами.

На

основе

эталонной

кривой

и

результатов,

полученных

при

использовании

двух

калибраторов, строится рабочая кривая для конкретного прибора, которая используется для расчета

значения,

выражаемого

в

хемилюминесцентных

единицах

(ХЕ),

по

значению,

выраженному

в

относительных световых единицах (ОСЕ) для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash CCP3 содержит следующие реагенты в количестве,

необходимом для проведения 100 тестов:

a.

Парамагнитные шарики, покрытые CCP3, лиофилизированные.

b.

Аналитический буфер розового цвета, содержащий стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Меченный

IgG

антитело

к

человеческому

иммуноглобулину

IgG,

меченное

изолюминолом, со стабилизаторами белка и консервантом.

2.

Буфер

для

повторного

растворения

(6),

1

флакон,

бесцветный,

содержащий

буфер,

стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

В качестве консерванта используется азид натрия. Азид натрия ядовит и может оказывать

токсичное воздействие на организм при попадании на кожу или в глаза. Азид натрия может

вступать

в

реакцию

с

свинцовыми

или

медными

трубами

с

образованием

потенциально

взрывоопасных

азидов

металлов.

Чтобы

предотвратить

накопление

азидов,

тщательно

промойте раковины, используемые для утилизации реагентов, большим количеством воды.

2.

При работе с имеющимися реагентами используйте соответствующие средства индивидуальной

защиты.

3.

В

случае

утечки

реагентов

необходимо

немедленно

произвести

чистку.

Соблюдайте

все

действующие федеральные, государственные и местные нормы и правила по утилизации

отходов.

Меры предосторожности

1.

Продукт предназначен для диагностики In Vitro.

2.

Продукт предназначен только для работы с анализатором ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

3.

Необходимо строго соблюдать протокол повторного растворения.

4.

После

вскрытия

картридж

с

реагентами

должен

храниться

на

карусельном

штативе

для

реагентов. Соблюдайте осторожность и оберегайте реагенты от случайной утечки при первой

установке картриджа с реагентами в анализатор.

5.

В результате неправильной чистки или промывки анализатора возможно химическое загрязнение

реагентов. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как формалин, отбеливатель,

этанол или моющее средство, могут создавать помехи при работе прибора-анализатора. Строго

соблюдайте

рекомендуемую

процедуру

чистки,

описанную

в

руководстве

по

эксплуатации

анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Условия хранения

1.

Закрытые картриджи с реагентами и буфером для повторного растворения следует хранить при

температуре 2-

2.

При

условии

соблюдения

требований

к

хранению

и

обращению

реагенты

сохраняют

стабильность до истечения срока годности.

3.

Открытые картриджи с реагентами следует хранить в анализаторе. Программное обеспечение

анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH контролирует срок годности реагентов, находящихся

в анализаторе во время их использования, и общий срок годности (дату окончания срока

годности)

серии,

указанной

на

картридже

с

реагентами.

Система

не

будет

работать

с

картриджами, срок годности которых истек.

Сбор образцов, приготовление и хранение

Ниже

описана

процедура,

выполняемая

с

образцами

сыворотки.

Категорически

запрещается

использовать

образцы,

загрязненные

микроорганизмами,

образцы,

прошедшие

термическую

обработку, или образцы, содержащие видимые частицы примесей. Образцы, содержащие до 10 мг/дл

билирубина, 200 мг/дл гемоглобина, 1000 мг/дл триглицеридов и 224 мг/дл холестерина не создают

помех при проведении анализа QUANTA Flash CCP3.

После сбора образцы сыворотки должны быть отделены от сгустков крови. Образцы рекомендуется

хранить в следующих условиях:

1.

Образцы могут храниться при комнатной температуре в течение максимум 48 часов.

2.

Образцы могут храниться при температуре 2-8 °C в течение максимум 14 дней.

3.

Если анализ не будет завершен в течение 14 дней, или если планируется транспортировка

образца, допускается замораживание образцов до температуры -20 °C или ниже. Образцы

могут замораживаться с последующей разморозкой до 3 раз. После размораживания, перед

проведением анализа, замороженные образцы следует тщательно перемешать.

Описание процедуры

Комплект поставки

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash CCP3

2.

Буфер (6) для повторного растворения

3.

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, подключенный к персональному компьютеру;

Раствор для промывки гидравлической системы анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Растворы-триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash CCP3 (артикул: 701126)

Контроли QUANTA Flash CCP3 (артикул: 701127)

Применение хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные

инструкции

по

работе

с

системой

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

приведены

в

руководстве по эксплуатации хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

и в руководстве по программному обеспечению для анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Для получения дополнительной информации и устранения неполадок, связанных с анализом,

обратитесь в техническую службу Inova Diagnostics, Inc. по адресу или номеру телефона,

указанному в конце настоящего документа.

2.

Чтобы

опорожнить

контейнер

для

твердых

отходов,

откройте

ящик

для

отходов.

Удалите

контейнер для твердых отходов и утилизируйте использованные кюветы надлежащим образом.

Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и нажмите кнопку Yes

(«Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнение ящика для отходов»).

3.

Чтобы

заменить

реагенты-триггеры,

нажмите

кнопку

Bulks

Inventory

F9

(«Инвентарь

Бестарный») (вверху справа).

a.

В

окне

Inventory

Bulks

(«Инвентарь

Бестарный»)

нажмите

кнопку

Triggers

(«Триггеры») слева. Откроется новое всплывающее окно Add Triggers – Remove old

bottles («Добавить триггеры – Удалить старые флаконы»).

b.

Откройте ящик для отходов и удалите отходы из прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Утилизируйте все кюветы, находящиеся в ящике для сухих отходов. Нажмите кнопку Yes

(«Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнить ящик для отходов»). Удалите флаконы

из-под раствора-триггера из держателей и нажмите кнопку Next («Далее»). Отвинтите

колпачки от старых флаконов для растворов-триггеров и установите новые флаконы с

растворами-триггерами. Выполняйте эту операцию для каждого флакона по отдельности,

соблюдая цветовую кодировку колпачков (белый колпачок к белому флакону, красный – к

красному).

c.

Следуйте инструкциям, выводимым в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 2»). После считывания и проверки

штрихкода поместите флакон с триггером 2 в держатель белого цвета. Нажмите кнопку

Next («Далее»).

d.

Следуйте инструкциям, выводимым в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle («Добавить

триггеры – Добавить флакон с триггером 1»). После считывания и проверки штрихкода

поместите флакон с триггером 1 в держатель красного цвета. Нажмите кнопку Finish

(«Готово»). Установите ящик для отходов на место и закройте его.

4.

Чтобы заменить контейнер

для промывочного

раствора

Bulks Inventory F9 («Инвентарь

Бестарный») (в верхнем правом углу). В окне Inventory – Bulks («Инвентарь – Бестарный»)

нажмите кнопку Sys. Rinse («Промывочный раствор»). В новом окне Add System Rinse –

Remove bottles («Добавить раствор для промывки – удалить флаконы») нажмите кнопку Next

(«Далее»). Следуйте инструкциям, выводимым в новом окне Add System Rinse – Add bottle

(«Добавить промывочный раствор – Добавить флакон»). После считывания и проверки

штрихкода, если требуется, нажмите кнопку Finish («Готово»).

5.

Чтобы опорожнить контейнер для жидких отходов, в окне Inventory – Bulks («Инвентарь –

Бестарный»)

нажмите

кнопку

Fluid

Waste

(«Жидкие

отходы»).

Удалите

жидкие

отходы

и

утилизируйте их надлежащим образом. Нажмите кнопку

Next («Далее»). После

установки

пустого флакона на место нажмите кнопку Finish («Готово»).

Описание методики анализа

Подготовка картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо тщательно соблюсти все

описанные ниже указания по правильной установке картриджа в анализатор ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH. Примечание: Запрещается использовать картридж, имеющий признаки повреждения.

1.

Поместите картридж с реагентами на твердую

поверхность. Придерживайте его рукой. Второй

рукой

потяните

за

красный

язычок,

находящийся

на

задней

части

корпуса

картриджа, и достаньте его полностью.

2.

Нажав

на

два

выступа

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(деталь

серого

цвета), надавите на верхнюю часть картриджа с

реагентами таким образом, чтобы он опустился

вниз и зафиксировался до щелчка. Теперь эти

выступы

больше

не

будут

видны.

ЗАПРЕЩАЕТСЯ

ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ

ВСКРЫТЫЙ КАРТРИДЖ!

3.

Повторное растворение микрочастиц CCP3:

a.

Снимите

колпачок

с

флакона

с

буфером

для

повторного

растворения

и

наберите жидкость в пипетку, входящую в

комплект

поставки.

Следует

использовать

все содержимое флакона.

b.

Сдвиньте

крышку

картриджа

с

реагентами в открытое положение, слегка

нажав

на

узкую

часть

картриджа

с

реагентами,

и

удерживайте

ее

в

этом

положении.

Аккуратно

перенесите

все

содержимое

флакона

в

пробирку

с

реагентами

с

микрочастицами

через

единственное

отверстие

в

верхней

части

картриджа с реагентами.

c.

Перемешайте содержимое пробирки с

реагентами с микрочастицами, всасывая и

выпуская жидкость из пипетки не менее 30

раз

подряд.

Если

после

перемешивания

наблюдаются сгустки шариков, продолжайте

перемешивание раствора еще не менее 30

раз.

Если

суспензия

из

микрочастиц

не

образовалась,

КАРТРИДЖ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ НЕЛЬЗЯ!

d.

Перед

извлечением

пипетки

из

пробирки используйте всю жидкость. После

этого утилизируйте пипетку.

4.

Снимите наклейку с верхней части картриджа реагента, открыв еще три отверстия.

5.

Поместите картридж с реагентами в открытое гнездо на карусельном штативе анализатора

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Калибровка перед началом анализа

1.

Перед первым применением новой серии картриджей реагента следует произвести калибровку.

Программное обеспечение не допустит новую серию реагентов к работе без калибровки.

2.

Подробные

инструкции

по

калибровке

картриджа

с

реагентами

приведены

в

разделе

«Калибраторы QUANTA Flash

®

CCP3, артикул 701126» данного листка-вкладыша.

3.

После валидации калибровки картридж с реагентами, прошедший калибровку, будет готов к

работе.

Программирование и введение образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist («Рабочий список») в верхней части окна и выберите вкладку Racks

(«Стойки») в нижней части окна.

2.

Выберите

нужную

стойку

для

образца,

выделив

его

на

экране

или

путем

считывания

ее

штрихкода

специальным

ручным

считывателем.

Отсканируйте

или

введите

с

клавиатуры

название образца, выберите тип образца (пробирка/чашка) и выберите на панели анализов

опцию «CCP3». Повторите эти действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные гнезда на стойке для образцов, а затем вставьте стойку в

карусельный штатив анализатора.

4.

После того как все требуемые материалы будут помещены в анализатор, ярлык запуска анализа

в верхней части экрана компьютера станет активным (зеленый цвет). Чтобы начать анализ,

нажмите кнопку Start («Пуск») F4.

Контроль качества

Контроли QUANTA Flash CCP3 (приобретаются отдельно, артикул Inova 701127) содержат материалы

для положительного и отрицательного контроля антител к CCP3. Подробные инструкции по вводу

всей необходимой информации для каждого контроля в программу и по работе с контролями описаны

в

разделе

«Контроли

QUANTA

Flash®

CCP3,

артикул

701127»

данного

листка-вкладыша.

Рекомендуется использовать контроли один раз в день каждый день проведения анализов. Однако

следует соблюдать действующие указания местных или государственных норм и правил.

Получение результатов

Для каждой новой серии реагента QUANTA Flash CCP3 составлена специальная эталонная кривая по

семи точкам. Параметры этой кривой закодированы в штрихкоде, который нанесен на корпусе каждого

картриджа с реагентами. При калибровке, на основании эталонной кривой строится индивидуальная

рабочая кривая для каждого анализатора. Она используется для перевода значений из относительных

световых единиц (ОСЕ) в хемилюминесцентные единицы (ХЕ). Реакционная способность антитела к

CCP3 определяется по приведенной ниже таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательный результат

<20

Положительный результат

20

Реакционная способность в единицах ХЕ прямо пропорциональна титру аутогенных антител в образце

сыворотки пациента. Увеличение или уменьшение концентрации аутогенных антител в сыворотке

пациента отражается соответствующим увеличением или уменьшением значения в единицах ХЕ,

пропорционального количеству антител.

Диапазон аналитических измерений (ДАИ) для данного анализа, определяемый низшей и высшей

точками на эталонной кривой, находится в пределах от 4,6 до 2776,8 ХЕ, и в этих пределах результат

анализа

является

прямо

пропорциональным

уровню

антител.

Если

результат,

полученный

для

пациента, не превышает 4,6 ХЕ, анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст результат «<4,6

ХЕ».

Поскольку

этот

результат

меньше

20

ХЕ,

он

считается

отрицательным.

Если

результат,

полученный для пациента, превышает 2776,8 ХЕ, анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст

результат «>2776,8 ХЕ». Он будет считаться положительным. Программное обеспечение имеет

функцию

автоматического

повторного

анализа.

При

выборе

этой

функции

анализатор

выполнит

автоматический

повтор

анализа,

который

ранее

выдал

результат

«>2776,8

ХЕ»,

выполнив

дополнительное 20-кратное разведение образца, что позволит перенести измеряемое значение в

пределы ДАИ. Затем программа выдаст окончательный результат. Поскольку значение 2776,8 ХЕ

является максимально возможным, то максимальное значение в таком случае будет составлять 55536

ХЕ.

Интерпретация результатов

Каждой

лаборатории

рекомендуется

проверять

предоставленный

производителем

референтный

диапазон и устанавливать свой собственный нормальный диапазон на основе своих собственных

контролей

и

популяции

пациентов

в

соответствии

со

своими

собственными

установленными

процедурами.

Предполагается,

что

результаты,

представленные

лабораторией,

должны

включать

следующие

сведения:

«Указанные

результаты

были

получены

с

помощью

реагента

для

иммунохемилюминесцентного

анализа

QUANTA

Flash

CCP3.

Значения,

полученные

с

помощью

методов, разработанных разными производителями, не являются взаимозаменяемыми».

Ограничения

1.

Данный

комплект

следует

использовать

исключительно

в

диагностических

целях.

Положительный

результат

свидетельствует

о

наличии

РА,

но

этот

вывод

должен

быть

подтвержден

результатами

клинических

обследований

и

другими

диагностическими

анализами.

2.

Результаты,

полученные

при

проведении

данного

анализа,

не

являются

диагностическим

доказательством наличия или отсутствия болезни.

3.

Неправильное

повторное

растворение

(суспендирование)

шариков,

покрытых

CCP3,

может

привести к получению более низких результатов, чем в случае правильного растворения.

4.

Рабочие характеристики этого анализа не были разработаны для других образцов, отличных от

образцов сыворотки.

5.

Помехи, связанные с наличием у пациента ревматоидного фактора, не исследовались.

Референтный диапазон

Порог отсечки результатов анализа был определен путем анализа 209 образцов, полученных от

референтных

субъектов.

В

их

количество

вошли

169

субъективно

здоровых

доноров

крови,

20

субъектов с аутоиммунным тиреоидитом, 13 субъектов с гепатитом B и 7 с гепатитом C (о чем

свидетельствовали положительные результаты серологических исследований). Порог отсечки был

установлен

на

уровне,

превышающем

99-ый

процентиль,

по

результатам,

полученным

от

референтных субъектов. Ему соответствует значение, составляющее 20 ХЕ.

Прогнозируемые значения

Уровни антител к CCP3 анализировались с помощью анализа QUANTA Flash CCP3 группы, состоящей

из 146 субъективно здоровых доноров крови (80 мужчин/66 женщин в возрасте от 17 до 60 лет, при

среднем и медианном возрасте 34 года). При пороге отсечки, составляющем 20,0 ХЕ, один образец

(0,7%) находился в диапазоне положительных результатов анализа QUANTA Flash CCP3. Медианная

концентрация составляла <4,6 ХЕ, а диапазон значений – от <4,6 до 31,1 ХЕ.

Прослеживаемость

Отсутствуют какие-либо международные стандарты, регламентирующие уровень антител к CCP в

анализах на определение уровней антител к CCP.

Результаты напрямую прослеживаются в соответствии с внутренними стандартами для эталонной

кривой.

Гармонизация с эталонным реагентом, утвержденным Центром

по контролю и профилактике заболеваний США (CDC)

Тест с использованием эталонного реагента, утвержденного CDC, для антител к цитруллинированным

б е л к а м / п е п т и д а м

(ACPA) (Артикул IS2723,

номер лицензии 08-0202),

позволил получить среднее

значение, составляющее 379,5 ХЕ.

С

использованием

з а д а н н о г о

з н а ч е н и я

концентрации

э т а л о н н о г о

м а т е р и а л а

(100

ЕД/мл)

была

у с т а н о в л е н а

корреляция между значениями,

выраженными в

ХЕ и значениями, выраженными в

единица концентрации (ЕД/мл). На основании полученной корреляции, программное обеспечение

анализатора выполняет автоматический перевод значений уровня CCP3 из ХЕ в единицы

концентрации (ЕД/мл).

Порог отсечки, составляющий 20 ХЕ, соответствует 5,3 ЕД/мл.

Клиническая чувствительность и специфичность

В ходе клинического валидационного исследования было использовано 728 образцов: 352 образца от

пациентов с РА и 376 от контрольных пациентов. Контрольная популяция включала в себя пациентов

с различными ревматическими, аутоиммунными и инфекционными заболеваниями, и не включала в

себя здоровых субъектов.

Результаты клинического исследования чувствительности и специфичности анализа QUANTA Flash

CCP3

Клиническое исследование (N =

728)

Диагноз

Анализ (доверительный интервал

95%)

РА

Нет РА

Итого

QUANTA

Flash® CCP3

Положительный

результат

249

13

262

Чувствительность = 70,7% (65,8-

75,2%)

Отрицательный

результат

103

363

466

Специфичность = 96,5% (94,2-98,0%)

Итого

352

376

728

Распределение заболеваний в контрольной популяции, и частота получения положительного

результата анализа на антитела к CCP3

Группа пациентов

N

Кол-во положит. рез-тов.

Доля положит. рез-тов. (%)

Анкилозирующий спондилоартрит

13

0

0,0%

Вирус гепатита B

22

0

0,0%

Вирус гепатита C

13

0

0,0%

Остеоартрит

49

2

4,1%

Ревматическая полимиалгия

20

2

10,0%

Псориатический артрит

14

1

7,1%

СКВ

53

2

3,8%

Парвовирус

12

0

0,0%

Сальмоннеллез

10

0

0,0%

Болезнь Лайма

25

0

0,0%

Язвенный колит (ЯК)

11

0

0,0%

Аутоиммунный гепатит (АИГ)

19

1

5,3%

Целиакия (ГЦ)

20

1

5,0%

Синдром Шегрена

20

0

0,0%

Прочие болезни

75

4

5,3%

Общая численность контрольной

группы заболеваний

376

13

3,5%

Сравнение данного метода с аналогами

Все образцы, включенные в клиническое валидационное исследование, также прошли проверку с

использованием аналогичного метода ИФА/ELISA. В диапазон аналитических измерений попали 420

образцов. Данные представлены в таблице ниже.

Сравнение методов (N=420)

CCP3 ИФА/ELISA

Процентная доля совпадений

(Доверительный интервал 95%)

Отрицательный

результат

Положительный

результат

Итого

QUANTA

Flash®

CCP3

Отрицательный

результат

177

13

190

Совпадение полож. рез-тов: 94,2% (90,3

– 96,6%)

Положительный

результат

19

211

230

Совпадение отриц. рез-тов: 90,3% (85,4

– 93,7%)

Итого

196

224

420

Итого совпадений: 92,4% (89,4 – 94,6%)

Точность и воспроизводимость

Точность анализа QUANTA Flash CCP3 оценивалась с использованием 8 образцов, содержащих

различные концентрации антител к CCP3, в соответствии с документом Института клинических и

лабораторных

стандартов

CLSI

EP05-A2

«Оценка

точности

количественных

методов

измерения.

Утвержденное руководство». Проверка образцов производилась по два раза, дважды в день в течение

20 дней. Вычислялась внутрисерийная, межсерийная, в разные дни и общая точность. Результаты

приведены в таблице ниже:

Внутрисерийная

В разные дни

Межсерийная

Итого

Образец

N

Среднее

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

1

80

11,7

0,68

5,8%

0,41

3,5%

0,00

0,0%

0,80

6,8%

2

80

21,3

0,97

4,6%

0,74

3,5%

0,68

3,2%

1,40

6,6%

3

80

21,4

0,77

3,6%

0,87

4,1%

0,60

2,8%

1,31

6,1%

4

80

23,0

1,01

4,4%

0,64

2,8%

0,00

0,0%

1,20

5,2%

5

80

55,9

1,43

2,6%

2,14

3,8%

1,09

1,9%

2,80

5,0%

6

80

195,1

8,78

4,5%

1,26

0,6%

6,00

3,1%

10,71

5,5%

7

80

1155,3

56,17

4,9%

32,57

2,8%

20,34

1,8%

68,04

5,9%

8

80

2210,3

119,90

5,4%

36,58

1,7%

42,25

1,9%

132,29

6,0%

Воспроизводимость

анализа

QUANTA

Flash

CCP3

оценивалась

с

использованием

8

образцов,

содержащих различные концентрации антител к CCP3. Три образца исследовали в трех различных

центрах (на трех различных анализаторах), по 4 раза, дважды в день в течение 5 дней. Пять

дополнительных образцов исследовали в трех различных центрах (на трех различных анализаторах),

по 5 раз, один раз в день в течение 5 дней. Вычислялась межцентровая воспроизводимость. Она

представлена в таблице ниже:

Межцентровая точность (воспроизводимость)

Идентификатор

образца

N

Среднее (ХЕ)

СО (ХЕ)

КВ (%)

1

120

9,3

0,0

0,0

2

120

35,1

1,1

3,0

3

120

207,9

4,1

2,0

4

75

16,0

0,5

3,2

5

75

24,4

0,5

1,9

6

75

767,5

11,5

1,5

7

75

1447,6

38,2

2,6

8

75

2274,4

0,0

0,0

Диапазон аналитических измерений Пределы и линейность

Предел обнаружения (ПО) анализа QUANTA Flash CCP3 составляет 478 ОСЕ, что ниже нижнего

предела диапазона аналитических измерений для этого анализа. Он был определен в соответствии с

указанием CLSI EP17-A2, с долей ложно положительных результатов (альфа) менее 5% и ложно

отрицательных результатов (бета) менее 5%. С использованием двух серий реагентов, на основании

120 анализов, из которых 60 производилось с холостыми образцами и 60 с образцами с низким

уровнем для каждой серии. Предел измерения параметров холостого образца (ПХ) составлял 410

ОСЕ.

Диапазон

аналитических измерений (ДАИ) анализа находится в пределах от 4,6 до 2776,8 ХЕ.

Линейность ДАИ оценивали при проведении исследования в соответствии с документом CLSI EP6-A

«Оценка линейности процедур количественного определения. Статистический метод. Утвержденное

руководство». Пять образцов сыворотки с различной концентрацией антител к CCP3 последовательно

разводили

до

получения

значений,

соответствующих

ДАИ.

Каждый

из

пяти

образцов

продемонстрировал

линейность

разведения,

а

комбинированные

данные

позволили

получить

следующие результаты с линейной регрессией:

Образцы

Диапазон исследования (ХЕ)

Наклон (ДИ 95%)

Все

от 6,6 до 2772,3

1,07 (от 1,05 до 1,10)

0,99

Реагенты QUANTA Flash MPO,

кат. № 701133

Для проведения диагностики In Vitro

Планируемое использование

QUANTA Flash MPO – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный для

полуколичественного

определения

аутоантител

к

миелопероксидазе

IgG

(МПО)

в

сыворотке крови человека на приборе ACUSTAR и/или BIO-FLASH

®

. QUANTA Flash MPO

предназначен

для

диагностики микроскопического

полиангиита

(МПА)

в

сочетании

с

клиническими данными и другими лабораторными исследованиями.

Резюме и объяснение испытания

А н а л и з

н а

антинейтрофильные цитоплазмические антитела (АНЦА) радикальным образом

изменил

диагностику

и

лечение

р а з л и ч н ы х

а у т о и м м у н н ы х

о п о с р е д о в а н н ы х

васкулитов.

1

Перинуклеарные АНЦА (пАНЦА) и цитоплазменные АНЦА (цАНЦА) оказались полезны при

диагностике васкулитов мелких сосудов, таких как гранулематоз с полиангиитом (ГПА),

2

ранее

известный

как

гранулематоз

Вегенера

(ГВ),

идиопатический

некротический

серповидный

гломерулонефрит,

микроскопический

полиангиит

(МПА)

и

синдром

Чарга-Стросса

(CЧC).

Кроме того, АНЦА могут быть обнаружены при других

заболеваниях, таких

как узелковый

полиартрит, синдром Гудпасчера и воспалительные заболевания кишечника.

2

Двумя основными антигенами - мишенями АНЦА являются миелопероксидаза (МПО) и серин-

протеаза

3

(PR3).

Несколько

исследований

было

проведено

с

ц е л ь ю

анализа

распространенности

АНЦА

к

PR3

и

МПО

при различных

з а б о л е в а н и я х

и

исследования

чувствительности и специфичности этих аутоантител.

3,4

В последнее время были разработаны анализы захвата или фиксации для обнаружения

АНЦА к PR3 и МПО. В отличие от большинства ИФА на АНЦА к PR3 и МПО анализы захвата и

фиксации не иммобилизируют антиген путем поглощения, и поэтому считается, что они

демонстрируют

в ы с о к у ю

производительность

анализа

за

счет

оптимальной

экспозиции

антигена. Распространенность АНЦА к PR3 и МПО при связанных

с

ними заболеваниях

зависит от когорты пациентов и о методологии, используемой для обнаружения антител.

3,4,5

АНЦА к PR3 и МПО, как сообщается, коррелирует с

активностью

васкулита.

6

Большинство

экспертов в области аутоиммунных

васкулитов по-прежнему рекомендует использование

иммунофлюоресценции на нейтрофилах человека, фиксированных формалином и этанолом,

для первоначального скрининга. Вследствие быстро прогрессирующего характера васкулитов

мелких сосудов, быстрое обнаружение АНЦА к PR3 и МПО имеет большое значение.

7,8

Принципы методики

Собственная очищенная МПО иммобилизована на поверхности парамагнитных микрочастиц,

которые

хранятся

в

картридже

с

реагентами

в

условиях,

которые

позволяют

антигену

оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж для анализа готов для использования в

первый

раз,

весь

картридж

переворачивают

несколько

раз,

чтобы

полностью

смешать

реагенты. Картридж с реагентами далее помещают в инструмент ACUSTAR и/или BIO-

FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным раствором

образца,

налитым

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества

разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы с МПО и буфер для анализа помещают во

вторую кювету и смешивают. Данную кювету инкубируют при 37

°

C. Микрочастицы затем

намагничивают

и промывают несколько раз. Антитело к IgG человека, конъюгированное

изолюминолом,

далее

добавляют

в

кювету

и

инкубируют

при

температуре

37

°

C.

Микрочастицы

снова

намагничивают

и

повторно

промывают.

Конъюгат

изолюминола

вызывает

люминесцентную

реакцию,

когда реактивы («Триггеры») добавляют в кювету.

Свет, вырабатывающийся при реакции, измеряют в виде относительных световых единиц

(ОСЕ)

посредством

оптической

системы

ACUSTAR

и/или

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата

изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител к МПО класса

IgG, связанных с МПОна микрочастицах.

В анализе QUANTA Flash MPO используется предварительно определенная обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания

штрих-кода,

нанесенного

на

картридж

с

реагентами.

На

основании

результатов анализа

двух

калибраторов

была

создана

специфическая

рабочая

кривая

инструмента, которая используется для расчета хемилюминесцентных единиц на основе

ОСЕ, полученных для каждого пациента.

Реактивы

1.

Картридж

с

реагентами

QUANTA

Flash

MPO

содержит

следующие

реагенты

для

проведения 50 определений:

a.

Парамагнитные

микрочастицы,

покрытые

МПО,

в

растворе,

содержащем

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченые изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер

для

разбавления

образца

раствор

розового

цвета,

содержащий

забуференный Трис

солевой

раствор, полисорбат

Твин 20,

стабилизаторы

белка и консерванты.

Предупреждения

1.

Буфер

для

анализа

содержит

химикат

(0,02%

хлорамфеникол).

Регулирующим

органам Калифорнии известно, что вещество вызывает рак.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия - это яд и он может

быть токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза.

Азид натрия может реагировать со свинцовыми или медными трубопроводами и

образовывать потенциально взрывчатые металлические азиды. Промывают раковины,

если они использовались для утилизации реактива большими объемами воды, чтобы

предотвратить накопление азида.

3.

Работая с предоставленными реагентами, используйте соответствующие средства

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

соблюдайте все федеральные, государственные и местные экологические нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в инструменте ACUSTAR и/

или BIO-FLASH.

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов

прибора.

При

первом

помещении

картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

водный раствор формальдегида, отбеливатель, спирт этиловый или моющее

вещество могут вызвать помехи при количественном определении. Рекомендуемая

процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя ACUSTAR и/или

BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Нераскрытые картриджи с реагентами следует хранить при температуре 2-8

°

C.

Не

замораживать. Реактивы стабильны до даты истечения срока годности при

соответствующем хранении и обращении.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 84 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор, подготовка и обработка образцов

Данная

методика

должна осуществляться

с

помощью

образца

сыворотки.

Загрязненные

микробами,

пастеризованные

образцы

или

образцы,

содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной,

липемической или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов:

1.

Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

°

C.

3.

Если анализ не будет завершено в течение 48 часов или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -

20

°

C

или

более

низкой

температуре.

Замороженные

образцы

смешивают

значительно

позднее

размораживания и до выполнения испытания.

Методика

Предоставляемые вещества

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash MPO

Необходимы дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Инструмент ACUSTAR и/или BIO-FLASH с работающим компьютером

Система промывания ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash MPO (номер детали: 701131)

Контрольные препараты QUANTA Flash MPO (номер детали: 701132)

Использование хемилюминесцентного

анализатора A C U S T A R и / и л и B I O - F L A S H

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR и/или

BIO-FLASH

и программным

обеспечением

2.

и з л о ж е н ы

в

р у к о в о д с т в е

оператора, поставляемым с системой ACUSTAR и/или BIO-

FLASH. Для получения дополнительной информации и устранения неполадок в связи

с данным анализом обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA

Diagnostics, Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

3.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлеките контейнер для твердых отходов и утилизируйте его должным образом.

Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и щелкните Yes

в окне Empty Waste Drawer.

4.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку Bulks Inventory F9 (вверху справа).

а. На экране Inventory – Bulks

нажать кнопку Triggers

слева. Появится новое окно с

названием Add Triggers – Remove old bottles.

b. Откройте и извлеките ящик с отходами в инструменте ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Утилизируйте

любые кюветы в ящике для сухих отходов. Щелкните Yes в окне Empty Waste

Drawer.

Извлеките

триггерные

флаконы из

зажимов

и

щелкните кнопку

Next.

Открутите крышки старых триггерных флаконов и замените новым триггерами.

Убедитесь, что вы откручиваете крышку с одного флакона за раз и сопоставляйте

флаконы крышкам, на которые нанесена цветная маркировка (белая к белому и

красная к красному).

с.

Далее следовать инструкциям в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle.

После принятия штрихового кода поместите Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните кнопку Next.

d.

Далее следовать инструкциям в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle

.

После

принятия штрихового кода поместите Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните Finish. Замените и закройте отсек для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR и/или BIO-FLASH,

следует

нажать кнопку

Bulks Inventory F9 (в верхнем правом углу). На экране

Inventory – Bulks щелкните

к н о к у

Sys. Rinse.

В

н о в о м

о к н е

Add System Rinse – Remove

bottles, щелкните Next. Следуйте инструкциям в новом окне Add System Rinse – Add

bottle. После принятия штрихового кода щелкните Finish, если необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране Inventory – Bulks

следует

нажать кнопку Fluid Waste. Извлеките и утилизируйте жидкие отходы. Щелкните кнопку

Next. После замены пустого флакона щелкните Finish.

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Во время первого использования картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие

шаги,

чтобы

точно

установить

картридж

в

инструмент

ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Примечание:

Не использовать картридж с реагентами, если видны какие-либо признаки

повреждения.

Картридж с реагентами QUANTA Flash MPO: Микрочастицы оседают во время

транспортировки

и

хранения

и

необходимо

провести

смешивание

для

повторного

суспендирования.

1.

Во время первого использования аккуратно

перевернуть

картридж

30

раз,

избегая

образования

пены.

Проводят

проверку

на

полное

ресуспендирование

микрочастиц.

Если

микрочастицы

ресуспендированы

неполностью,

то

продолжают

переворачивать

картридж

до

полного

ресуспендирования

микрочастиц.

НЕ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы не ресуспендируются.

2.

Сразу после ресуспендирования

микрочастиц помещают картридж с

реагентами на твердую поверхность для

у д а л е н и я

к р а с н о г о

я з ы ч к а .

Держите

картридж с реагентами в одной руке. Другой

рукой крепко возьмитесь

за красный язычок

на задней стороне картриджа с реагентами

и

вытащите его полностью.

3.

Нажать на два фиксатора по бокам

прокалывающего колпачка (серая часть) и

надавить на верхнюю часть картриджа с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

в идн ы.

НЕ

ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для

реагентов прибора ACUSTAR и/или BIO-FLASH. После помещения картриджа в

карусель для реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое

смешивание микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные

инструкции

по

калибровке

картриджа

с

реагентами

см.

в

разделе

Калибраторы QUANTA Flash

®

MPO 701131 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку Worklist в верхней части экрана и выбрать вкладку Racks внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать MPO из панели анализа. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместите образцы в выбранные положения в стойке для образцов и поместите

стойку для образцов в карусель инструмента.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажмите значок Start F4

для начала анализа.

Контроль качества

Контрольные препараты QUANTA Flash MPO (продаются отдельно - номер детали INOVA

701132)

содержат

положительный

и

отрицательный

контроли

анализа

MPO.

Подробные

инструкции

о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу,

а

также

по

выполнению

контроля

см.

в

разделе

Контрольные

препараты

QUANTA

Flash

®

MPO

701132

данного

вкладыша.

Контрольные

препараты

рекомендуется анализировать один раз в каждый день проведения анализа.

Вычисление результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash MPO рассчитана шеститочечная обобщающая кривая.

Данные четыре параметра логистической кривой закодированы в штриховом коде каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с

реагентами

автоматическая

специфическая рабочая кривая будет использоваться, чтобы преобразовать ОСЕ в ХЕ.

После

этого реактивность антител к МПО можно классифицировать согласно приведенной ниже

таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность, выраженная в ХЕ, непосредственно связана с титром аутоантител в образце

пациента.

Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будут отражены в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

которых

пропорциональны

количеству антител.

Регистрируемый

диапазон

анализа

составляет

от

3,2

ХЕ

до

739,8

ХЕ.

Если

результат

пациента будет менее 3,2 ХЕ, то система ACUSTAR и/или BIO-FLASH отобразит это в

виде

индикации

“<3,2

ХЕ”.

Поскольку

это

значение

меньше

20

ХЕ,

то

его

считают

отрицательным результатом. Если результат пациента будет больше 739,8 ХЕ, то система

ACUSTAR и/или BIO-FLASH отобразит это в виде индикации “> 739,8 ХЕ”. Этот результат

считают

положительным.

В

программном

обеспечении

есть

опция

Автоматический

повторный

анализ.

Если

эта

опция

выбрана,

прибор будет

автоматически

производить

повторный анализ любого образца, результат которого превышает

>

739,8

ХЕ,

путем

дополнительного

разведения

его

в

20

раз. Фактическое значение в ХЕ будет рассчитано

с учетом дополнительного коэффициента разведения.

Интерпретация результатов

Набор

реагентов

QUANTA

Flash

способен

обнаружить

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов.

Каждая

лаборатория

должна

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующие

данные:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного анализа INOVA QUANTA Flash MPO. Значения, полученные

с

помощью

методик

анализа

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо. Указанные значения содержания антител не всегда соотносятся с титром

конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не все пациенты, страдающие микроскопическим полиангиитом имеют положительные

результаты на антитела к МПО.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное смешивание реагентов до первого использования может привести к

ошибочным результатам.

4.

Технические характеристики данного анализа не были установлены для матриц кроме

сыворотки.

Математические ожидания

Для

установления

ожидаемых

значений,

была

испытана

сыворотка,

полученная

от

400 практически

здоровых

доноров.

Среднее

значение

составило

<3,2

ХЕ,

а

доверительный

интервал

с

вероятностью

95%

был

определен

как

<3,2

ХЕ.

Рекомендуется,

чтобы

каждая

лаборатория

устанавливала

собственные

нормы,

характерные

для

отражения

популяции

пациентов.

Отслеживаемость

В настоящее время нет признанного международного стандарта для измерения антител к МПО

IgA. Тем не менее, была испытана международная стандартная сыворотка (IS2720 № 15 АНЦА к

МПО) из центра борьбы с болезнями и профилактики (CDC), и была определена концентрация

331,6 ХЕ. Кроме того, было выполнено испытание линейности, и определено значение

R

2

в

размере

1,0. Коэффициент пересчета 0,3 может быть использован для преобразования ХЕ в МЕ/

мл. При выборе МЕ/мл программное обеспечение использует коэффициент преобразования для

сообщения результатов в МЕ/мл.

Метод сравнения с предикатным устройством

Образцы

для

анализа

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований, которые были в пределах

регистрируемого диапазона

данного

анализа.

Эти

образцы

были

проанализированы

с

помощью

анализа

QUANTA

Flash

MPO

и

эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение метода (N= 178)

ИФА МПО

Процентное совпадение

(достоверность 95%)

Положительная

Отрицательная

Итого

QUANTA

Flash

®

MPO CIA

Положительная

52

20

72

Положительное совпадение

= 100% (93,2-100,2%)

Отрицательная

0

106

106

Отрицательное совпадение

= 84,1% (76,6-90,0%)

Итого

52

126

178

Общее совпадение =

88,8% (83,2-93,0%)

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 89 образцов больных

гранулематозом с полиангиитом (ГПА), 89 – микроскопическим полиангиитом (МПА), 10 –

синдромом Чарга-Стросса (CXC), 47 – синдрома Гудпасчера, 73– ревматоидным артритом,

101

системной

красной

волчанкой,

7

синдромом

Шегрена,

47

-

воспалительным

заболеванием кишечника, 49 - системным склерозом, 18 - рассеянным склерозом, 29 –

вирусным гепатитом B, 19 – вирусным гепатитом C, 7 – вирусом иммунодефицита человека,

10 – сифилисом и 66 пациентов с другими заболеваниями. Пациенты с СХС и синдромом

Гудпасчера, как известно, имеют антитела к МПО и были поэтому исключены из расчета

специфичности. Результаты данного тестирования представлены ниже:

Клиническое исследование

(N = 661)

Диагноз

Анализ

(достоверность 95%)

МПА

Не МПА

Итого

QUANTA Flash

®

MPO

Положительная

71

22*

93

Чувствительность = 79,8% (69,9-87,6%)

Отрицательная

18

550

568

Чувствительность = 96,2% (94,2-97,6%)

Итого

89

572

661

Общее совпадение = 93,9% (91,9-95,6%)

* Девять противоречивых образцов были взяты у пациентов с ГПА, 9 были взяты у пациентов с синдромом

Гудпасчера, 2 у пациентов с воспалительным заболеванием кишечника, 1 - у пациента с СХС и 1 - у

пациента с системной красной волчанкой.

Прецизионность и воспроизводимость

Прецизионность анализа QUANTA Flash MPO была оценена в исследовании с участием 11

пациентов, проведенном в соответствии с руководством EP5-A2 Института клинических и

лабораторных стандартов. Результаты исследования представлены ниже:

В пределах

анализа

Между

анализами

В разные дни

Итого

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ,

%

СО

КВ, %

СО

КВ, %

A

84

4,9

0,2

4,8%

0,0

0,0%

0,3

5,8%

0,4

7,5%

B

84

12,7

1,3

10,4%

0,0

0,0%

0,9

7,4%

1,6

12,8%

C

80

19,0

0,7

3,8%

0,0

0,0%

0,8

4,0%

1,1

5,5%

D

80

17,6

0,7

3,8%

0,2

0,9%

0,5

3,1%

0,9

5,0%

E

80

20,2

0,8

3,9%

0,0

0,0%

0,7

3,2%

1,0

5,1%

F

84

32,4

1,4

4,3%

0,0

0,0%

1,2

3,8%

1,9

5,8%

G

84

36,0

1,4

3,9%

0,0

0,0%

2,1

5,8%

2,5

7,0%

H

84

39,0

2,3

6,0%

0,0

0,0%

3,3

8,5%

4,1

10,4%

I

84

41,5

2,2

5,3%

0,0

0,0%

1,8

4,4%

2,9

6,9%

J

84

124,1

6,3

5,0%

0,0

0,0%

4,8

3,9%

7,9

6,4%

K

84

641,0

29,0

4,5%

0,0

0,0%

28,4

4,4%

40,5

6,3%

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые

диапазоны

Нижний предел обнаружения для данного анализа, согласно руководству EP17-A Института

клинических

и

лабораторных

стандартов

(CLSI),

составляет

примерно

560

ОСЕ,

что

эквивалентно значению 0,4 ХЕ, которое значительно ниже нижнего порога регистрируемого

диапазона. Верхний предел обнаружения составляет около 1 000 000 ОСЕ, что примерно на

330% выше порога регистрируемого диапазона. Весь подлежащий регистрации диапазон

составляет от 3,2 ХЕ до 739,8 ХЕ и является линейным. Исследование линейности проводили

согласно руководству EP6-A CLSI. Результаты приведены ниже:

Образец

Диапазон

испытания (ХЕ)

Наклон прямой

(доверительный

интервал на

уровне 95%)

Y точка пересечения с

осью ординат

(доверительный

интервал на

уровне 95%)

1

от 1,3 до 12,5

0,99 (от 0,96 до 1,02)

0,0 (от -0,257 до 0,2)

1,00

2

от 3,2 до 32,1

1,00 (от 0,97 до 1,02)

0,6 (от 0,018 до 1,1)

1,00

3

от 8,8 до 87,7

1,01 (от 0,98 до 1,04)

0,7 (от -0,923 до 2,3)

1,00

4

от 32,3 до 322,5

1,02 (от 0,99 до 1,05)

2,6 (от -3,453 до 8,7)

1,00

5

от 93,9 до 939,0

0,97 (от 0,93 до 1,00)

32,0 (от 11,76 до 52,2)

0,99

Интерференция

При

анализе

образцов,

содержавших

до

10

мг/дл

билирубина,

200

мг/дл

гемоглобина,

1000 мг/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерола или 500 МЕ/мл ревматоидного фактора IgM

при помощи набора QUANTA Flash MPO явление интерференции не наблюдалось.

Реагенты QUANTA Flash PR3,

кат. № 701138

Для проведения диагностики In Vitro

Планируемое использование

QUANTA Flash PR3 – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный для

полуколичественного определения аутоантител к протеиназе IgG (PR3) в сыворотке крови

человека

на

приборе

Acustar и/или BIO-FLASH

®

. QUANTA Flash PR3 предназначен для

диагностики гранулематоза

с полиангиитом

(ГПА)

в

сочетании

с клиническими

данными

и

другими лабораторными исследованиями.

Резюме и объяснение испытания

Анализ

на

антинейтрофильные

цитоплазмические

антитела

(АНЦА)

радикальным

образом

и з м е н и л

д и а г н о с т и к у

и

л е ч е н и е

р а з л и ч н ы х

а у т о и м м у н н ы х

о п о с р е д о в а н н ы х

васкулитов.

1

Перинуклеарные

АНЦА

(пАНЦА)

и

цитоплазменные АНЦА

(цАНЦА)

оказались

полезны

при

диагностике васкулитов мелких сосудов, таких как гранулематоз с полиангиитом (ГПА),

2

ранее

и з в е с т н ы й

к а к

г р а н у л е м а т о з

В е г е н е р а

( Г В ) ,

и д и о п а т и ч е с к и й

н е к р о т и ч е с к и й

серповидный

г л о м е р у л о н е ф р и т ,

м и к р о с к о п и ч е с к и й

п о л и а н г и и т

( М П А )

и

с и н д р о м

Ч а р г а - С т р о с с а

(CЧC).

Кроме

того,

АНЦА

могут

быть

обнаружены

при

других

заболеваниях,

таких

как

узелковый

полиартрит, синдром Гудпасчера и воспалительные заболевания кишечника.

2

Двумя основными антигенами - мишенями АНЦА являются миелопероксидаза (МПО) и серин-

п р о т е а з а

3

( P R 3 ) .

Н е с к о л ь к о

и с с л е д о в а н и й

б ы л о

п р о в е д е н о

с

ц е л ь ю

анализа

р а с п р о с т р а н е н н о с т и

А Н Ц А

к

P R 3

и

М П О

п р и

р а з л и ч н ы х

з а б о л е в а н и я х

и

исследования

чувствительности и специфичности этих аутоантител.

3,4

В

п о с ле д н е е

в ре м я

был и

р а з р а бо т ан ы

ан а л и зы

з а х в а т а

и л и

фи к са ци и

д л я

обнаружения

АНЦА к PR3 и МПО. В отличие от большинства ИФА на АНЦА к PR3 и МПО анализы захвата и

ф и к с а ц и и

н е

и м м о б и л и з и р у ю т

а н т и г е н

п у т е м

п о г л о щ е н и я ,

и

п о э то м у

с ч и т а е т с я ,

ч т о

они

д е м о н с т р и р у ю т

в ы с о к у ю

п р о и з в о д и т е л ь н о с т ь

а н а л и з а

з а

с ч е т

о п т и м а л ь н о й

экспозиции

а н т и г ен а .

Р а сп р ос т р ан ен н о с т ь

АН Ц А

к

P R 3

и

М П О

п р и

св я з анн ы х

с

н им и

заболеваниях

зависит

от

когорты

пациентов

и

о

методологии,

используемой

для

обнаружения

антител.

3,4,5

АНЦА

к

PR3

и

МПО,

как

сообщается,

коррелирует

с

активностью

васкулита.

6

Большинство

э к с п е р т о в

в

о б л а с т и

а у т о и м м у н н ы х

в а с к у л и т о в

п о - п р е ж н е м у

р е к о м е н д у е т

использование

иммунофлюоресценции на нейтрофилах человека, фиксированных формалином и этанолом,

для первоначального скрининга. Вследствие быстро прогрессирующего характера васкулитов

мелких сосудов, быстрое обнаружение АНЦА к PR3 и МПО имеет большое значение.

7,8

Принципы методики

Собственная очищенная PR3 иммобилизована на поверхности парамагнитных микрочастиц,

которые

хранятся

в

картридже

с

реагентами

в

условиях,

которые

позволяют

антигену

оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж для анализа готов для использования в

первый

раз,

весь

картридж

переворачивают

несколько

раз,

чтобы

полностью

смешать

реагенты. Картридж с реагентами далее помещают в инструмент Acustar и/или BIO-FLASH

®

.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляют

с

помощью

инструмента,

используя систему промывки, добавленную к одноразовой пластмассовой кювете. Небольшие

количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы с

PR3 и буфер для анализа

помещают во вторую кювету и смешивают. Данную кювету инкубируют при температуре 37

°

C.

Микрошарики затем намагничивают и промывают несколько раз. Антитело, конъюгированное

изолюминолом, далее добавляют в кювету и инкубируют при температуре 37

°

C. Микрошарики

снова

намагничивают

и

повторно

промывают.

Конъюгат

изолюминола

вызывает

люминесцентную

реакцию,

когда

реактивы

«Триггеры»)

добавляют

в

кювету.

Свет,

вырабатывающийся при реакции, измеряют в виде относительных световых единиц (ОСЕ)

посредством оптической системы Acustar и/или BIO-FLASH

.

Р е з у л ь т а т ,

в ы р а ж е н н ы й

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата

изолюминола,

которое,

в

свою

очередь,

пропорционально

количеству

антител

к

PR3

класса

IgG,

связанных

с

PR3

на

микрочастицах.

В анализе QUANTA Flash

PR3 используется предварительно определенная обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов

анализа

двух

калибраторов

была

создана

специфическая

рабочая

кривая

инструмента,

которая используется для расчета хемилюминесцентных единиц на основе ОСЕ, полученных

для каждого пациента.

Реактивы

1.

Картридж

с

реагентами

QUANTA

Flash

PR3

содержит

следующие

реагенты

для

проведения 50 определений:

a.

Парамагнитные микрочастицы, покрытые PR3, в растворе, содержащем буфер,

стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер для анализа – прозрачный раствор, содержащий фосфатно-солевой

буфер, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченые изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

Предупреждения

1.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия - это яд и он может

быть токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза.

Азид натрия может реагировать со свинцовыми или медными трубопроводами и

образовывать потенциально взрывчатые металлические азиды. Промывают раковины,

если они использовались для утилизации реактива большими объемами воды, чтобы

предотвратить накопление азида.

2.

Работая с предоставленными реагентами, используйте соответствующие средства

индивидуальной защиты.

3.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

соблюдайте все федеральные, государственные и местные экологические нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro условиях.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в инструменте Acustar и/или

BIO-FLASH .

3.

После открытия данного картриджа с реагентами он должен храниться в инструменте в

карусели с реагентами. Следует проявлять осторожность, чтобы избежать проливания

реагентов при помещении картриджа в инструмент.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки или

промывания инструмента. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как водный

раствор формальдегида, отбеливатель, спирт этиловый или моющее вещество могут

вызвать помехи при количественном определении. Обязательно следуйте

рекомендуемой методике очистки инструмента как указано в руководстве оператора

Acustar и/или BIO-FLASH .

Условия хранения

1.

Нераскрытые картриджи с реагентами следует хранить при температуре 2-8

°

C. Не

замораживать. Реактивы стабильны до даты истечения срока годности при

соответствующем хранении и обращении.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в инструменте и они должны

быть стабильны в общей сложности в течение 70 дней, после этого их необходимо

утилизировать. Программное обеспечение контролирует даты истечения срока

годности картриджей, находящихся в инструменте, а также серии картриджа с

реагентами.

Сбор, подготовка и обработка образцов

Данная

методика

должна осуществляться

с

помощью

образца

сыворотки.

Загрязненные

микробами,

пастеризованные

образцы

или

образцы,

содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной,

липемической или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов:

1.

Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

°

C.

3.

Если анализ не будет завершено в течение 48 часов или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

°

C или более низкой температуре.

Замороженные

образцы

смешивают

значительно

позднее

размораживания

и

до

выполнения испытания.

Методика

Предоставляемые вещества

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash PR3

Необходимы дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Инструмент Acustar и/или BIO-FLASH с работающим компьютером

Система промывания Acustar и/или BIO-FLASH

Триггеры Acustar и/или BIO-FLASH

Кюветы Acustar и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash PR3 (номер детали: 701136)

Контрольные препараты QUANTA Flash PR3 (номер детали: 701137)

Использование хемилюминесцентного анализатора A c u s t a r

и / и л и B I O - F L A S H

1.

Прочитайте руководство оператора, поставляемое с системой Acustar и/или BIO-FLASH,

чтобы получить подробную информацию по обслуживанию хемилюминесцентного

анализатора Acustar и/или BIO-FLASH и информацию о программном обеспечении. Для

получения дополнительной информации и для того чтобы выявить проблемы с данным

анализом, обратитесь в техническую службу компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, которые указаны в конце данного вкладыша.

2.

Чтобы освободить контейнер для твердых отходов, откройте ящик для отходов.

Извлеките контейнер для твердых отходов и утилизируйте его должным образом.

Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и щелкните Yes в

окне Empty Waste Drawer.

3.

Для замены триггеров, щелкните кнопку Запасы не расфасованных препаратов F9

(вверху справа).

a.

На экране Inventory – Bulks щелкните кнопку Triggers слева. Появится новое окно

с названием Add Triggers – Remove old bottles.

b.

Откройте и извлеките ящик с отходами в инструменте Acustar и/или BIO-FLASH .

Утилизируйте любые кюветы в ящике для сухих отходов. Щелкните Yes в окне Empty

Waste Drawer. Извлеките триггерные флаконы из зажимов и щелкните кнопку Next.

Открутите крышки старых триггерных флаконов и замените новым триггерами.

Убедитесь, что вы откручиваете крышку с одного флакона за раз и сопоставляйте

флаконы крышкам, на которые нанесена цветная маркировка (белая к белому и

красная к красному).

c.

Следуйте инструкциям в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle. После

принятия штрихового кода поместите Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните кнопку Next.

d.

Далее следовать инструкциям в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle. После

принятия штрихового кода поместите Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните Finish. Замените и закройте ящик для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер системы смыва, щелкните кнопку Bulks Inventory F9

верхнем правом углу). На экране Inventory – Bulks щелкните кноку Sys. Rinse. В новом

окне Add System Rinse – Remove bottles, щелкните Next. Следуйте инструкциям в

новом окне Add System Rinse – Add bottle. После принятия штрихового кода

щелкните Finish, если необходимо.

5.

Чтобы освободить контейнер для жидких отходов на экране Inventory – Bulks щелкните

кнопку Fluid Waste. Извлеките и утилизируйте жидкие отходы. Щелкните кнопку Next.

После замены пустого флакона щелкните Finish.

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Во время первого использования картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие

шаги,

чтобы

точно

установить

картридж

в

инструмент

Acustar

и/или

BIO-FLASH

Примечание:

Не используйте картридж с реагентами, если видны какие-либо признаки

повреждения.

Картридж

с реагентами

QUANTA

Flash

PR3:

Микрочастицы

оседают

во

время

транспортировки

и

хранения

и

необходимо

провести

смешивание

для

повторного

суспендирования.

1.

Во время первого использования картриджа

его

аккуратно

переворачивают

30

раз,

избегая

образования

пены.

Проводят

проверку

на

полное

ресуспендирование

микрочастиц.

Если

микрочастицы

ресуспендированы

неполностью,

то

продолжают

переворачивать

картридж

до

полного

ресуспендирования

микрочастиц.

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы не суспендируются повторно.

2.

Сразу

после

ресуспендирования

микрочастиц

помещают

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность

для

удаления

красного

язычка.

Держите

картридж с реагентами в одной руке. Другой

рукой крепко возьмитесь за красный язычок

на задней стороне картриджа с реагентами и

вытащите его полностью.

3.

Нажмите на два фиксатора по бокам

прокалывающего колпачка (серая часть) и

надавите на верхнюю часть картриджа с

реагентами пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны. НЕ ПЕРЕВОРАЧИВАЙТЕ ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно помещают картридж с реагентами в любой свободный слот на карусели с

реагентами инструмента Acustar и/или BIO-FLASH Сразу после помещения

картриджа в карусель с реагентами инструмент выполняет дополнительное

периодическое смешивание микрошариков.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные

инструкции

по

калибровке

картриджа

с

реагентами

см.

в

разделе

Калибраторы QUANTA Flash

®

PR3 701136 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist наверху экрана и выберите закладку Racks внизу.

2.

Выберите стойку для образцов, которая будет использоваться, выделяя стойку на

экране или путем сканирования штрих-кода портативным считывателем штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать PR3 из панели анализа. Повторите эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместите образцы в выбранные положения в стойке для образцов и поместите

стойку для образцов в карусель инструмента.

4.

Если все необходимые материалы находятся в инструменте, то значок запуска будет

зеленым вверху экрана. Нажать на значок запуска, чтобы начать анализ.

Контроль качества

Контрольные препараты QUANTA Flash PR3 (продаются отдельно - номер детали INOVA

701137)

содержат

положительный

и

отрицательный

контроли

анализа

PR3.

Подробные

инструкции

о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу,

а

также

по

выполнению

контроля

см.

в

разделе

Контрольные

препараты

QUANTA

Flash

®

PR3

701137

данного

вкладыша.

Контрольные

препараты

рекомендуют анализировать один раз в день, когда проводится анализ.

Вычисление результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash PR3 рассчитана шеститочечная обобщающая кривая.

Данные четыре параметра логистической кривой закодированы в штриховом коде каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с

реагентами

автоматическая

специфическая рабочая кривая будет использоваться, чтобы преобразовать ОСЕ в ХЕ.

После

этого реактивность антител к PR3 можно классифицировать согласно приведенной ниже

таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательная

<20

Положительная

≥20

Реакционная способность в ХЕ непосредственно связана с

титром аутоантитела в образце

пациента. Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будут отражены в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

которых

пропорциональны

количеству антител.

Подлежащий

регистрации

диапазон

анализа

составляет

от

2.3

ХЕ

до

3285.3

ХЕ.

Если

результат пациента будет менее 2.3 ХЕ, то система Acustar и/ил и BIO-FLASH

отобразит

это

в

виде

индикации

“<2.3

ХЕ”.

Поскольку

это

значение

меньше

20

ХЕ,

то

его

считают

отрицательным результатом. Если результат пациента будет больше 3285.3 ХЕ, то система

Acustar и/или BIO-FLASH отобразит это в виде индикации “> 3285.3 ХЕ”. Этот результат

считают

положительным.

В

программном

обеспечении

есть

опция

Автоматический

повторный

анализ.

В

случае

выбора

данной

опции

инструмент

автоматически

вторично

произведет анализ любого образца,

результат

которого

>3285.3 ХЕ,

путем дальнейшего

разведения

в

20

раз

и

произведет

расчет

фактических

ХЕ,

используя

данный

дополнительный коэффициент разведения.

Интерпретация результатов

Набор реагентов QUANTA Flash способен обнаружить небольшие различия у популяции

пациентов. Каждая лаборатория должна установить свой собственный нормальный диапазон,

основываясь на собственных методах контроля и популяции пациентов согласно процедурам

установленных самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующие данные: «Данные результаты получены с помощью иммунохемилюминесцентного

анализа INOVA QUANTA Flash PR3. Значения, полученные с

помощью методик анализа

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо.

Величина

уровней

антител IgG не всегда может быть соотнесена с титром конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не все пациенты, страдающие гранулематозом имеют положительные результаты на

антитела к PR3.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное смешивание реагентов до первого использования может привести к

ошибочным результатам.

4.

Технические характеристики данного анализа не были установлены для матриц кроме

сыворотки.

Математические ожидания

Для

установления

ожидаемых

значений,

была

испытана

сыворотка,

полученная

от

400

практически

здоровых

доноров.

Среднее

значение

составило

3,3

ХЕ,

а

доверительный

интервал с вероятностью 95 % был определен как 5,1 ХЕ. Рекомендуется, чтобы каждая

лаборатория устанавливала собственные нормы, характерные для отражения популяции

пациентов.

Отслеживаемость

В

настоящее

время

нет

признанного

международного

стандарта

для

измерения

антител

к

PR3. Тем не менее, была испытана международная стандартная сыворотка (IS2721 № 16

АНЦА к PR3) из центра борьбы с болезнями и профилактики (CDC), и была определена

концентрация 403 ХЕ. Кроме того, было

выполнено

испытание

линейности,

и

определено

значение R

2

в размере 1,0. Коэффициент пересчета 0,25 может быть использован для

преобразования ХЕ в МЕ/мл. При выборе МЕ/мл программное обеспечение Acustar и/или BIO-

FLASH использует коэффициент преобразования для сообщения результатов в МЕ/мл.

Метод сравнения с предикатным устройством

Образцы

для

анализа

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных исследований, которые были в пределах регистрируемого диапазона данного

анализа. Эти образцы были проанализированы с

помощью анализа QUANTA Flash PR3 и

эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение метода (N= 199)

ИФА PR3

Процентное совпадение

(достоверность 95%)

Положительная

Отрицател

ьная

Итого

QUANTA Flash

®

PR3

ИХЛА

Положительная

55

12

67

Положительное совпадение =

98,2% (90,4-100,0%)

Отрицательная

1

131

132

Отрицательное совпадение =

91,6% (85,8-95,6%)

Итого

56

143

199

Общее совпадение =

93,5% (89,1-96,5%)

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 101 образца больных

гранулематозом с полиангиитом, 73– микроскопическим полиангиитом (МПА), 10 – синдромом

Чарга-Стросса

(CЧC),

68

синдромом

Гудпасчера,

64–

ревматоидным

артритом,

43

системной красной волчанкой, 7 – синдромом Шегрена, 70 - воспалительным заболеванием

кишечника, 50 - системным склерозом, 20 - рассеянным склерозом, 32 – вирусным гепатитом

B, 47 – вирусным гепатитом C, 10 – вирусом иммунодефицита человека, 9 – сифилисом и 81

пациент с другими заболеваниями. Результаты данного тестирования представлены ниже:

Клиническое

исследование (n = 686)

Диагноз

Анализ

(достоверность 95%)

Гранулематоз с

полиангиитом

Не гранулематоз с

полиангиитом

Итого

QUANTA

Flash

®

PR3

Положительная

69

15*

84

Чувствительность =

68,3% (58,3-77,2%)

Отрицательная

32

570

602

Чувствительность =

97,4% (95,8-98,6%)

Итого

101

585

686

Общее совпадение =

93,1% (91,0-94,9%)

* 8 противоречивых образцов были взяты у пациентов с воспалительным заболеванием кишечника, 2 были

взяты у пациентов с МПА, 2 у пациентов с ВИЧ, 1 - у пациента со смешанным заболеванием

соединительной ткани и 1 - у пациента с ревматической полимиалгией.

Прецизионность и воспроизводимость

Прецизионность анализа QUANTA Flash PR3 была оценена в исследовании с участием 9

пациентов, проведенном в соответствии с руководством EP5-A2 Института клинических и

лабораторных стандартов. Результаты исследования представлены ниже:

В пределах

анализа

Между

анализами

В разные дни

Итого

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

A

100

7,0

0,3

4,7%

0,2

3,3%

0,2

2,3%

0,4

6,2%

B

100

15,0

0,5

3,5%

0,5

3,7%

0,4

2,6%

0,9

5,7%

C

100

23,5

1,0

4,2%

0,8

3,4%

0,6

2,3%

1,4

5,9%

D

100

34,2

1,4

4,1%

1,0

2,9%

0,7

2,2%

1,9

5,5%

E

100

72,0

2,8

3,9%

2,2

3,1%

2,1

2,9%

4,1

5,8%

F

100

307,9

9,7

3,1%

10,4

3,4%

10,5

3,4%

17,7

5,7%

G

100

717,5

23,4

3,3%

15,8

2,2%

23,1

3,2%

36,5

5,1%

H

100

1343,1

82,7

6,2%

41,8

3,1%

33,4

2,5%

98,5

7,3%

J

100

2496,3

123,5

4,9%

81,5

3,3%

104,5

4,2%

181,1

7,3%

Пределы детектирования; линейные и подлежащие

регистрации диапазоны

Нижний предел обнаружения для данного анализа, согласно руководству EP17-A Института

клинических

и

лабораторных

стандартов

(CLSI),

составляет

примерно

645

ОСЕ,

что

эквивалентно значению 0.04 ХЕ, которое значительно ниже нижнего порога регистрируемого

диапазона. Верхний предел обнаружения составляет около 1.772,000 ОСЕ, что примерно на

240% выше порога регистрируемого диапазона. Весь подлежащий регистрации диапазон

составляет

от

2.3

ХЕ

до

3285.3

ХЕ

и

является

линейным.

Исследование

линейности

проводили согласно руководству EP6-A CLSI. Результаты приведены ниже:

Образец

Диапазон

испытания (ХЕ)

Наклон прямой

(доверительный

интервал на

уровне 95%)

Y точка пересечения с

осью ординат

(доверительный интервал

на уровне 95%)

1

от 1,6 до 16,2

1,00 (от 0,97 до 1,03)

-0,03 (от -0,34 до 0,28)

1,00

2

от 2,8 до 28,4

0,96 (от 0,92 до 1,01)

0,13 (от -0,63 до 0,89)

0,99

3

от 6,5 до 65,3

1,01 (от 0,98 до 1,05)

0,35 (от -1,14 до 1,84)

0,99

4

от 8,8 до 87,7

1,02 (от 0,98 до 1,05)

-1,33 (от -3,13 до 0,48)

0,99

5

от 70,0 до 699,8

0,98 (от 0,94 до 1,01)

-4,03 (от -18,27 до 10,22)

0,99

6

от 391,1 до 3520,1

0,96 (от 0,94 до 0,99)

-67,70 (от -118,4 до -17,0)

1,00

Интерференция

При

анализе

образцов,

содержавших

до

10

мг/дл

билирубина,

200

мг/дл

гемоглобина,

1000 г/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерола или 500 МЕ/мл ревматоидного фактора IgM

при помощи набора QUANTA Flash PR3 явление интерференции не наблюдалось.

Реагенты QUANTA Flash GBM,

кат. № 701143

Для проведения диагностики In Vitro

Планируемое использование

QUANTA Flash GBM – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный для

полуколичественного определения аутоантител к базальной мембране клубочков почек IgG

(БМК) в сыворотке крови человека на приборе ACUSTAR и/или BIO-FLASH

®

. QUANTA Flash

GBM

предназначен

для

диагностики

синдрома

Гудпасчера

в

сочетании

с

клиническими

данными и другими лабораторными исследованиями.

Резюме и объяснение испытания

Аутоантитела

к

БМК

признаны

важными

в

патогенезе

и

диагностике

быстро

прогрессирующего гломерулонефрита при синдроме Гудпасчера (GPS)

1

. Пробы на пассивный

перенос установили, что антитела к БМК могут воспроизводить травмы органов-мишеней.

При

отсутствии лечения синдром Гудпасчера может иметь быстротечный характер с быстрым

ухудшением

функции

почек,

которое

иногда

сопровождается

тяжелыми

кровоизлиянием

легких. Своевременная диагностика заболевания очень важна для его лечения и прогноза,

поскольку иммунотерапия

и плазмоферез могут улучшить исход болезни при назначении на

достаточно ранней стадии.

2

Анализ на циркулирующие антитела к БМК выполняется по

методам иммунофлуоресценции, РИА, ИФА и сложных тестов.

3,4

Базальная

мембрана

клубочков

состоит

из

р а з л и ч н ы х

белков.

Было

установлено,

что

большинство

аутоантител

пациентов

с

синдромом

Гудпасчера

вступают

в

р е а к ц и ю

с

н е к о л л а г е н о в ы м

д о м е н о м

( N C 1 )

к о л л а г е н о в о й

ц е п и

3(IV).

Тесты

ИФА,

использующие

специфический антиген

3(IV) доказали высокую

чувствительность и специфичность

для

синдрома Гудпасчера.1,4 Антитела к БМК редко встречаются у здоровых людей, а пациенты,

получающие лечение или находящиеся в стадии ремиссии, как правило, имеют низкие уровни

антител.

Пациенты с синдромом Гудпасчера могут иметь клинические признаки, указывающие на

определенные виды аутоиммунного васкулита. Поэтому определение аутоантител к БМК

рекомендуется

проводить

вместе

с

анализом

а н т и н е й т р о ф и л ь н ы х

цитоплазматических

антител (АНЦА) в составе серологического анализа пациентов, предположительно больных

рено-пульмональным синдромом. Вследствие быстро прогрессирующего характера синдрома

Гудпасчера раннее выявление антител к БМК имеет большое значение для диагностики и

лечения больных.

2,3

Принципы методики

Собственная очищенная БМК иммобилизована на поверхности парамагнитных микрочастиц,

которые

хранятся

в

картридже

с

реагентами

в

условиях,

которые

позволяют

антигену

оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж для анализа готов для использования в

п е р в ы й

р а з ,

в е с ь

к а р т р и д ж

п е р е в о р а ч и в а ю т

н е с к о л ь к о

р а з ,

ч т о б ы

п о л н о с т ь ю

смешать

р е а г е н т ы . К а р т р и д ж

с

р е а г е н т а м и

д а л е е

п о м е щ а ю т

в

и н с т р у м е н т

A C U S T A R

и / и л и

BIO-

FLASH

®

.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляется

в

приборе

с

помощью

ополаскивателя

системы,

налитого

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы с БМК и буфер для анализа

помещают

во

вторую

кювету

и

смешивают.

Данную

кювету

инкубируют

при

37

°

C.

Микрочастицы затем намагничивают и промывают несколько раз. Антитело к IgG человека,

конъюгированное изолюминолом, далее добавляют в кювету и инкубируют при температуре

37

°

C. Микрочастицы снова намагничивают и повторно промывают. Конъюгат изолюминола

вызывает люминесцентную реакцию, когда реактивы («Триггеры») добавляют в кювету. Свет,

в ы р а б а т ы в а ю щ и й с я

п р и

р е а к ц и и ,

и з м е р я ю т

в

в и д е

о т н о с и т е л ь н ы х

с в е т о в ы х

е д и н и ц

( О С Е )

п о с р е д с т в о м

о п т и ч е с к о й

с и с т е м ы

ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Результат, выраженный

в

ОСЕ, пропорционален

к о л и ч е с т в у

с в я з а н н о г о

к о н ъ ю г а т а

и з о л ю м и н о л а ,

к о т о р о е ,

в

с в о ю

очередь, пропорционально количеству антител к БМК класса IgG, связанных с БМК на

микрочастицах.

В

анализе

QUANTA

Flash

GBM

используется

предварительно

определенная

обобщающая кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания

штрих-кода,

нанесенного

на

картридж

с

реагентами.

На

основании

результатов

анализа

двух

калибраторов

была

создана

специфическая

рабочая

кривая

инструмента,

которая

используется

для

расчета

хемилюминесцентных

единиц на основе ОСЕ, полученных для каждого пациента.

Реактивы

1.

Картридж

с

реагентами

QUANTA

Flash

GBM

содержит

следующие

реагенты

для

проведения 50 определений:

a.

Парамагнитные микрочастицы, покрытые БМК, в растворе, содержащем буфер,

стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченые изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

Предупреждения

1.

Буфер

для

анализа

содержит

химикат

(0,02%

хлорамфеникол).

Регулирующим

органам Калифорнии известно, что вещество вызывает рак.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия - это яд и он может

быть токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза.

Азид натрия может реагировать со свинцовыми или медными трубопроводами и

образовывать потенциально взрывчатые металлические азиды. Промывают раковины,

если они использовались для утилизации реактива большими объемами воды, чтобы

предотвратить накопление азида.

3.

Работая с предоставленными реагентами, используйте соответствующие средства

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

соблюдайте все федеральные, государственные и местные экологические нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в инструменте ACUSTAR и/

или BIO-FLASH.

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки или

промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как водный

раствор формальдегида, отбеливатель, спирт этиловый или моющее вещество могут

вызвать помехи при количественном определении. Рекомендуемая процедура очистки

прибора, указанная в руководстве пользователя ACUSTAR и/или BIO-FLASH, должна

быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Нераскрытые картриджи с реагентами следует хранить при температуре 2-8

°

C.

Не

замораживать. Реактивы стабильны до даты истечения срока годности при

соответствующем хранении и обращении.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 42 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, калибровочные кривые, а также серии картриджей с

реагентами.

Сбор, подготовка и обработка образцов

Данная

методика

должна осуществляться

с

помощью

образца

сыворотки.

Загрязненные

микробами,

пастеризованные

образцы

или

образцы,

содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной,

липемической или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов:

1.

Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

°

C.

3.

Если анализ не будет завершено в течение 48 часов или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

°

C или более низкой температуре.

Замороженные

образцы

смешивают

значительно

позднее

размораживания

и

до

выполнения испытания.

Методика

Предоставляемые вещества

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash GBM

Необходимы дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Инструмент ACUSTAR и/или BIO-FLASH с работающим компьютером

Система промывания ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash GBM (номер детали: 701141)

Контрольные препараты QUANTA Flash GBM (номер детали: 701142)

Использование хемилюминесцентного анализатора

ACUSTAR и/или BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR и/

или BIO-FLASH и программным обеспечением ACUSTAR и/или BIO-FLASH изложены в

руководстве оператора, поставляемым с системой ACUSTAR и/или BIO-FLASH. Для

получения дополнительной информации и устранения неполадок в связи с данным

анализом обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics,

Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлеките контейнер для твердых отходов и утилизируйте его должным образом.

Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и щелкните Yes

в окне Empty Waste Drawer.

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку Bulks Inventory F9 (вверху справа).

а. На экране Inventory – Bulks

нажать кнопку Triggers

слева. Появится новое окно с

названием Add Triggers – Remove old bottles.

b.

Откройте и извлеките ящик с отходами в инструменте ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Утилизируйте любые кюветы в ящике для сухих отходов. Щелкните Yes в окне Empty

Waste Drawer. Извлеките триггерные флаконы из зажимов и щелкните кнопку Next.

Открутите крышки старых триггерных флаконов и замените новым триггерами.

Убедитесь, что вы откручиваете крышку с одного флакона за раз и сопоставляйте

флаконы крышкам, на которые нанесена цветная маркировка (белая к белому и

красная к красному).

с.

Далее следовать инструкциям в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle.

После принятия штрихового кода поместите Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните кнопку Next.

d.

Далее следовать инструкциям в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle

.

После

принятия штрихового кода поместите Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Щелкните Finish. Замените и закройте отсек для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR и/или BIO-

FLASH, следует нажать кнопку Bulks Inventory F9 (в верхнем правом углу). На

экранеInventory – Bulks щелкните кноку Sys. Rinse. В новом окне Add System Rinse –

Remove bottles, щелкните Next. Следуйте инструкциям в новом окне Add System

Rinse – Add bottle. После принятия штрихового кода щелкните Finish, если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране Inventory – Bulks

следует

нажать кнопку Fluid Waste. Извлеките и утилизируйте жидкие отходы. Щелкните кнопку

Next. После замены пустого флакона щелкните Finish.

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Во время первого использования картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие

ш а г и ,

ч т о б ы

т о ч н о

у с т а н о в и т ь

к а р т р и д ж

в

и н с т р у м е н т

ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Примечание:

Не

использовать

картридж

с

реагентами,

если

видны

какие-либо

признаки

повреждения.

Картридж с реагентами QUANTA Flash GBM: Микрочастицы оседают во время

транспортировки

и

хранения

и

необходимо

провести

смешивание

для

повторного

суспендирования.

1.

Во время первого использования аккуратно

перевернуть

картридж

30

раз,

избегая

образования

пены.

Проводят

проверку

на

полное

ресуспендирование

микрочастиц.

Если

микрочастицы

ресуспендированы

неполностью,

то

продолжают

переворачивать

картридж

до

полного

ресуспендирования

микрочастиц.

НЕ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы

не

ресуспендируются.

2.

Сразу после ресуспендирования

микрочастиц помещают картридж с

реагентами на твердую поверхность для

у д а л е н и я

к р а с н о г о

я з ы ч к а .

Держите

картридж с реагентами в одной руке. Другой

рукой крепко возьмитесь

за красный язычок

на задней стороне картриджа с реагентами и

вытащите его полностью.

3.

Нажать на два фиксатора по бокам

прокалывающего колпачка (серая часть) и

надавить на верхнюю часть картриджа с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

в идн ы.

НЕ

ПЕР ЕВ ОР АЧ ИВАТ Ь

ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для

реагентов прибора ACUSTAR и/или BIO-FLASH. После помещения картриджа в

карусель для реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое

смешивание микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования, а затем каждые 75 дней. Программное обеспечение не разрешит

использование, если эти требования не будут выполнены.

2.

Подробные

инструкции

по

калибровке

картриджа

с

реагентами

см.

в

разделе

Калибраторы QUANTA Flash

®

GBM 701141 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку Worklist в верхней части экрана и выбрать вкладку Racks внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать GBM из панели анализа. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместите образцы в выбранные положения в стойке для образцов и поместите

стойку для образцов в карусель инструмента.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажмите значок Start F4

для начала анализа.

Контроль качества

Контрольные препараты QUANTA Flash GBM (продаются отдельно - номер детали INOVA

701142)

содержат

положительный

и

отрицательный

контроли

анализа

GBM.

Подробные

инструкции

о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу,

а

также

по

выполнению

контроля

см.

в

разделе

Контрольные

препараты

QUANTA

Flash

®

GBM

701142

данного

вкладыша.

Контрольные

препараты

рекомендуется анализировать один раз в каждый день проведения анализа.

Вычисление результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash GBM рассчитана шеститочечная обобщающая кривая.

Данные четыре параметра логистической кривой закодированы в штриховом коде каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с

реагентами

автоматическая

специфическая рабочая кривая будет использоваться, чтобы преобразовать ОСЕ в ХЕ.

После

этого реактивность антител к БМК можно классифицировать согласно приведенной ниже

таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность, выраженная в ХЕ, непосредственно связана с титром аутоантител в образце

пациента. Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будут отражены в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

которых

пропорциональны

количеству антител.

Регистрируемый диапазон анализа составляет от 2,9 ХЕ до 1437,8 ХЕ. Если результат

пациента будет менее 2,9 ХЕ, то система ACUSTAR-BIO-FLASH отобразит это в виде

индикации “<2,9 ХЕ”. Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, то его считают отрицательным

результатом. Если результат пациента будет больше 1437,8 ХЕ, то система ACUSTAR и/или

BIO-FLASH

отобразит

это

в

виде

индикации

“>

1437,8

ХЕ”.

Этот

результат

считают

положительным.

В

программном

обеспечении

ACUSTAR

и/или

BIO-FLASH

есть

опция

Автоматический

повторный

анализ.

Если

эта

опция

выбрана,

прибор

будет

автоматически

производить

повторный

анализ

любого

образца,

результат

которого

превышает > 1437,8 ХЕ, путем дополнительного разведения его в 20 раз. Фактическое

значение в ХЕ будет рассчитано с учетом дополнительного коэффициента разведения.

Интерпретация результатов

Набор

реагентов

QUANTA

Flash

способен

обнаружить

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов.

Каждая

лаборатория

должна

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующие данные: «Данные результаты получены с помощью иммунохемилюминесцентного

анализа INOVA QUANTA Flash GBM. Значения, полученные с помощью методик анализа

разных производителей, не могут использоваться взаимозаменяемо. Указанные значения

содержания антител не всегда соотносятся с титром конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не

все

пациенты,

страдающие

синдромом

Гудпасчера,

имеют

положительные

результаты на антитела к БМК.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное смешивание реагентов до первого использования может привести к

ошибочным результатам.

4.

Технические характеристики данного анализа не были установлены для матриц кроме

сыворотки.

Математические ожидания

Для

установления

ожидаемых

значений,

была

испытана

сыворотка,

полученная

от

400

практически

здоровых

доноров.

Среднее

значение

составило

3,3

ХЕ,

а

доверительный

интервал с вероятностью 95 % был определен как 5,1 ХЕ. Рекомендуется, чтобы каждая

лаборатория устанавливала собственные нормы, характерные для отражения популяции

пациентов.

Отслеживаемость

В настоящее время нет признанного международного стандарта для измерения антител к

БМК.

Метод сравнения с предикатным устройством

Образцы

для

анализа

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных исследований, которые были в пределах регистрируемого диапазона данного

анализа. Эти образцы были проанализированы с помощью анализа QUANTA Flash GBM и

эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение методов (N=138)

ИФА БМК

Процентное совпадение

(достоверность 95%)

Положительная

Отрицательная

Итого

QUANTA Flash

®

GBM CIA

Положительная

91

2

93

Положительное совпадение =

91,0% (83,6-95,8%)

Отрицательная

9

36

45

Отрицательное совпадение =

94,7% (92,3-99,4%)

Итого

100

38

138

Общее совпадение =

92,0% (86,2-96,0%)

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 90 образцов больных

синдромом Гудпасчера, 50 – ревматоидным артритом, 67 – системной красной волчанкой, 50

– недифференцированным

воспалением

кишечника,

20

рассеянным

склерозом,

10

недифференцированным

заболеванием

соединительной

ткани,

10

неспецифическим

язвенным колитом, 32 – вирусным гепатитом B, 58 – вирусным гепатитом C, 10 – вирусом

иммунодефицита человека, 10 – сифилисом и 30 пациентов с другими заболеваниями.

Результаты данного тестирования представлены ниже:

Клиническое исследование (N = 487)

Диагноз

Анализ

(достоверность 95%)

Синдром

Гудпасчера

Не синдром

Гудпасчера

Итого

QUANTA Flash

®

GBM

Положительная

86

1*

87

Чувствительность =

95,6% (89,0-98,8%)

Отрицательная

4

396

400

Чувствительность =

99,7% (98,6-100,0%)

Итого

90

397

487

Общее совпадение =

99,0% (97,6-99,7%)

*Один образец больного ВИЧ

Прецизионность и воспроизводимость

Прецизионность анализа QUANTA Flash GBM была оценена в исследовании с участием 12

пациентов, проведенном в соответствии с руководством EP5-A2 Института клинических и

лабораторных стандартов. Результаты исследования представлены ниже:

В пределах

анализа

Между

анализами

В разные

дни

Итого

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

A

84

15,5

0,5

3,1%

0,5

3,1%

0,3

1,7%

0,7

4,7%

B

80

21,5

1,0

4,8%

1,2

5,4%

0,3

1,6%

1,6

7,4%

C

80

22,0

1,2

5,3%

0,9

4,2%

0,6

2,5%

1,6

7,3%

D

80

22,7

0,7

3,3%

1,1

4,8%

0,6

2,8%

1,5

6,5%

E

84

29,1

1,2

4,1%

0,8

2,9%

0,0

0,0%

1,4

4,9%

F

84

34,0

0,9

2,6%

1,1

3,1%

0,7

2,0%

1,5

4,5%

G

84

31,1

1,1

3,6%

0,6

1,9%

0,5

1,6%

1,4

4,4%

H

84

49,8

1,6

3,3%

1,3

2,6%

0,6

1,3%

2,2

4,4%

I

80

96,9

3,0

3,1%

1,9

1,9%

0,4

0,4%

3,5

3,6%

J

84

401,5

11,2

2,8%

10,9

2,7%

6,4

1,6%

16,9

4,2%

K

84

657,7

20,7

3,1%

17,1

2,6%

14,8

2,3%

30,7

4,7%

L

80

1189,1

113,2

9,5%

90,3

7,6%

27,4

2,3%

147,4

12,4%

Пределы

обнаружения;

линейные

и

регистрируемые

диапазоны

Нижний предел обнаружения для данного анализа, согласно руководству EP17-A Института

клинических

и

лабораторных

стандартов

(CLSI),

составляет

примерно

851

ОСЕ,

что

эквивалентно значению 0,7 ХЕ, которое значительно ниже нижнего порога регистрируемого

диапазона. Верхний предел обнаружения составляет около 620 000 ОСЕ, что примерно на

38%

выше

порога

регистрируемого

диапазона.

Весь

подлежащий

регистрации

диапазон

составляет

от

2,9

ХЕ

до

1437,8

ХЕ

и

является

линейным.

Исследование

линейности

проводили согласно руководству EP6-A CLSI. Результаты приведены ниже:

Образец

Диапазон

испытания (ХЕ)

Наклон прямой

(доверительный

интервал на

уровне 95%)

Y точка пересечения с

осью ординат

(доверительный

интервал на

уровне 95%)

1

от 1,7 до 17,6

0,95 (от 0,91 до 1,00)

0,02 (от -0,29 до 0,69)

0,99

2

от 3,5 до 35,1

1,01 (от 0,97 до 1,05)

-0,277 (от -1,14 до 0,59)

0,99

3

от 4,7 до 46,9

0,99 (от 0,95 до 1,04)

-0,202 (от -1,35 до 1,94)

0,99

4

от 10,6 до 97,1

0,98 (от 0,95 до 1,01)

-1,252 (от -2,89 до 0,39)

1,00

5

от 60.9 до 610,5

0,90 (от 0,96 до 1,01)

-0,666 (от -9,89 до 8,56)

1,00

6

от 1,90 до 962,5

1,10 (от 1,06 до 1,13)

3,87 (от -7,73 до 15,47)

1,00

Интерференция

При

анализе

образцов,

содержавших

до

10

мг/дл

билирубина,

200

мг/дл

гемоглобина,

1000 мг/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерола или 500 МЕ/мл ревматоидного фактора IgM

при помощи набора QUANTA Flash GBM явление интерференции не наблюдалось.

Реагенты QUANTA Flash Ro60,

кат. № 701148

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash Ro560 – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный

для

полуколичественного

определения

анти-Ro60

(SS-A

60)

антител

в

сыворотке

крови

человека.

Наличие

антител

к

Ro60

может

использоваться

в

сочетании

с

клиническими

данными

и

другими

лабораторными

анализами

для

облегчения

диагностики

системной

красной волчанки, синдрома Шегрена.

Общее описание

Присутствие

антиядерных

антител

(АЯА)

к

экстрагируемым

ядерным

антигенам

(ЭЯА)

обнаружено при самых разнообразных заболеваний соединительной ткани, и их определение

является скринингом данных заболеваний.

1

Антитела сыворотки взаимодействуют с несколькими различными ядерными антигенами, в

том числе с небольшими ядерными рибонуклеопротеинами, такими как, антиген А синдрома

Шегрена (SS-A) / Ro. Анти-Ro антитела (SS-A), которые впервые были описаны при системной

красной волчанке (СКВ) и синдроме Шегрена (СШ), являются наиболее высокоспецифичными,

из

идентифицированных

лабораториями, к

экстрагируемым ядерным

антигенам

(ЭЯА).

1-4

Существует два типа анти-Ro антител: анти-Ro 52 кДа (SS-A 52) и анти-Ro 60 кДа (SS-A 60),

специфичные

к

разным

антигенам.

Исторически

сложилось,

что

эти

антитела

рассматривались,

как

единая

система

аутоантител.

Однако,

недавние

исследования

свидетельствуют, что Ro60 и Ro52 не являются частью стабильного макромолекулярного

комплекса и, что анти-Ro52 и анти-Ro60 антитела ассоциированы с разными клиническими

проявлениями.

2

Ro60 антитела связываются с 60 кДа РНК-связывающим белком и часто присутствуют вместе

с Ro52 и анти-SS-B антителами. Аутоантитела к Ro60 встречаются в 30-50% у пациентов с

СКВ и в 50-80% у пациентов с синдромом Шегрена.

1-4,6,7

Анти-Ro60 антитела были также

обнаружены

у

больных

с

клиническими

признаками

СКВ,

которые

негативны

по

АЯА.

8

Положительный

результат

на

анти-Ro60

является

одним

из

трех

критериев

синдрома

Шегрена, по классификации американского колледжа ревматологии.

9

Более того, антитела

Ro60 и Ro52 имеют специфическую диагностическую значимость при врожденной сердечной

блокаде. Изолированная врожденная полная атриовентрикулярная блокада (ПАВБ) имеет

тесную связь с материнской анти-Ro и анти-SSB антителами.

10-12

Следует отметить, что реакционная активность отдельно Ro52 или Ro60 может быть не

определена при измерении классическим ИФА-методом, основанном на использовании смеси

обоих антигенов. Примерно 20% положительных образцов по Ro52 или Ro60 могут оставаться

не

верно

определенными

с

использованием

смеси

обоих

антигенов.

5

Поэтому

важно

тестировать на каждый из типов антител отдельно.

Такие

методы,

как

пассивная

двойная

диффузия

и

пассивная

гемагглютинация,

были

использованы для выявления антител к Ro60. Также были разработаны методы детекции с

помощью

ELISA.

Тест

QUANTA

Flash

Ro60

является

высокочувствительным

хемилюминесцентным иммуноферментным тестом для выявления и измерения Ro60 антител.

Данный

тест

является

полуколичественным

с

широким

аналитическим

диапазоном

измерения. Из преимуществ выделяются: произвольный доступ, непрерывная дозагрузка

образцов и короткое время анализа.

Принципы метода

Очищенный рекомбинантный Ro60 антиген иммобилизован на поверхности парамагнитных

латексных микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в условиях, которые

позволяют антигену оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж готов к первому

использованию, в пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и

содержимое перемешивается. Затем картридж с реагентами помещается в прибор ACUSTAR

и/или BIO-FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным раствором,

в

одноразовой

пластиковой

кювете.

Небольшое

количество

разбавленной

сыворотки

пациента,

Ro60-микрочастицы

и

буфер

для

анализа

помещаются

во

вторую

кювету

и

перемешиваются.

Смесь

инкубируется

при

температуре

37

C.

Затем

микрочастицы

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

После

этого

человеческие

анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы ACUSTAR и/или

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству анти-Ro60

антител, связанных с Ro60 антигеном на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

Flash

Ro60

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая, специфическая для каждой серии, которая заносится в

базу прибора посредством

считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора,

которая используется для пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для каждого

образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash Ro60, содержит следующие реагенты для

проведения 50 тестов:

a.

Парамагнитные

микрочастицы,

покрытые

Ro60,

законсервированные

до

первого использования.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Трейсер IgG – Человеческие анти-IgG антитела, связанные с изолюминолом;

солевой раствор, стабилизаторы и консерванты.

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, стабилизаторы и консерванты.

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе ACUSTAR и/или BIO-

FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

5.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

ACUSTAR и/или BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 20 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов:

1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2)

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

C.

3)

Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более низкой температуре.

Замороженные образцы должны быть хорошо перемешаны после размораживания и до

проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash Ro60

1

Буфера для ресуспендирования

1

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор ACUSTAR и/или BIO-FLASH с компьютерным модулем

Промывочный раствор ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash Ro60 (кат.номер: 701146)

Контроли QUANTA Flash Ro60 (кат.номер: 701147)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR и/

или BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR и/

или BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве пользователя,

поставляемом с системой ACUSTAR и/или BIO-FLASH. Для получения дополнительной

информации и устранения неполадок, связанных с данным тестом, обратитесь в

службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc.

по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и поменять их на новые.

Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой маркировки

(белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR и/или BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране

«Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System Rinse –

Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа, для правильной установки картриджа в анализатор

ACUSTAR и\или BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание:

Не используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать Ro60 микрочастицы:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

Если

микрочастицы

не

ресуспендируются,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

ДАННЫЙ

КАРТРИДЖ.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

других отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash

®

Ro60 Калибраторы 701146 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки лот картриджа с реагентами, для

которого проводили калибровку, готов к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране,

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать Ro60 из панели тестов. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Контроль качества

Контрольные материалы QUANTA Flash Ro60 (продаются отдельно - номер позиции INOVA

701147) содержат положительный и отрицательный контроли Ro60. Подробные инструкции о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA Flash

®

Ro60 Контроли

701147 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать один раз в

каждый день проведения анализа.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash Ro60 рассчитана пятиточечная обобщающая кривая.

Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-коде каждого

картриджа с реагентами. После калибровки картриджа с реагентами преобразование ОСЕ в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфичной

для

конкретного

устройства.

После этого реактивность антител к Ro60 можно классифицировать согласно

приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с титром

аутоантител в

образце

пациента.

Увеличение

и уменьшение

концентрации

антител

у

пациента

будет

отражено

в

с о о т в е т с т в у ю щ е м

п о в ы ш е н и и

и л и

с н и ж е н и и

Х Е ,

к о л и ч е с т в о

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый диапазон теста составляет от 4,9 ХЕ до 1374,8 ХЕ. Если результат пациента

будет менее 4,9 ХЕ, то система ACUSTAR и/или BIO-FLASH отобразит его в виде «<4,9 CU».

Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если

результат пациента будет больше 1374,8 ХЕ, система ACUSTAR и/или BIO-FLASH

отобразит

его

в

виде

«>1374,8

CU».

Этот

результат

считается

положительным.

В

программном

обеспечении есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный анализ). Если эта опция

выбрана,

прибор

будет

автоматически

производить

повторный

анализ

любого

образца,

результат которого превышает 1374,8 ХЕ, путем дополнительного разведения его в 20 раз.

Фактическое

значение

в

ХЕ

будет

рассчитано

с

учетом

дополнительного

коэффициента

разведения. Функция автоматического повторного анализа расширяет диапазон анализа на

27,496 ХЕ.

Интерпретация результатов

Результаты теста QUANTA Flash Ro60 могут иметь небольшие различия между популяциями

пациентов. Для каждой лаборатории рекомендуется подтверждать нормальный диапазон,

указанный

производителем.

Также,

лаборатория

может

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующее

утверждение:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного теста INOVA QUANTA Flash Ro60. Значения, полученные с

помощью

тестов

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо.

Указанные

значения

содержания

аутоантител

не всегда

соотносятся

с

титром конечной

точки».

Прослеживаемость

В настоящее время нет ни одной международно апробированной сыворотки (референсная) по

Ro60 антителам для стандартизации анализов анти-Ro60 антител. Вместо референсной

сыворотки из Центра Контроля и Профилактики Заболеваний были протестированы анти-SS-

A/Ro антител (IS2105 ANA # 7 anti-SS-A/Ro) и определена концентрация равная > 1374,8 ХЕ.

Ограничения методики

1.

Не все пациенты, страдающие СКВ или с синдромом Шегрена положительны по Ro60

антителам.

2.

Результаты данного теста следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное ресуспендирование Ro60 микрочастиц может привести к получению

меньших значений, чем при должном ресуспендировании.

4.

Технические характеристики данного теста были установлены только для сыворотки

крови.

Референсные значения

Пороговое значение было установлено путем тестирования 156 референсных образцов. 115

из них от здоровых доноров (15 мужчин/100 женщин, 19-69 лет), 8 образцов положительных

по вирусу гепатита (6 мужчин/2 женщины, 19-54 года), 5 положительных по сифилису (1

мужчина/4 женщины, 27-57 лет), 5 положительных на ВИЧ (4 мужчины/1 женщина, 28-51 год),

и 23 RA образцов (данные о поле/возрасте отсутствуют). На основе полученных результатов

референсных

образцов

было

установлено

пороговое

значение

равное

20

ХЕ

(>98%

перцентиль).

Ожидаемые значения

Ожидаемое значение в нормальной популяции является «негативным». Уровень аутоантител

к Ro60 был попределен для 98 условно здоровых доноров крови (52 женщин и 46 мужчин, 17 -

60 лет) с использованием QUANTA Flash Ro60. С cut-off = 20 ХЕ, 2 (2,0%) образцов были

положительными

на

QUANTA

Flash

Ro60.

Средняя

концентрация

составила

6,1

ХЕ,

а

диапазон значений от <4,9 до 84,8 ХЕ.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое исследование с использованием 361 образца, из которых: 100

пациентов с СКВ, 39 с СШ. В качестве контроля, мы включили 20 пациентов в ревматоидным

артритом,

20

пациентов

с

аутоиммунным

тиреоидитом,

11

пациентов

с

целиакией,

33

пациентов

с

различными

инфекционными

заболеваниями

и

40

пациетов

с

другими

систематическими ревматоидными заболеваниями.

Клиническая чувствительность и специфичность для СШ (n=39), СКВ (n=100), используя

контрольную популяцию (n=124) рассчитаны в нижеследующих четырех таблицах:

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro60 при СШ:

Клинический анализ

n = 163

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СШ

Нет СШ

Всего

QUANTA

Flash

Ro60

Положительных

26

2

28

Чувствительность = 66,7%

(49,8-80,9%)

Отрицательных

13

122

135

Специфичность

=

98,4%

(94,3-99,8%)

Всего

39

124

163

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro60 при СКВ:

Клинический анализ

n = 224

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СКВ

Нет СКВ

Всего

QUANTA

Flash

Ro60

Положительных

26

2

28

Чувствительность = 26,0%

(17,7-35,7%)

Отрицательных

74

122

196

Специфичность = 98,4%

(94,3-99,8%)

Всего

100

124

224

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость

теста

QUANTA

Flash

Ro60

была

оценена

с

использованием

6

образцов

сыворотки,

в

соответствии

с

руководством

EP5-A2

CLSI.

Результаты

исследования

представлены ниже:

В одном тесте

Между

тестами

В разные дни

Всего

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ,

%

1

96

797,9

36,77

4,6

50,19

6,3

20,78

2,6

65,6

8,2

2

96

26,0

12,4

188,0

69,1

1,06

4,1

2,51

9,6

0,00

0,0

2,73

10,5

3

84

12,4

0,35

2,9

0,36

2,9

0,10

0,8

0,51

4,1

4

96

188,0

10,84

5,8

12,04

6,4

0,00

0,0

16,20

8,6

5

96

69,1

1,82

2,6

1,81

2,6

0,58

0,8

2,63

3,8

6

88

409,1

15,01

3,7

13,99

3,4

7,75

1,9

21,93

5,4

7

92

23,4

0,85

3,6

1,21

5,2

0,18

0,8

1,49

6,4

8

96

9,0

0,29

3,2

0,56

6,2

0,15

1,6

0,65

7,1

9

96

20,8

1,08

5,2

1,29

6,2

0,30

1,5

1,70

8,2

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

Регистрируемый диапазон (РД) составляет 4,9 ХЕ – 1374,8 ХЕ.

Предел

обнаружения

данного

теста

равен

527

ОСЕ,

что

ниже

РД

теста

(4,9

ХЕ).

В

соответствии с руководством CLSI EP17-А, пропорция ложноположительных результатов (α)

менее 5% и ложноотрицательных (β) менее 5%.

Весь РД, 4,9 ХЕ – 1374,8 ХЕ является линейным. Исследование на линейность проводили в

соответствии

с

CLSI

EP6-A

с

использованием

4

образцов

сыворотки

с

различными

концентрациями

анти-Ro60.

Все

4

образца

показали

индивидуальную

линейность

при

разбавлении,

и

после

объединения

данных,

были

получены

следующие

результаты

с

линейной регрессией:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Отклонение (95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения

с осью ординат (95 %

доверительный

интервал)

Все

образцы

3.6 - 1370.1

1.00 (0.98 - 1.01)

1.69 (-4.58 - 7.95)

1.00

Интерференция, перекрестная реактивность

Интерференции не было обнаружено: гемоглобин до 200 мг/дл, триглицериды до 1000 мг/дл

холестерин до 224,3 мг/дл, билирубин до 10 мг/дл и РФ IgM до 500 МЕ/мл.

Сто образцов от пациентов с различными аутоиммунными и инфекционными заболеваниями

было

обследовано

на

перекрестную

реактивность.

Один

образец

от

пациента

с

ревматоидным артритом был положительным на QUANTA Flash Ro60.

Сравнение метода

Образцы

для

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований (пациенты с СШ, СКВ, контроли с другими заболеваниями, и здоровые доноры

крови), которые находились в пределах регистрируемого диапазона теста. Эти образцы были

проанализированы с помощью теста QUANTA Flash Ro60 и эталонного твердофазного ИФА.

Данные представлены в таблице:

Сравнение методов

(N=77)

ИФА – как негативный

Ro60 ELISA

Анализ

(95% достоверность)

Отриц.

Положит.

Всего

QUANTA

Flash

Ro60

Отрицательных

21

1

22

Положительное согласование =

98.0% (89.1 – 99ю9%)

Положительных

7

48

55

Отрицательное согласование =

75.0% (55.1 – 89.3%)

Всего

28

49

77

Общее согласование = 89.6%

(80.6-95.4%)

Сравнение методов

(N=62)

ИФА – как позитивный

Ro60 ELISA

Анализ

(95% достоверность)

Отриц.

Положит.

Всего

QUANTA

Flash

Ro60

Отрицательных

20

2

22

Положительное согласование =

98.0% (89.1 – 99.9%)

Положительных

6

49

55

Отрицательное согласование =

75.0% (55.1 – 89.3%)

Всего

26

51

77

Общее согласование = 89.6%

(80.6 – 95.4%)

Реагенты QUANTA Flash SS-B,

кат. № 701153

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash SS-B – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный для

полуколичественного

определения

анти-SS-B

антител

(антитела

к

антигену

синдрома

Шегрена типа B) в сыворотке крови человека. Наличие антител к SS-B может использоваться

в

сочетании

с

клиническими

данными

и

другими

лабораторными

исследованиями

для

облегчения диагностики системной красной волчанки и синдрома Шегрена.

Общее описание

Антинуклеарные антитела (AНA) выявляются при разнообразных заболеваниях

соединительной ткани и служат в качестве чувствительного скрининг-анализа.

1

AНA-положительные сыворотки реагируют с несколькими различными ядерными антигенами,

в том числе небольшими ядерными рибонуклеопротеинами, таким как SS-B, также известный

как волчанка антигена La.

2

Малые ядерные рибонуклеопротеины являются РНК-белковыми

комплексами, которые связаны с немодифицированной пре-мРНК и различными другими

белками образуя сплайсосомы - большой РНК-белковый комплекс, на котором происходит

сплайсинг пре-мРНК. Анти-SS-B антитела реагируют с 47 кДа белком, который связан с hY-

РНК. Анти-SS-B антитела редко обнаруживаются без anti-SS-A/Ro60, и как SS-A и SS-B белки

ассоциируют с тем же типом РНК. Аутоантитела к SS-B антигену обнаруживаются у 5-15%

пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) и у 30-50% больных с синдромом Шегрена

(СШ).

3-7

Положительный результат сыворотки на анти-SS-B/La является одним из трех критериев,

указанных в классификационных критериях для синдрома Шегрена Американского колледжа

ревматологии.

8

Больные СКВ, с антителами к SS-B и SS-A, в отличие от SS-А в одиночку, как правило, имеют

более легкие формы болезни с более низкой частотой нефрита и антител к dsDNA.

9

Анти-SS-

B IgG вместе с анти-Ro60 и Ro52 передаются через плаценту в последнем триместре, что

может привести к патологии у ребенка: волчанке или врожденной сердечной блокаде.

10-13

Существует разнообразие методов, включая реакцию Оухтерлони (двойной диффузии) и

пассивную агглютинацию, которые используются для выявления антител к SS-B. Также,

существуют ИФА для обнаружения анти-SS-B антител.

QUANTA

Flash

S

S- B является

высокочувствительным ИХЛА для выявления и измерения анти-SS-B антител, который

обеспечивает полуколичественные результаты в широком аналитическом диапазоне

измерения с удобством произвольного доступа, непрерывной загрузкой образцов и коротким

временем анализа.

Принципы метода

Очищенный рекомбинантный SS-B антиген иммобилизован на поверхности парамагнитных

латексных микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в условиях, которые

позволяют антигену оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж готов к первому

использованию, в пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и

содержимое перемешивается. Затем картридж с реагентами помещается в прибор ACUSTAR

и/или BIO-FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным раствором,

в одноразовой пластиковой кювете. Небольшое количество разбавленной сыворотки

пациента, SS-B-микрочастицы и

б у ф е р

д л я

а н а л и з а

п о м е щ а ю т с я

в о

в т о р у ю

кювету и

перемешиваются. Смесь инкубируется при температуре 37

C. Затем микрочастицы

намагничиваются и несколько раз промываются. После этого человеческие анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы ACUSTAR и/или

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству анти-SS-B

антител связанных с SS-B антигеном на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

Flash

SS-B

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора,

которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для

каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж

с

реагентами

QUANTA

Flash

SS-B

содержит

следующие

реагенты

для

проведения 50 тестов:

a.

Парамагнитные

микрочастицы,

покрытые

SS-B,

законсервированные

до

первого использования

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Трейсер IgG – Человеческие анти-IgG антитела связанные с изолюминолом,

солевой раствор, стабилизаторы белка и консерванты

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе ACUSTAR и/или BIO-

FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

5.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

ACUSTAR и/или BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 20 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

с

микробной

контаминацией,

подвергшиеся

термическому

воздействию

или

содержащие

видимые частицы, не должны использоваться. Образцы, содержащие до 10 мг/дл билирубина,

200 мг/дл гемоглобина, 1000 мг/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерина, или 500 МЕ/мл IgM

ревматоидного фактора не оказывают интерферирующего воздействия на тест QUANTA Flash

SS-B.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов:

1) Образцы должны храниться при комнатной температуре не более 8 часов.

2)

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо хранить при

температуре 2-8

C.

3)

Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более низкой температуре.

Замороженные образцы должны быть хорошо перемешаны после размораживания и до

проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash SS-B

1

Буфера для ресуспендирования

1

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор ACUSTAR и/или BIO-FLASH с компьютерным модулем

Промывочный раствор ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR и/или BIO-FLASH

Калибраторы QUANTA Flash SS-B (каталожный номер: 701151)

Контроли QUANTA Flash SS-B (каталожный номер: 701152)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR и/или BIO-

FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR и/

или BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве

пользователя, поставляемом с системой ACUSTAR и/или BIO-FLASH. Для получения

дополнительной информации и устранения неполадок, связанных с данным тестом,

обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR и/или BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране

«Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System Rinse –

Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа, для правильной установки картриджа в анализатор

ACUSTAR и/или BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание:

Не используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать SS-B микрочастицы:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

Если

микрочастицы

не

ресуспендируются,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

ДАННЫЙ

КАРТРИДЖ.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

другие отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора ACUSTAR и/или BIO-FLASH.

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash

®

SS-B Калибраторы 701151 данного вкладыша.

3.

После

подтверждения

правильности

калибровки

лот

картриджа

с

реагентами,

на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать SS-B из панели тестов. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Контроль качества

Контрольные материалы QUANTA Flash SS-B (продаются отдельно – каталожный номер

INOVA

701152)

содержат

положительный

и

отрицательный

контроли

SS-B.

Подробные

инструкции

о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля в программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA Flash

®

SS-B

Контроли 701152 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать один

раз в каждый день проведения анализа.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash SS-B рассчитана пятиточечная обобщающая кривая.

Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-коде каждого

картриджа с реагентами. После калибровки картриджа с реагентами преобразование ОСЕ в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфичной

для

конкретного

устройства.

После этого реактивность антител к SS-B можно классифицировать согласно

приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с титром

аутоантител

в

образце

пациента.

Увеличение

и уменьшение

концентрации

антител

у

пациента

будет

отражено

в

с о о т в е т с т в у ю щ е м

п о в ы ш е н и и

и л и

с н и ж е н и и

Х Е ,

к о л и ч е с т в о

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый диапазон теста составляет от 3,3 ХЕ до 1706,8 ХЕ. Если результат пациента

будет менее 3,3 ХЕ, то система ACUSTAR и/или BIO-FLASH отобразит его в виде «<3,3 CU».

Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если

результат пациента будет больше 1706,8 ХЕ, система ACUSTAR и/или BIO-FLASH

отобразит

его

в

виде

«>1706,8

CU».

Этот

результат

считается

положительным.

В

программном

обеспечении

ACUSTAR

и/или

BIO-FLASH

есть

опция

«Auto-Rerun»

(Автоматический

повторный анализ). Если эта опция выбрана, прибор будет автоматически производить

повторный

анализ

любого

образца,

результат

которого

превышает

1706,8

ХЕ,

путем

дополнительного разведения его в 10 раз. Фактическое значение в ХЕ будет рассчитано с

учетом дополнительного коэффициента разведения.

Интерпретация результатов

Результаты

теста

QUANTA Flash

могут

иметь

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов. Для каждой лаборатории рекомендуется подтверждать нормальный диапазон,

указанный

производителем.

Также,

лаборатория

может

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующее

утверждение:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного теста INOVA QUANTA Flash SS-B. Значения, полученные с

помощью

тестов

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо.

Указанные

значения

содержания

аутоантител

не

всегда

соотносятся

с

конечной

точкой

титрования».

Ограничения методики

1.

Не все больные СКВ и СС положительны к SS-B антителам. Результаты данного теста

следует использовать вместе с клинической картиной и другими серологическими

тестами.

2.

Недостаточное ресуспендирование SS-B микрочастиц может привести к получению

меньших значений, чем при должном ресуспендировании.

3.

Технические характеристики данного теста были установлены только для сыворотки

крови.

Референсный диапазон

Пороговое

значение

было

определено

путем

тестирования

207

референсных

образцов,

состоящих из 182 образцов от контрольных субъектов, и 25 образцов с положительным

результатом антител SS-B. На основе полученных результатов референсных образцов было

установлено пороговое значение равное 20 ХЕ (>99 перцентиль).

Ожидаемые значения

Уровни анти-SS-B аутоантител были проанализированы в группе 200 здоровых доноров крови

(152 женщин и 48 мужчин, в возрасте от 17 до 60 лет, со средним возрастом 32 года и

медианой возраста 29 лет) с помощью QUANTA Flash SS-B. С пороговым значением равным

20

ХЕ,

2

(1,0%)

образца

оказались

положительными

на

QUANTA

Flash

SS-B.

Средняя

концентрация составила 4,3 CU, а значения в диапазоне от <3,3 до 174,1 ХЕ.

Клиническая чувствительность и специфичность

В общей сложности, в клиническом исследовании были использованы 566 образцов, в том

числе 240 больных СКВ из двух разных когорт и 40 больных СШ из двух разных когорт. В

качестве

контроля,

мы

включили

85

пациентов

с

аутоиммунными

и

не

аутоиммунными

заболеваниями щитовидной железы, 2 пациента с аутоиммунными заболеваниями печени,

154

пациента

с

ревматическими

заболеваниями,

и

30

пациентов

с

различными

инфекционными

заболеваниями.

Кроме

того,

был

проведен

ретроспективный

анализ

15

образцов из Колледжа американских патологов (CAP) и Великобританской Национальной

Службы

Внешний

Оценки

Качества

(UKNEQAS),

которые

использовались

только

в

исследовании сравнения методов.

Клиническая чувствительность и специфичность для СШ (п = 40) и СКВ (п = 240), используя

контрольную популяцию (N = 271) рассчитана в двух таблицах ниже:

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash SS-B при СШ:

Клинический анализ

n = 311

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СШ

Нет СШ

Всего

QUANTA

Flash

SS-B

Положительных

14

7*

21

Чувствительность =

35.0% (20.6-51.7%)

Отрицательных

26

264

290

Специфичность =

97.4% (94.8-99.0%)

Всего

40

271

311

* Один пациент со склеродермией, один с аутоиммунным заболеванием печени, и один с

ревматоидным

артритом

(РА);

все

три

также

положительны

на

SS-B

ИФА.

Три

дополнительных образца были от пациентов с РА, а последний пациент с псориатической

артропатией.

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash SS-B при СКВ:

Клинический анализ

n = 177

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СКВ

Нет СКВ

Всего

QUANTA

Flash

SS-B

Положительных

36

3

39

Чувствительность = 44,4%

(33,4-55,9%)

Отрицательных

45

93

138

Специфичность = 96,9%

(91,1-99,4%)

Всего

81

96

177

* Один пациент со склеродермией, один с аутоиммунным заболеванием печени, и один с

ревматоидным артритом (РА); все три также положительны на SS-B ИФА. Три

дополнительных образца были от пациентов с РА, а последний пациент с псориатической

артропатией.

Распределение

контрольной

популяции

с

заболеваниями,

которая

использовалась

в

валидационном исследовании:

Группа пациентов

N

Положительных

Отрицательных

Аутоиммунные

заболевания щитовидной

железы

42

42

0

Не-аутоиммунные

заболевания щитовидной

железы

43

43

0

Аутоиммунные

заболевания печени

2

1

1

Склеродермия

41

40

1

Ревматоидный артрит

70

66

4

Другие системные

ревматические

заболевания

43

42

1

вирусный гепатит

20

20

0

ВИЧ

5

5

0

Сифилис

5

5

0

Всего

271

264

7

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость

теста

QUANTA

Flash

SS-B

была

оценена

с

использованием

7

образцов

сыворотки,

в

соответствии

с

руководством

EP5-A2

CLSI.

Результаты

исследования

представлены ниже:

В одном тесте

Между

тестами

В разные

дни

Всего

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

SD

CV, %

SD

CV,%

SD

CV,%

SD

CV, %

1

112

10.0

0.4

3.9%

0.4

4.1%

0.8

8.3%

1.0

10.1%

2

104

23.1

1.1

4.7%

0.4

1.8%

2.1

9.1%

2.4

10.4%

3

96

91.4

3.3

3.7%

3.3

3.6%

7.6

8.3%

8.9

9.7%

4

96

187.9

17.4

9.3%

10.9

5.8%

15.9

8.5%

26.0

13.8%

5

92

452.8

20.1

4.4%

27.6

6.1%

44.6

9.9%

56.2

12.4%

6

96

872.3

61.1

7.0%

59.0

6.8%

62.4

7.2%

105.4

12.1%

7

104

1371.41

96.3

7.0%

33.9

2.5%

104.8

7.6%

146.3

10.7%

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

Нижний предел обнаружения данного теста, согласно руководству CLSI EP17-А, равен 508

ОСЕ. Нижняя граница регистрируемого диапазона данного теста равна 3.3 ХЕ. Весь РД, с 3.3

ХЕ до 1706.8 ХЕ является линейным. Исследование на линейность проводили в соответствии

с CLSI EP6-A с использованием 7 образцов сыворотки с различными концентрациями анти-

SS-B.

Все

7

образцов

показали

индивидуальную

линейность при

разбавлении,

и

после

объединения данных, были получены следующие результаты с линейной регрессией:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Отклонение (95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения

с осью ординат (95 %

доверительный

интервал)

Все

образцы

3.4 - 1828.1

1.03 (1.01 - 1.04)

3.44 (-2.72 to 9.60)

0.99

Сравнение метода с устройством-образцом

Образцы

для

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований (пациенты с СШ, СС, СКВ, аутоиммунным миозитом, контроли с другими

заболеваниями, и здоровые доноры крови), которые находились в пределах регистрируемого

диапазона теста. Эти образцы были проанализированы с помощью теста QUANTA Flash SS-B

и эталонного твердофазного ИФА. Данные представлены в таблице:

Сравнение методов

(N=62)

SS-B ELISA

Анализ

(95% достоверность)

Отриц.

Положит.

Всего

QUANTA

Flash

SS-B

Отрицательных

78

8

86

Положительное согласование =

83.3% (69.8 – 92.5%)

Положительных

7

40

47

Отрицательное согласование =

91.8% (83.8 – 96.6%)

Всего

85

48

133

Общее согласование =

88.7% (82.1 – 93.5%)

Реагенты QUANTA Flash Jo-1,

кат. № 701163

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash Jo-1 – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный

для полуколичественного определения аутоантител к Jo-1 в сыворотке крови человека на

приборе

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

®

.

Этот

тест

применяется

совместно

с

другими

клиническими данными для выявления заболеваний соединительной ткани, в

том числе полимиозита.

Общее описание и объяснение анализа

Антинуклеарные

антитела

(АНА)

обнаруживаются

при

множестве

заболеваний

соединительной

ткани,

и

потому

анализы,

определяющие

их

наличие,

являются

чувствительным диагностическим средством.

1

Аутоантитела к антигену Jo-1, известному

как

гистидил-тРНК-синтетаза,

обнаруживаются

у

больных

полимиозитом,

дерматомиозитом и перекрестными синдромами с признаками миозита.

2

Антитела к Jo-1

обнаруживаются у 15–25 % всех пациентов, удовлетворяющих диагностическим критериям

миозита.

2

При полимиозите эти антитела встречаются чаще, чем при дерматомиозите, при

прочих

же

заболеваниях

определяются

редко.

2

Антитела

к

Jo-1

тесно

связаны

с

интерстициальным заболеванием легких: практически у всех пациентов, положительных в

отношении антител к Jo-1, наблюдаются признаки поражения легких.

2

Таким образом,

антитела

к

Jo-1

описаны

как

основные

аутоантитела,

определяемые

у

пациентов

с

антисинтетазным

синдромом,

который

характеризуется

проявляющимися

в

различной

степени интерстициальными заболеваниями легких, миозитом, артропатией, лихорадкой,

феноменом

Рейно

и

«руками

механика».

2

Для

обнаружения

антител

к

Jo-1

было

предложено множество методов, в том числе двойная иммунодиффузия по Оухтерлони и

пассивная агглютинация. Также были разработаны твердофазные иммуноферментные

анализы для определения анти-Jo-1 антител, эффективные в клинических условиях.

3

Принципы метода

Рекомбинантный

Jo-1

иммобилизован

на

поверхности

парамагнитных

микрочастиц,

которые хранятся в картридже для реагентов в условиях, которые позволяют антигену

оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж для анализа готов для использования

в первый раз, весь картридж необходимо перевернуть несколько раз, чтобы полностью

смешать реагенты. Затем картридж с реагентами помещается в прибор ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляется

в

приборе

с

помощью

ополаскивателя

системы,

налитого

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы, покрытые Jo-1и буфер для

анализа

помещаются

во

вторую

кювету

и

перемешиваются.

Данная

кювета

инкубируется при

температуре

37

°

C.

Затем

микрочастицы

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

После

этого

антитела,

конъюгированные

с

изолюминолом,

добавляются

в

кювету

и

инкубируются

при

температуре

37

°

C.

Микрочастицы

снова

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

Конъюгат

изолюминола

вызывает

люминесцентную

реакцию

при

добавлении

реагентов

(«Триггеров»)

в

кювету.

Свечение,

возникающее

в

результате

этой

реакции,

измеряется

в

относительных

световых

единицах

(ОСЕ)

посредством оптической

системы

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален количеству

связанного

конъюгата

изолюминола,

которое,

в

свою

очередь,

пропорционально

количеству

антител

к

Jo-1,

связанных

с

Jo-1

на

микрочастицах.

В анализе QUANTA Flash Jo-1 используется предварительно определенная обобщающая

кривая, специфическая для каждой серии, которая загружается в прибор посредством

считывания

штрих-кода,

нанесенного

на

картридж

с

реагентами.

На

основании

результатов анализа двух калибраторов строится калибровочная кривая для конкретного

прибора,

которая

используется

для

расчета

пересчета

ОСЕ

в

хемилюминесцентные

единицы (ХЕ) для каждого пациента.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash Jo-1, содержит следующие реагенты для

проведения 50 определений:

a.

Парамагнитные микрочастицы,

покрытые Jo-1,

в

растворе,

содержащем

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный

Трис

солевой

раствор,

полисорбат

Твин

20,

стабилизаторы

белка

и

консерванты.

c.

Метка IgG – меченые изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, белковые стабилизаторы и консервирующее средство.

Предупреждения

1.

Буфер для анализа содержит вещество (0,02 % хлорамфеникола), которое по

данным штата Калифорния вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать потенциально взрывчатые азиды металлов. Для предотвращения

накопления азида раковины, использованные для утилизации реагента, следует

промыть большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо

незамедлительно

убирать

разлитые

реагенты.

При

утилизации

отходов необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные

экологические нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/

ИЛИ BIO-FLASH.

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

ф о р м а л и н ,

о т б е л и в а т е л ь ,

э т а н о л

и л и

д е т е р г е н т

м о г у т

п о в л и я т ь

н а

результаты

анализа. Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве

пользователя ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Нераскрытые картриджи с реагентами следует хранить при температуре 2-8

°

C. Не

замораживать. При надлежащем хранении и обращении реагенты сохраняют

стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 71 дней, по истечении которых должны быть

утилизированы. Программное обеспечение контролирует даты истечения срока

годности картриджей, находящихся в приборе, а также серий картриджей с

реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные

микроорганизмами,

подвергшиеся

термическому

воздействию

или

содержащие видимые частицы, не должны использоваться. Не допускается использование

сильно гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения

для образцов:

1.

Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить

в

холодильник при температуре 2-8

°

C.

3.

Если анализ не будет завершено в течение 48 часов или если образец необходимо

транспортировать,

он

должен

быть

заморожен

при

-20

°

C

или

более

низкой

температуре. Замороженные образцы должны быть хорошо перемешаны после

размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения анализа

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash h-tTG IgAJo-1

Н е о б х о д и м ы е

д о п о л н и т е л ь н ы е

м а т е р и а л ы ,

не

входящие в комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH с компьютерным управлением

Ополаскиватель системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибровочные препараты QUANTA Flash Jo-1 (номер детали: 701161)

Контрольные препараты QUANTA Flash Jo-1 (номер детали: 701162)

Использование хемилюминесцентного анализатора «BIO-

FLASH»

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве

оператора, поставляемом с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Для получения

дополнительной информации и устранения неполадок в связи с данным анализом

обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для

отходов. Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным

образом. Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и

нажать «Yes» в окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks» нажать кнопку «Triggers» слева. Появится

новое окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в

окне

« E m p t y

Waste Drawer» . Извлечь

т р и г г е р н ы е

ф л а к о н ы

и з

з а ж и м о в

и

н а ж а т ь

кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2

bottle». После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на

который нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH, следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На

экране «Inventory

– Bulks» нажать кнопку

«Sys. Rinse».

В

новом

окне

«Add System Rinse – Remove

bottles» нажать

«Next».

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add System

R i n s e

– Add

bottle». После принятия штрих-кода

н а ж а т ь

«Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks»

следует нажать кнопку «Fluid Waste» . Извлечь и утилизировать жидкие отходы.

Нажать кнопку «Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Во

время

первого

использования

картриджа

с

реагентами

необходимо

выполнить

следующие шаги, чтобы точно установить картридж в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH. Примечание: Не использовать картридж с реагентами, если видны какие-либо

признаки повреждения.

Картридж с реагентами QUANTA Flash h-tTG IgAJo-1: Микрочастицы оседают во время

транспортировки

и

хранения,

поэтому

их

необходимо

перемешать

для

ресуспендирования.

1.

Во время первого использования

аккуратно

перевернуть

картридж

30

раз,

и з б е г а я

о б р а з о в а н и я

пены. Провести

проверку на полное ресуспендирование

микрочастиц. Если микрочастицы

ресуспендированы не полностью,

продолжить переворачивать картридж до

полного ресуспендирования микрочастиц.

НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ КАРТРИДЖ, если

микрочастицы не ресуспендируются.

2.

Сразу после ресуспендирования

микрочастиц поместить картридж с

реагентами на твердую поверхность для

удаления красного язычка. Картридж с

реагентами необходимо удерживать

одной рукой. Второй рукой крепко взяться

за красный язычок на задней стороне

картриджа с реагентами и полностью

вытащить его.

3.

Н а ж а т ь

н а

д в а

ф и к с а т о р а

п о

бокам

прокалывающего колпачка (серая часть)

и надавить на верхнюю часть картриджа с

реагентами, пока он не окажется в

закрытом

положении.

Язычки

больше

не

д о л ж н ы

б ы т ь

в и д н ы .

НЕ

П Е Р Е В О Р А Ч И В А Т Ь

ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели

для реагентов прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. После помещения картриджа

в карусель для реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое

смешивание микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая

серия картриджа

с реагентами

должна

быть

откалибрована

до

первого

использования.

Программное

обеспечение

не

позволит

использовать

новую серию, пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные

инструкции

по калибровке

картриджа

с

реагентами

см.

в

разделе

QUANTA Flash

®

Jo-1 Калибраторы 701161 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks»

внизу.

2.

Выбрать

стойку

для

образцов,

которая

будет

использоваться,

выделив

ее на

экране или путем сканирования штрих-кода портативным считывателем штрих-

кодов. Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип

контейнера (пробирка/чашка) и выбрать Jo-1 из панели анализа. Повторить эти

шаги для всех образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху

экрана станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок

«Start F4», чтобы начать анализ.

Контроль качества

Контрольные препараты QUANTA Flash Jo-1 (продаются отдельно - номер детали INOVA

701162) содержат положительный и отрицательный контроли Jo-1. Подробные инструкции

о том, как вводить единичное значение и стандартное отклонение каждого контроля в

программу,

а

также

по

выполнению

контроля

см.

в

разделе

QUANTA

Flash

®

Jo-1

Контроли

701162

данного

вкладыша.

Рекомендуются

анализировать

контрольные

препараты один раз в каждый день проведения анализа; однако пользователи должны

также учитывать национальные/местные нормативные требования.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash Jo-1рассчитана шеститочечная Обобщающая

кривая. Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-

коде

каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с

реагентами

преобразование

ОСЕ

в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфической для конкретного устройства.

После этого реактивность антител к Jo-1

можно классифицировать согласно приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с

титром

аутоантител

в

образце пациента. Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будет

отражено

в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

которых

пропорционально концентрации антител.

Регистрируемый диапазон анализа составляет от 2,2 ХЕ до 1147,2 ХЕ. Если результат

пациента будет меньше 2,2 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH отобразит его в

виде «<2,2 CU». Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным

результатом. Если результат пациента будет больше 1147,2 ХЕ, система ACUSTAR И/

ИЛИ

BIO-FLASH

отобразит

его

в

виде

«>1147,2

CU».

Этот

результат

считается

положительным. В программном обеспечении

есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический

повторный анализ). Если эта опция

выбрана, прибор будет автоматически производить

повторный анализ любого образца,

результат которого

превышает

1147,2

ХЕ,

путем

дополнительного разведения его в 20 раз. Фактическое значение в ХЕ будет рассчитано с

учетом дополнительного коэффициент разведения.

Интерпретация результатов

Набор

реагентов

QUANTA

Flash

способен

обнаружить

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов.

Каждая

лаборатория

должна

установить

свой

собственный

нормальный

диапазон

на

основании

собственных

контролей

и

популяции

пациентов

согласно процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается, что результаты, полученные лабораторией, должны включать в себя

следующие

данные:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного анализа INOVA QUANTA Flash Jo-1. Значения, полученные

с

помощью

методик

анализа

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо. Указанные значения содержания антител не всегда соотносятся с

титром конечной точки.»

Ограничения методики

1.

Не все больные полимиозитом положительны в отношении антител к Jo-1.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной

и другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное

смешивание

реагентов

перед

первым

использованием

может

привести к ошибочным результатам.

4.

Технические характеристики данного анализа не были установлены для матриц,

отличных от сыворотки.

Ожидаемые результаты

Для установления ожидаемых значений, была испытана сыворотка, полученная от 400

практически

здоровых

доноров

крови.

Среднее

значение

составило

2,29

ХЕ,

а

доверительный интервал с вероятностью 95 % был определен как 2,19–2,40 ХЕ.

Сравнение метода с устройством-образцом

Образцы

для

анализа

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований,

которые

были

в

пределах

диапазона

аналитического

измерения данного анализа. Эти образцы были проанализированы с помощью анализа

QUANTA Flash Jo-1 и эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение метода

(N= 105)

Jo-1 ELISA

Процентное

совпадение

(95% достоверность)

Положительных

Отрицательных

Всего

QUANTA

Flash

®

Jo-1

CIA

Положительных

15

0

15

Совпадение положит.

результатов = 100,0%

(78,2-100,0%)

Отрицательных

0

90

90

Совпадение

отрицательных

результатов = 100,0%

(96,0-100,0%)

Всего

15

90

105

Общее совпадение =

100,0% (96,5-100,0%)

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 108 образцов

пациентов с полимиозитом (ПМ), 50 с ревматоидным артритом, 133 с системной красной

волчанкой, 17 с системным склерозом, 29 с множественным склерозом, 27 с вирусным

гепатитом B, 19 с вирусным гепатитом C, 6 с вирусом иммунодефицита человека, 10 с

сифилисом, 20 с язвенным колитом, 20 с болезнью Крона и 14 образцов пациентов с

другими патологиями. Кроме этого, в исследование были включены 400 образцов, взятых

у здоровых доноров крови. Результаты данного тестирования представлены ниже:

Клиническое исследование

(N = 853)

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

ПМ

Нет ПМ

Всего

QUANTA

Flash

®

Jo-1

Положитель

ных

15

1*

16

Чувствительность = 13,9% (8,0-

21,9%)

Отрицатель

ных

93

744

837

Чувствительность = 99,9%

(99,3-100,0%)

Всего

108

745

853

*

Образец, положительный в отношении Jo-1, был взят у пациента с перекрестным синдромом с

признаками системного склероза

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость анализа QUANTA Flash Jo-1 была оценена в исследовании с участием 8

пациентов. Результаты исследования представлены ниже:

Внутрианалитическая вариация

Межаналитическая вариация

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ,

%

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ,

%

A

10

5,7

0,1

1,8%

A

6

5,9

0,2

3,9%

B

10

14,6

0,2

1,5%

B

6

14,9

0,4

2,7%

C

10

32,9

0,9

2,7%

C

6

32,8

0,7

2,2%

D

10

38,0

1,2

3,2%

D

6

38,4

0,7

1,8%

E

10

83,5

2,0

2,4%

E

6

84,7

2,0

2,4%

F

10

252,7

5,2

2,1%

F

6

249,6

3,9

1,6%

G

10

392,9

3,4

0,9%

G

6

378,8

10,4

2,7%

H

10

791,8

12,1

1,5%

H

6

767,5

32,8

4,3%

Пределы обнаружения; линейные и аналитические диапазоны измерения

Нижний

предел

обнаружения

для

данного

анализа,

согласно

руководству

EP17-A

Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI ) составляет примерно 511,7

ОСЕ,

что

эквивалентно

0,01

ХЕ,

что

значительно

ниже

нижнего

порога

диапазона

аналитического измерения. Верхний предел обнаружения составляет около 1 000 000

ОСЕ, что примерно на 216 % выше порога диапазона аналитического измерения. Весь

диапазон

измерения

составляет

от

2,2

ХЕ

до

1147,2

ХЕ

и

является

линейным.

Исследование

линейности,

проводили

согласно

руководству

EP6-A

CLSI.

Результаты

приведены ниже:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Наклон прямой (95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения с осью

ординат (95 % доверительный

интервал)

1

1,44

до

14,4

0,98

0,95

до 1,01

0,30

0,07

до

0,54

1,00

3

4,43

до

44,3

0,99

0,96

до 1,02

0,17

-0,64

до

0,98

1,00

2

6,97

до

69,7

1,00

0,98

до 1,01

-0,42

-1,01

до

0,18

1,00

4

8,18

до

81,8

0,99

0,96

до 1,01

-0,59

-1,93

до

0,76

1,00

5

57,29

до

572,9

1,01

0,98

до 1,03

-7,36

-15,47

до

0,75

1,00

6

153,07

до

1530,7

1,01

0,95

до 1,07

42,25

-15,36

до

99,87

0,98

Реагенты QUANTA Flash DGP lgA,

кат. № 701168

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash DGP IgA – это имм`унохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный

для полуколичественного определения антител класса IgA к дезамидированному пептиду

глиадина (DGP) в сыворотке крови человека. Наличие антител класса IgA к DGP может

использоваться в сочетании с клиническими данными и другими лабораторными анализами

для облегчения диагностики глютензависимых энтеропатий: целиакии и герпетиформного

дерматита.

Общее описание и объяснение анализа

Целиакия

глютензависимая

энтеропатия,

которая

характеризуется

воспалением

и

характерным гистологическим уплощением слизистой кишечника, что приводит к синдрому

мальабсорбции. Точная этиология болезни остается неизвестной, однако установлено, что

токсичным веществом является глиадин – спирторастворимая фракция глютена пшеницы.

1,2

Изначально

для

диагностики

целиакии

и

связанных

с

ней

заболеваний

требовалось

проведение

серии

биопсий

кишечника.

Позже

Европейское

общество

детской

гастроэнтерологии и питания (ESPGAN)

3

и несколько других опубликованных исследований

4-6

рекомендовали использование серологических маркеров, таких как антитела к глиадину,

дезамидированным пептидам глиадина (DGP) и эндомизию (EMA) для того, чтобы сократить

количество кишечных биопсий для постановки диагноза.

Недавно было показано, что антитела пациентов с целиакией связывают очень ограниченное

число

специфических

эпитопов

на

молекуле

глиадина,

которые

были

выборочно

дезамидированы.

7-9

Считается,

что

дезамидирование

вызывается

ассоциированным

с

целиакией

ферментом

тканевой

трансглутаминазой.

10

На

основе

приведенных

выше

наблюдений были разработаны методы количественного определения с использованием

определенных дезамидированных пептидов глиадина. У них более высокая диагностическая

точность

для

определения

целиакии,

чем

у

стандартных

количественных

определений

антител к глиадину.

5,11-14

Стратегия чувствительного скрининга для выявления людей с целиакией в группе риска

включает в себя тестирование на антитела класса IgG и IgA к дезамидированным пептидам

глиадина, поскольку у значительной части пациентов с целиакией наблюдается отсутствие

IgA.

12

Несколько

исследований

показали

высокую

клиническую

эффективность

данной

стратегии тестирования

15,11-14

Герпетиформный дерматит (DH) – кожное заболевание, которое, как и целиакия, вызывается

употреблением белка пшеницы. У большинства больных ГД происходит атрофия ворсинок

слизистой оболочки тощей кишки, идентичная таковой при целиакии. При соблюдении такими

больными строгой безглютеновой диеты наблюдается улучшение состояния как кожи, так и

кишечника.

16,17

Современные серологические методы, в частности, анализы на антитела к

эндомизию

и

tTG,

демонстрируют

недостаточную

результативность

при

диагностике

ГД

(чувствительность в пределах 45–75 %

16

) в сравнении с чувствительностью, равной или

превышающей 95 %, при диагностике целиакии. В одном исследовании было обнаружено, что

антитела к DGP у больных ГД встречаются чаще, чем антитела к tTG.

18

Принципы метода

Синтетический

дезамидированный

пептид

глиадина

иммобилизован

на

поверхности

парамагнитных

латексных

микрочастиц,

которые

хранятся

в

картридже

для

реагентов

в

условиях, которые позволяют антигену оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж

для анализа готов для использования в первый раз, весь картридж необходимо перевернуть

несколько

раз,

чтобы

полностью

смешать

реагенты.

Затем

картридж

с

реагентами

помещается в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

®

.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляется

в

приборе

с

помощью

ополаскивателя

системы,

налитого

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы с дезамидированным пептидом

глиадина (DGP) и буфер для анализа помещаются во вторую кювету и перемешиваются.

Данная кювета инкубируется при температуре 37

°

C. Затем микрочастицы намагничиваются и

несколько

раз

промываются.

После

этого

антитела,

конъюгированные

с

изолюминолом,

добавляются

в

кювету

и

инкубируются

при

температуре

37

°

C.

Микрочастицы

снова

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

Конъюгат

изолюминола

вызывает

люминесцентную

реакцию

при

добавлении

реагентов

(«триггеров»)

в

кювету.

Свечение,

возникающее в результате этой реакции, измеряется в относительных световых единицах

(ОСЕ)

посредством

оптической

системы

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ, пропорционален

количеству

связанного

конъюгата

изолюминола,

которое, в свою очередь, пропорционально количеству антител к DGP, связанных с DGP на

микрочастицах.

В анализе QUANTA

Flash

DGP IgA используется предварительно определенная обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания

штрих-кода,

нанесенного

на

картридж

с

реагентами.

На

основании

результатов анализа двух калибраторов строится калибровочная кривая для конкретного

прибора, которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы

(ХЕ) для каждого пациента.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash DGP IgA, содержащий следующие реагенты.

a.

Парамагнитные

микрочастицы

в

буфере,

покрытые

DGP,

содержащем

стабилизаторы белка и консервант.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgA – меченные изолюминолом антитела к IgA человека в буфере,

содержащем стабилизаторы белка и консервант.

Предупреждения

1.

Буфер для анализа содержит вещество (0,02 % хлорамфеникола), которое по данным

штата Калифорния вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления

азида

раковины,

использованные

для

утилизации

реагента,

следует

промыть большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH

3.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

4.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

ф о р м а л и н ,

о т б е л и в а т е л ь ,

э т а н о л

и л и

д е т е р г е н т

м о г у т

п о в л и я т ь

н а

результаты

а н а л и з а .

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве

пользователя ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

т е м п е р а т у р е

2-8

°

C.

Н е

замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 38 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов: 1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов. 2) Если анализ не

будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в холодильник при

температуре

2-8

°

C. 3) Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо

транспортировать,

он

должен

быть

заморожен

при -20

°

C или более низкой температуре. Замороженные образцы должны быть хорошо

перемешаны после размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения анализа

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash DGP IgA

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH компьютерным управлением

Ополаскиватель системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибровочные препараты QUANTA Fl ash DGP IgA (номер детали: 701166)

Контрольные препараты QUANTA Fl ash DGP IgA (номер детали: 701167)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И / ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR И/

ИЛИ BIO-FLASH и программным обеспечением ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

и з л о ж е н ы

в

р у к о в о д с т в е

оператора, поставляемом с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Для

получения дополнительной информации и устранения неполадок в связи с данным

анализом обратитесь в службу технической поддержки

компании

INOVA Diagnostics,

Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes»

в окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране

«Inventory – Bulks» нажать

кнопку «Triggers» слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь

т р и г г е р н ы е

ф л а к о н ы

и з

з а ж и м о в

и

нажать

к н о п к у

« N e x t » .

Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2

bottle». После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на

который нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для

отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks

Inventory

F 9»

верхн ем

правом

углу) .

Н а

экране

«Inventory – Bulks» нажать

к н о п к у

«Sys.

Rinse».

В

новом

окне « Add

System

Rinse

– R e m o v e

bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks»

следует нажать кнопку «Fluid Waste» . Извлечь и утилизировать жидкие отходы.

Нажать кнопку «Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Во время первого использования картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие

шаги, чтобы точно установить картридж в прибор ACUSTAR

И / И Л И

BIO-FLASHПримечание:

Не использовать картридж с реагентами, если видны какие-либо признаки повреждения.

Картридж с реагентами QUANTA Flash DGP IgA: Микрочастицы оседают во время

транспортировки и хранения, поэтому их необходимо перемешать для ресуспендирования.

1.

Во время первого использования аккуратно

перевернуть

картридж

30

раз,

избегая

образования

пены.

Провести

проверку

на

полное

ресуспендирование

микрочастиц.

Если

микрочастицы

ресуспендированы

не

полностью,

продолжить

переворачивать

картридж

до

полного

ресуспендирования

микрочастиц.

НЕ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы

не

ресуспендируются.

2.

Сразу после ресуспендирования

микрочастиц поместить картридж с

реагентами на твердую поверхность для

у д а л е н и я

к р а с н о г о

я з ы ч к а .

К а р т р и д ж

с

реагентами необходимо удерживать одной

р у к о й .

В т о р о й

р у к о й

к р е п к о

в з я т ь с я

за

красный язычок на задней стороне

картриджа с реагентами и полностью

вытащить его.

3.

Нажать на два фиксатора по бокам

прокалывающего колпачка (серая часть) и

надавить на верхнюю часть картриджа с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

в идн ы.

НЕ

ПЕР ЕВ ОР АЧ ИВАТ Ь

ОТКРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4.

Осторожно поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для

р е а г е н т о в

п р и б о р а

A C U S T A R

И / И Л И

BIO-FLASHПосле помещения картриджа в

карусель для реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое

смешивание микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash

®

DGP IgA Калибраторы 701166 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать DGP IgA из панели анализа. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок запуска,

чтобы начать анализ.

Контроль качества

Контроли QUANTA Flash DGP IgA (продаются отдельно - номер детали INOVA 701167)

содержат

положительный

и

отрицательный

контроли

DGP

IgA.

Подробные

инструкции

о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля в программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA Flash

®

DGP

IgA Контроли 701167 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать

один раз в каждый день проведения анализа.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash DGP IgA производителем рассчитана пятиточечная

обобщающая кривая. Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в

штрих-коде

каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с реагентами

преобразование

ОСЕ

в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфической для конкретного устройства.

После этого реактивность антител класса IgA к

DGP можно классифицировать согласно приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Слабоположительный

20–30

Положительный

>30

Реактивность, выраженная в ХЕ, непосредственно связана с

титром аутоантител в образце

п а ц и е н т а .

У в е л и ч е н и е

и

у м е н ь ш е н и е

к о н ц е н т р а ц и и

а н т и т е л

у

п а ц и е н т а

б у д е т

о т р а ж е н о

в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации

антител.

Регистрируемый диапазон анализа составляет от 5,2 ХЕ до 2367,3 ХЕ. Если результат

пациента будет меньше 5,2 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASHтобразит его в виде

«<5,2 CU». Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом.

Если результат пациента будет больше 2367,3 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

отобразит его в виде «>2367,3 CU». Этот результат считается положительным. В программном

обеспечении есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный анализ). Если эта опция

выбрана, прибор будет автоматически производить повторный анализ любого образца,

результат которого превышает 2367,3 ХЕ, путем дополнительного разведения его в 10 раз.

Фактическое значение в ХЕ будет рассчитано с учетом дополнительного коэффициент

разведения.

Интерпретация результатов

Набор

реагентов

QUANTA

Flash

способен

обнаружить

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов.

Каждая

лаборатория

должна

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующие данные: «Данные результаты получены с помощью иммунохемилюминесцентного

анализа INOVA QUANTA Lite DGP IgA. Значения, полученные с помощью методик анализа

разных производителей, не могут использоваться взаимозаменяемо. Указанные значения

содержания аутоантител IgA не всегда соотносятся с титром конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не

все

пациенты,

страдающие

целиакией

или

герпетиформным

дерматитом,

положительны в отношении антител класса IgA к DGP. Кроме этого, отрицательный

результат в отношении антител IgA к DGP у нелеченных пациентов во многих случаях

может

объясняться

изолированной

недостаточностью

IgA,

относительно

часто

наблюдаемой при целиакии. Для диагностики таких состояний INOVA предлагает

тестовые наборы QUANTA Flash h-tTG IgG и QUANTA Flash DGP IgG.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное смешивание реагентов перед первым использованием может привести

к ошибочным результатам.

4.

Технические

характеристики

данного

анализа

не

были

установлены

для

матриц,

отличных от сыворотки.

Ожидаемые результаты

Пороговое

значение

анализа

была

определена

путем

тестирования

392

клинически

охарактеризованных образцов: 37 образцов пациентов с целиакией (не находящихся на

безглютеновой диете) и 355 образцов контрольной группы без целиакии. Эти образцы были

использованы

для

корректировки

предельной

концентрации

до

20

ХЕ,

при

этом

чувствительность и специфичность на данном обучающем наборе были оптимизированы до

значений 73,0 % и 99,4 %, соответственно.

Сравнение метода с устройством-образцом

Образцы

для

анализа

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных исследований (пациенты с целиакией, без целиакии и с герпетиформным

дерматитом), которые были в пределах диапазона для проведения лабораторного анализа.

Эти

образцы

были

проанализированы

с

помощью

анализа

QUANTA

Flash

DGP

IgA

и

эталонного твердофазного ИФА.

Сравнение метода

(N= 96)

DGP IgA ELISA

Процентное

совпадение

(95% достоверность)

Положительных

Отрицательных

Всего

QUANTA Flash

®

DGP IgA CIA

Положительных

59

3*

62

Совпадение положит.

результатов = 90,8%

(81,0-96,5%)

Отрицательных

6**

28

34

Совпадение

отрицательных

результатов = 90,3%

(74,2-98,0%)

Всего

65

31

96

Общее совпадение =

90,6%

(82,9-95,6%)

* У двух из этих пациентов целиакия подозревается, но не диагностирована; у третьего

диагностирован ГД.

** У двух пациентов установлен ГД. У трех из этих пациентов установлена целиакия, в том числе у

двух без клинических проявлений, а у третьего – с повреждениями типа Марш III, обнаруженными

при помощи биопсии. У последнего из пациентов – язвенный колит.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 232 здоровых доноров

крови, 54 образцов целиакии из библиотеки сывороток INOVA, 103 пациентов контрольной

группы с заболеваниями, отличными от целиакии и 21 образца пациентов с ГД. В отдельном

внешнем

исследовании

участвовали

93

образца

целиакии,

151

практически

здоровый

участник и 98 больных пациентов контрольной группы. Все образцы были проанализированы

с помощью набора QUANTA Flash DGP IgA. Результаты были проанализированы для расчета

специфичности в отношении целиакии (n=147) и ГД (n=21) в отдельности с использованием

одной контрольной популяции (n=584).

Клиническая

чувствительность

и

специфичность

анализа

QUANTA

Flash

DGP

IgA

в

отношении целиакии:

N=731

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

Целиа

кия

Нет

целиаки

и

Всего

QUANTA Flash

®

DGP IgA

Положит

ельных

105

2*

107

Чувствительность = 71,4%

(63,4-78,6%)

Отрицате

льных

42**

582

624

Чувствительность = 99,7 %

(98,8–100 %)

Всего

147

584

731

*Оба образца были получены от практически здоровых доноров, у одного из них были

положительные результаты на антитела IgG к DGP и IgA к h-tTG.

**Из 21 пациента, для которых были получены данные твердофазного ИФА, 18 показали

отрицательные результаты в ИФА DGP IgA. Из 21 пациента без данных твердофазного

иммуноферментного анализа у 6 пациентов наблюдали повреждения типа Марш III, у 4 –

Марш II, и у 11 не было результатов биопсии.

Клиническая

чувствительность

и

специфичность

анализа

QUANTA

Flash

DGP

IgA

в

отношении ГД:

N=605

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

Герпетифо

рмный

дерматит

Нет

герпетиформно

го дерматита

Всего

QUANTA Flash

®

DGP IgA

Положительных

13

2*

15

Чувствительность =

61,9%

(38,4-81,9%)

Отрицательных

8**

582

590

Чувствительность =

99,7 %

(98,8–100 %)

Всего

21

584

605

*Оба образца были получены от практически здоровых доноров, у одного из них были

положительные результаты на антитела IgG к DGP и IgA к h-tTG.

**Шесть образцов были также отрицательными в ИФА DGP IgA.

Распределение

в

контрольной

популяции

больных

пациентов,

использованной

в

валидационном исследовании:

Группа пациентов

N

Отрицательн

ых

Положительн

ых

Процент

положительн

ых

Аутоиммунное заболевание

печени

5

5

0

0%

Вирусный гепатит

47

47

0

0%

Воспалительное заболевание

кишечника (хроническое

заболевание +язвенный колит)

17

17

0

0%

Инфекция H. pylori

17

17

0

0%

Пищевая аллергия

9

9

0

0%

Системное ревматическое

заболевание

12

12

0

0%

Аутоиммунное заболевание

щитовидной железы

22

22

0

0%

Пациенты с желудочно-кишечными

симптомами

11

11

0

0%

Сахарный диабет 1 типа

14

14

0

0%

Ревматоидный артрит

37

37

0

0%

Другая инфекционная болезнь

(ВИЧ, сифилис)

10

10

0

0%

Всего

201

201

0

0%

Из

731

пациентов

и

участников

контрольной

группы,

образцы

сыворотки

которых

были

использованы в валидационном исследовании, информация о возрасте была известна для

653. В пределах данной подгруппы было 370 женщин, 226 мужчин, и не было информации о

поле 57 пациентов. В таблице ниже представлено распределение по возрасту и диагноз этих

пациентов.

Группа

пациентов

Возраст

(лет)

N

Отрицательных

Положительных

Процент

положительных

Целиакия

<2

4

2

2

50,0 %

(нет

безглютеновой

диеты)

2 - 11

44

16

28

63,6 %

12 - 21

15

6

9

60,0 %

>21

58

12

46

79,3 %

Контрольные

больные

пациенты

<2

2

2

0

0,0 %

2 - 11

7

7

0

0,0 %

12 - 21

9

9

0

0,0 %

>21

132

132

0

0,0 %

Практически

<2

46

45

1

2,2 %

здоровые

2 - 11

57

57

0

0,0 %

участники

исследования

12 - 21

89

88

1

1,1 %

>21

190

190

0

0,0 %

Всего

653

566

87

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость анализа QUANTA Flash DGP IgA была оценена в исследовании 7 образцов,

содержащих антитела к DGP класса IgA в разных концентрациях, проведенном в соответствии

с

руководством

EP5-A2

Института

клинических

и

лабораторных

стандартов.

Результаты

исследования представлены ниже:

В одном

анализе

Между

анализами

В разные дни

Всего

Образе

ц

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

1

84

105,6

5,4

5,1%

0,0

0,0%

6,8

6,4%

8,6

8,2%

2

80

35,1

2,1

5,9%

0,0

0,0%

3,8

10,7%

4,3

12,2%

3

84

15,4

0,9

5,8%

0,0

0,0%

1,0

6,2%

1,3

8,5%

4

80

32,4

1,0

3,1%

0,3

0,8%

2,2

6,8%

2,4

7,5%

5

84

128,8

5,9

4,6%

4,1

3,2%

8,6

6,7%

11,2

8,7%

6

84

10,5

0,4

4,0%

0,2

1,9%

0,6

5,8%

0,8

7,3%

7

76

1930,8

94,9

4,9%

63,8

3,3%

149,7

7,8%

188,4

9,8%

Пределы обнаружения; линейные и аналитические диапазоны измерения

Нижний предел обнаружения для данного анализа, согласно руководству EP17-A Института

клинических

и

лабораторных

стандартов

(CLSI

)

составляет

примерно

821

ОСЕ,

что

эквивалентно

1,2

ХЕ,

что

значительно

ниже

нижнего

порога

диапазона

аналитического

измерения. Верхний предел обнаружения составляет около 723 000 ОСЕ, что на 21 % выше

порога диапазона аналитического измерения. Весь диапазон измерения составляет от 5,2 ХЕ

до

2367,3

ХЕ

и

является

линейным.

Исследование

линейности

проводили

согласно

руководству

EP6-A

CLSI

с

использованием

пяти

образцов

сыворотки

с

различными

концентрациями

антител

к

DGP

класса

IgA.

Каждый

из

пяти

образцов

независимо

продемонстрировал

линейность

при

разбавлении.

Результаты

регрессионного

анализа

объединенных данных представлены ниже:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Наклон прямой

(95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения

с осью ординат (95 %

доверительный

интервал)

Все

образцы

от 5,2 до 2596,8

1,05 (от 1,03 до

1,07)

6,19 (от -8,49 до 20,86)

0,99

Реагенты QUANTA Flash DGP lgG,

кат. № 701170, 701173

Для использования в диагностических целях в условиях In Vitro. Сложность

иммунохемилюминесцентного анализа: средняя

701173, 701170

REF

Rx Only

Назначение

QUANTA

Flash

DPG

IgG

-

это

хемилюминесцентный

иммунологический

анализ

(ХИА)

для

полуколичественного определения в человеческой сыворотке антител класса иммуноглобулин G к антителам

дезамидированным пептидам глиадина (ДПГ). Присутствие антител класса иммуноглобулин G к антителам

ДПГ,

в

сочетании

с

клиническими

данными

и

другими

лабораторными

испытаниями,

может

помочь

диагностировать

глютеновую

болезнь

у

пациентов

с

достаточным

и

недостаточным

уровнем

иммуноглобулина А, а также герпетиформный дерматит.

Краткая информация и пояснения по анализу

Глютеновая

болезнь

(ГБ)

это

глютензависимая

энтеропатия,

характеризующаяся

воспалением

и

характерным

гистологическим

сплющиванием

слизистой

оболочки

кишки,

что

приводит

к

синдрому

мальабсорбции.

Хотя

точная

этиология

болезни

остается

неизвестной,

очевидно,

что

глиадин,

спирторастворимая фракция пшеничной клейковины, является токсичным веществом.

1,2

Первоначально, для диагностирования ГБ и сопутствующих ей нарушениях применяли проведение серии

многократных

желудочно-кишечных

биопсий.

В

последнее

время,

Европейским

обществом

детской

гастроэнтерологии и питания (ESPGAN)

3

, а также несколькими другими опубликованными исследованиями

4-6

рекомендовано

использовать

такие

серологические

маркеры,

как

антитела

глиадина,

антитела

ДПГ

и

эндомизиальные

антитела

(ЭМА),

для

сокращения

количества

желудочно-кишечных

биопсий,

которые

необходимы для постановки диагноза.

В последней работе было обнаружено, что антитела от пациентов с ГБ связывают очень ограниченное число

специфических

эпитопов

на

молекуле

селективно

дезамидированного

глиадина.

7-9

Считается,

что

к

дезамидированию приводит брюшнополостной фермент, тканевая трансглутаминаза.

10

Основываясь на

вышеназванных наблюдениях, были разработаны тесты с использованием определенных дезамидированных

пептидов глиадина. Они обеспечивают более высокую диагностическую точность по ГБ, чем стандартные

анти-глиадиновые анализы.

5,11-14

Поскольку значительная часть пациентов с глютеновой болезнью испытывает недостаток иммуноглобулина

А, стратегия чувствительного скрининга по выявлению людей с ГБ среди групп риска включает в себя

тестирование на антитела класса иммуноглобулин G и иммуноглобулин А к дезамидированным пептидам

глиадина.

12

Нескольких

исследований

показали

высокую

клиническую

применимость

данной

стратегии

тестирования.

15,11-14

Герпетиформный дерматит (ГД) – это хроническое заболевание кожи с образованием волдырей. Большая

часть

пациентов

с

ГД

чувствительна

к

глютену

и

страдает

атрофией

тощекишечных

ворсинок,

что

идентичному тому, что характерно для ГБ, тогда как состояние пораженных участков кожи и кишечника можно

улучшить за счет строгой безглютеновой диеты.

16,17

В одном из исследований было обнаружено, что

антитела

к

антителам

ДПГ

чаще

встречаются

у

пациентов

с

ГД,

чем

антитела

к

антителу

тканевой

трансглутаминазы.

18

QUANTA Flash Flash DPG IgG – это тест повышенной эффективности для выявления антител класса

иммуноглобулин G к селективно дезамидированному, синтетическому пептиду, полученному из глиадина

пшеничного

протеина,

который

как

таковой

позволяет

обнаружить

ГБ

даже

при

сопутствующей

недостаточности иммуноглобулина А.

Принципы проведения анализа

Синтетический дезамидированный пептид глиадина нанесен на парамагнитные гранулы, которые хранятся в

картридже с реагентами в условиях, обеспечивающих сохранение реактивного состояния антигена. При

первом использовании картриджа для анализа, переверните весь картридж несколько раз, чтобы тщательно

перемешать реагенты. Затем картридж с реагентами загружают в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента разводят в приборе в соотношении 1:17 путем использования системного

раствора

System

Rinse,

добавленного

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества

разведенной сыворотки пациента, гранул ДПГ и аналитического буфера объединяют вместе во второй

кювете и перемешивают. Данную кювету выдерживают в термостате при 37°C. Затем гранулы намагничивают

и несколько раз промывают. Далее в кювету добавляют антитело, конъюгированное с изолюминолом, и

выдерживают ее в термостате при 37°C. Гранулы повторно намагничивают и неоднократно промывают.

Конъюгат изолюминола дает люминесцентную реакцию при добавлении в кювету реагентов Trigger. Световое

излучение, создаваемое в результате данной реакции, измеряется оптической системой ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH

в

относительных

световых

единицах

(ОСЕ).

ОСЕ

пропорциональны

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, который в свою очередь пропорционален количеству антител к антителам ДПГ,

связанных с ДПГ на гранулах.

В тесте QUANTA Flash DPG IgG используется заранее установленная для определенной партии Мастер-

кривая,

которая

загружается в

прибор по штрих-коду

картридж

с

реагентами.

Исходя

из результатов,

полученных с помощью двух калибраторов, создается привязанная к прибору Рабочая кривая, которая

используется

программным

обеспечением

для

подсчета

хемилюминесцентных

единиц

(ХЕ)

на

основе

значения ОСЕ, полученного для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash DPG IgG содержит следующие реагенты для выполнения 50

определений (701173)/100 определений (701170):

a.

Покрытые ДПГ парамагнитные гранулы в буфере, содержащие протеиновые стабилизаторы и

консервант.

b.

Аналитический буфер – розовый краситель, содержащий ТРИС-буферизированный

физраствор, полисорбат 20, протеиновые стабилизаторы и консерванты.

c.

Tracer IgG – меченные изолюминолом, помещенные в буфер антитела к иммуноглобулину G

человека, содержащие протеиновые стабилизаторы и консервант.

Предупреждения

1.

В

качестве

консерванта

используется

азид

натрия,

который

представляет

собой

отравляющее

вещество и может быть токсичен при его проглатывании или впитывании через кожу или глаза. Азид

натрия может вступать в реакцию с санитарно-техническим оборудованием, выполненным из свинца

или меди, образуя при этом взрывоопасные азиды металлов. При использовании для утилизации

реагентов промойте раковины большим количеством воды, чтобы не допустить скопление азидов.

2.

При работе с полученными реагентами используйте соответствующие средства индивидуальной

защиты.

3.

Пролитые реагенты необходимо немедленно убрать. При утилизации отходов соблюдайте все

федеральные, государственные и местные нормативные документы по охране окружающей среды.

Меры предосторожности

1.

Данное изделие предназначено для использования в диагностических целях в условиях In Vitro.

2.

Настоящий тест предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

3.

После вскрытия, данный картридж с реагентами необходимо хранить в карусели для реагентов

прибора. Следует следить за тем, чтобы не допустить проливания реагентов при первом размещении

картриджа с реагентами в приборе.

4.

Химическое

загрязнение

реагентов

может

возникнуть

в

результате

ненадлежащей

очистки

или

промывки прибора. Остатки от обычных лабораторных химических веществ, таких как формалин,

раствор

гипохлорита

натрия,

этанол

или

очищающее

средство,

могут

привести

к

созданию

нежелательного

воздействия

при

анализе.

Обязательно

соблюдайте

рекомендованный

порядок

очистки прибора, который описан в руководстве по эксплуатации ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Условия хранения

1.

Храните невскрытые картриджи с реагентами при 2-8°C. Не замораживайте их. Реагенты стабильны

до срока своей годности при условии хранения и обращения с ними в соответствии с указаниями.

2.

Вскрытые

картриджи

с

реагентами

следует

хранить

в

приборе.

Программное

обеспечение

контролирует

срок

хранения

размещенного

в

приборе

(используемого),

а

также

срок

годности

(сохранности) картриджа с реагентами по его партии. Система не допустит использование картриджа

с истекшим сроком годности.

Отбор, подготовка и работа с пробами

Данную

процедуру

необходимо

проводить

с

сывороточной

пробой.

Нельзя

использовать

загрязненные

микроорганизмами, подвергнутые термообработке пробы или образцы, содержащие видимые частицы. Не

следует

применять

сильно

гемолизированную

или

иктерическую

сыворотку.

После

отбора

сыворотку

необходимо

выделить

из

сгустка

крови.

В

Документе

H18-A4

Института

клинических

и

лабораторных

стандартов рекомендуется использовать следующие условия хранения образцов:

1.

Храните образцы при комнатной температуре в течение не более 8 часов.

2.

Если анализ на завершен в течение 8 часов, охладите и храните образец при 2-8°C.

3.

В случае не завершения анализа в течение 48 часов, либо в случае необходимости транспортировки

образца, заморозьте его при температуре не менее -20°C. После размораживания проб и до

проведения теста их необходимо хорошо перемешать.

Процедура

Материалы, входящие в комплект поставки

1

Картридж с реагентами для QUANTA Flash DPG IgG

Дополнительные материалы, которые необходимы, но не входят в

комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH с работающим компьютером

Системный раствор System Rinse для ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Реагенты Trigger для ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибраторы теста QUANTA Flash DGP IgG (Каталожный номер: 701171)

Контроли для QUANTA Flash DPG IgG (Каталожный номер: 701172)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по использованию хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH и программного обеспечения см. в руководстве по эксплуатации, которое входит в комплект

поставки системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Для получения дополнительной информации, в том

числе по поиску и устранению неисправностей, просим обращаться в техническую службу компании

Inova Diagnostics, Inc. по адресу или номеру телефона, указанному в конце данной Инструкции-

вкладыш.

2.

Для

опорожнения

контейнера

с

твердыми

отходами,

откройте

выдвижную

секцию

для

отходов.

Извлеките контейнер с твердыми отходами и утилизируйте надлежащим образом использованные

кюветы. Замените контейнер с твердыми отходами, закройте выдвижную секцию для отходов и

нажмите Yes (Да) в окне Empty Waste Drawer (Очистить выдвижную секцию для отходов).

3.

Для замены реагентов Trigger, нажмите кнопку Bulks Inventory F9 (Учет основных материалов F9) (в

правом верхнем углу).

a.

В экране Inventory – Bulks (Учет – Основные материалы), нажмите кнопку Triggers слева.

Всплывет новое окно под названием Add Triggers – Remove old bottles (Добавить реагенты

Triggers – Удалить использованные флаконы).

b.

Откройте и извлеките выдвижную секцию для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Удалите все кюветы в выдвижную секцию для сухих отходов. Выберите Yes в окне Empty Waste

Drawer. Извлеките из держателей флаконы с реактивами Trigger и нажмите кнопку Next (Далее).

Снимите крышки с пробирок со старыми реактивами и замените их на новые реактивы Trigger.

Обязательно сделайте это поочередно, соблюдая цветовую маркировку крышек (белый цвет к

белому, а красный к красному).

c.

Следуйте указаниям в появившемся окне Add Triggers – Add Trigger2 bottle (Добавить реагенты

Triggers – Добавить флакон с реагентом Trigger 2). После принятия штрих-кода поместите реагент

Trigger 2 в держатель с белой цветовой маркировкой. Выберите Next.

d.

Следуйте указаниям в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle (Добавить реагенты Triggers –

Добавить флакон с реагентом Trigger 1). После принятия штрих-кода поместите реагент Trigger 1 в

держатель с красной цветовой маркировкой. Выберите Finish (Завершить). Замените и закройте

выдвижную секцию для отходов.

4.

Для замены контейнера с системным раствором System Rinse, нажмите кнопку Bulks Inventory F9

правом верхнем углу). В экране Inventory – Bulks, нажмите кнопку Sys. Rinse (Системный раствор

Sys. Rinse). В появившемся окне Add System Rinse – Remove bottles (Добавить System Rinse –

Удалить флаконы) выберите Next. Следуйте указаниям в появившемся окне Add System Rinse – Add

bottle (Добавить System Rinse – Добавить флакон). После принятия штрих-кода, при необходимости,

выберите Finish.

5.

Для опорожнения контейнера с жидкими отходами, нажмите в экране Inventory – Bulks кнопку Fluid

Waste (Жидкие отходы). Удалите и утилизируйте жидкие отходы. Выберите Next. После замены

пустой флаконы выберите Finish.

Методика работы

Подготовка картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа с реагентами необходимо выполнить следующие действия, чтобы

обеспечить точную установку картриджа в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Примечание: Не используйте

картридж с реагентами при наличии любых видимых признаков его повреждения.

Картридж с реагентами для QUANTA Flash DPG IgG: Во время перевозки и хранения происходит оседание

микрочастиц, что требует выполнение смешения для их ресуспендирования.

1.

При первом использовании картриджа, аккуратно переверните

картридж 30 раз, избегая образования пены. Убедитесь в полном

ресуспендировании микрочастиц. Если они ресуспендировались

не полностью, продолжайте переворачивать картридж до полного

ресуспендирования

микрочастиц.

Если

ресуспендирования

микрочастиц не происходит, НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ КАРТРИДЖ.

2.

После ресуспендирования микрочастиц поместите картридж

с реагентами на твердую поверхность, чтобы удалить отрывной

язычок красного цвета. Удерживая картридж с реагентами на

месте одной рукой, другой прочно захватите красный отрывной

язычок с задней стороны картриджа с реагентами и полностью

вытяните его.

3.

Одновременно

с

нажатием

двух

выступов

по

сторонам

пробивной крышки (деталь серого цвета), надавите на верхнюю

часть картриджа с реагентами до щелчка, указывающего на его

нахождение в положении фиксации. При этом, выступы больше не

видны. НЕ ПЕРЕВОРАЧИВАЙТЕ ВСТРЫТЫЙ КАРТРИДЖ.

4. Аккуратно поместите картридж с реагентами в любой открытый паз в карусели для реагентов прибора

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Калибровка для целей анализа

1.

Каждый новый лот картриджа с реагентами необходимо откалибровать перед ее первым

использованием. Программное обеспечение разрешит использовать новый лот только после ее

калибровки.

2.

Подробные указания о порядке калибровки картриджа с реагентами см. в разделе под названием

«Калибраторы 701171 для QUANTA Flash

®

DPG IgG» настоящей Инструкции-вкладыша.

3.

После проверки и подтверждения калибровки, лот картриджа с реагентами, который был подвергнут

калибровке, готов к использованию.

Программирование и использование образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist (Рабочий список) в верхней части экрана и выберите внизу вкладку Racks

(Штативы).

2.

Выберите штатив для образцов, который будет использоваться, путем выделения штатива на экране

или сканирования его штрих-кода с помощью портативного сканера штрих-кодов. Сканируйте или

введите с клавиатуры название образца, выберите тип образца, тип контейнера (пробирка/чашка),

также выберите DGP IgG на аналитической панели. Повторите данные действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные положения в штативе для образцов, который затем загрузите в

карусель для образцов прибора.

4.

Если все требуемые образцы находятся в приборе, доступной станет зеленая иконка Start F4 (Начать

F4) вверху экрана. Чтобы запустить рабочий цикл, нажмите иконку Start F4.

Контроль качества

Контроли для QUANTA Flash DPG IgG (продаются отдельно – артикул 701172 компании Inova) содержат как

положительные, так и отрицательные контроли на иммуноглобулин G к ДПГ. Для получения подробных

инструкций о том, как ввести в программное обеспечение всю необходимую информацию по каждому

контролю, а также о порядке использования контролей см. раздел под названием «Контроли 701172 для

QUANTA Flash

®

DPG IgG» Инструкции-вкладыша. Контроли рекомендуется применять один раз в день

использования

теста;

однако,

при

этом

пользователи

также

должны

учитывать

национальные/местные

нормативные требования.

Подсчет результатов

Для каждой новой партии QUANTA Flash DPG IgG компания Inova создает шеститочечную мастер-кривую.

Параметры кривой закодированы в штрих-коде каждого картриджа с реагентами. Во время калибровки, для

преобразования значения ОСЕ в ХЕ, используется привязанная к прибору рабочая кривая. Реактивность

антител класса иммуноглобулин G к ДПГ может быть классифицирована в соответствии с таблицей ниже.

Реактивность

ХЕ

Отрицательная

<20

Слабо-положительная

20-30

Положительная

>30

Реактивность в

ХЕ напрямую связана с

титром антитела в образце пациента. Увеличение и

уменьшение

концентрации антител у пациента будет отражаться в виде соответствующего повышения или снижения в

ХЕ,

которое

пропорционально

объему

антитела.

Аналитический диапазон измерения (АДИ) теста (определяемый по самой низшей и самой высокой точкам

мастер-кривой) составляет 2,8 – 1 936,7 ХЕ, что соответствует линейному диапазону теста. Если результат

пациента составляет менее 2,8 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст его в виде «<2,8 ХЕ».

Поскольку данное значение меньше 20

ХЕ, оно считается отрицательным результатом. Если результат

пациента превышает 1 936,7 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст его в виде «>1 936,7 ХЕ». Это

считается

положительным

результатом.

Программное

обеспечение

имеет

опцию

автоматического

повторного запуска. При выборе данной опции, прибор автоматически повторно проанализирует любой

образец с

результатом >1 936,7 ХЕ после дополнительного 10-кратного разведения, тем самым поместив

измеренное

значение

в

пределы

АДИ.

Окончательный

результат

будет

рассчитан

программным

обеспечением с

учетом дополнительного коэффициента разведения. Поскольку максимальное значение,

которое

можно

измерить,

составляет

1

936,7

ХЕ,

самое

высокое

значение,

которое

может

быть

зарегистрировано, составляет 19,367 ХЕ.

Интерпретация результатов

Каждой лаборатории рекомендуется проверять заявленный производителем эталонный диапазон, так как он

может установить собственный нормальный диапазон на основе своих средств контроля и популяции

пациентов в соответствии со своими собственными установленными процедурами.

Предполагается,

что

результаты,

сообщаемые

лабораторией,

должны

включать

следующее:

«Нижеприведенные результаты были получены с помощью иммунохемилюминесцентного анализа QUANTA

Flash

DPG

IgG

от

компании

Inova.

Значения,

полученные

с

помощью

методов

анализа

различных

производителей, нельзя при использовании считать взаимозаменяемыми».

Процедурные ограничения

1.

Не все пациенты с ГБ или ГД имеют положительную реакцию на антитела класса иммуноглобулин G к

ДПГ.

2.

Результаты данного анализа следует использовать в сочетании с клиническими данными и другими

серологическими тестами.

3.

Если реагенты не перемещать надлежащим образом перед их первым использованием, это может

привести к получению ошибочных результатов.

4.

Рабочие характеристики данного теста определены только для сыворотки, но не других матричных

растворов.

Ожидаемые показатели

Предполагается,

что

в

нормальной

популяции

будет

получен

«отрицательный»

результат.

Распространенность

ГБ

в

контрольной

группе,

не

подверженной

риску,

близка

к

1%

19

,

поэтому

при

тестировании здоровых пациентов можно ожидать получение случайных положительных результатов. После

тестирования образцов сыворотки 232 практически здоровых людей с помощью ХИА QUANTA Flash DPG IgG

в

компании

Inova

Diagnostics,

были

обнаружены

четыре

положительных

и

один

слабо-положительный

результат.

Сравнение методов с использованием устройства-образца

Образцы

для

проведения

анализа

путем

сопоставления

методов

включали

в

себя

образцы

из

клинических валидационных исследований (пациентов с ГБ, без ГБ и с ГД), которые находились в

пределах диапазона аналитических измерений анализа. Эти образцы были протестированы с помощью

как QUANTA Flash DPG IgG, так и утвержденного твердофазного ИФА.

Сравнение методов

(кол-во = 241 чел.)

Твердофазный ИФА на IgG к ДПГ

Согласованность в процентах

(95%

доверительный уровень)

Положительно

Отрицательно

Всего

ХИА

QUANTA

Flash DPG IgG

Положительно

78

26*

104

Положительная согласованность = 95,1%

(88,0-98,7%)

Отрицательно

4**

133

137

Отрицательная согласованность = 83,6%

(77,0-89,0%)

Всего

82

159

241

Общая согласованность = 87,6% (82,7-

91,4%)

*

Тринадцать образцов от пациентов с ГБ; три пациента – на безглютеновой диете. Один образец от пациента с

подозрением на ГБ, с положительной реакцией на иммуноглобулин А к антителам ДПГ. В двух образцах присутствует

хеликобактерный гастрит, еще два содержат вирусный гепатит, а в одном - ревматоидный артрит. Один пациент, с низким

содержанием форменных элементов крови, имеет положительную реакцию на иммуноглобулин G к антителу тканевой

трансглутаминазы человека. Оставшиеся 6 образцов взяты у практически здоровых людей; у одного из них, в момент

отбора

образца,

присутствовали

желудочно-кишечные

симптомы;

двое

имели

положительную

реакцию

на

иммуноглобулин G к антителу тканевой трансглутаминазы человека.

**Три образца взяты у пациентов с ГБ, а еще один – у пациента с ГД.

Клиническая чувствительность и специфичность

В

клиническом

валидационном

исследовании

было

использовано

62

образца

с

ГБ

из

библиотеки

сывороточных

проб

компании

Inova

том

числе,

7

образцов,

взятых

у

пациентов

с

изолированной

недостаточностью иммуноглобулина А), 87 контрольных проб у пациентов, не страдающих глютеновой

болезнью, и 23 образца у пациентов с ГД. В отдельное независимое исследование было включено 102

образца с ГБ (в том числе 9 - с избирательным дефицитом иммуноглобулина А), 151 образец, взятый у лиц с

клиническими

симптомами

ГБ,

обратившихся

за

медицинской

помощью,

однако,

после

физического

обследования

и

диагностических

тестов,

данная

болезнь

была

исключена,

и

98

проб

для

контроля

заболевания. Все образцы протестировали с использованием QUANTA Flash DPG IgG. Результаты по

отдельности проанализировали для количественного определения чувствительности и специфичности по ГБ

(кол-во = 148 чел.), ГБ с селективным дефицитом иммуноглобулини А (кол-во = 16 чел.) и ГД (кол-во = 23

чел.).

Клиническая чувствительность и специфичность теста QUANTA Flash DPG IgG по ГБ:

Кол-во = 484 чел.

Диагноз

Анализ

(95% доверительный уровень)

ГБ

Не ГБ

Всего

QUANTA Flash

DPG IgG

Положительно

132

9*

141

Чувствительность = 89,2% (83,0-93,7%)

Отрицательно

16**

327

343

Специфичность = 97,3% (95,0-98,8%)

Всего

148

336

484

* У двух

пациентов - хеликобактерный гастрит, еще двое страдают вирусным гепатитом, у одного - ревматоидный

артрит. Остальные образцы взяты у практически здоровых людей; из которых у двоих положительная реакция на ИФА

на иммуноглобулин G к ДПГ.

**Из 13 пациентов с данными, полученными с помощью твердофазного ИФА, у 10 чел. зафиксирована отрицательная реакция

на ИФА на иммуноглобулин G к ДПГ.

Клиническая чувствительность и специфичность анализа/теста QUANTA Flash DPG IgG по недостаточности

иммуноглобулин А при ГБ:

Кол-во = 352 чел.

Диагноз

Анализ

(95% доверительный уровень)

ГБ (при недостаточности

иммуноглобулина А)

Не ГБ

Всего

QUANTA Flash

DPG IgG

Положительно

9

9

18

Чувствительность = 56,3% (29,9-80,2%)

Отрицательно

7

327

334

Специфичность = 97,3% (95,0-98,8%)

Всего

16

336

352

Клиническая чувствительность и специфичность теста QUANTA Flash DPG IgG при ГД:

Кол-во = 359 чел.

Диагноз

Анализ

(95% доверительный уровень)

ГД

Не ГД

Всего

QUANTA Flash

DPG IgG

Положительно

16

9*

25

Чувствительность = 69,6% (47,1-86,8%)

Отрицательно

7**

327

334

Специфичность = 97,3% (95,0-98,8%)

Всего

23

336

359

*

В

двух

образцах

присутствует

хеликобактерный

гастрит,

еще

два

содержат

вирусный

гепатит,

и

в

одном

-

ревматоидный артрит. Остальные образцы взяты у практически здоровых людей; из которых у двоих положительная

реакция на ИФА на иммуноглобулин G к ДПГ.

**У пяти образцов также зафиксирована отрицательная реакция на ИФА на иммуноглобулин G к ДПГ.

Распределение

популяции

в

целях

контроля

заболеваний,

привлеченной

к

участию

в

валидационном

исследовании:

Группа пациентов

Кол-во

Отрицательно Положительно

Процент пациентов с

положительной реакцией

Автоиммунная болезнь печени

5

5

0

0%

Вирусный гепатит

31

29

2

6%

Воспалительное заболевание

кишечника (хроническое +язвенный

колит)

17

17

0

0%

Хеликобактерная инфекция

17

15

2

12%

Пищевая аллергия

9

9

0

0%

Системный ревматизм

12

12

0

0%

Автоиммунное заболевание

щитовидной железы

22

22

0

0%

Пациенты с желудочно-кишечными

симптомами

11

11

0

0%

Сахарный диабет 1 типа

14

14

0

0%

Ревматоидный артрит

37

36

1

3%

Другие инфекционные заболевания

(ВИЧ, сифилис)

10

10

0

0%

Всего

185

180

5

3%

Краткая информация о показателях клинической чувствительности и специфичности по ГБ с разбивкой по

возрастным группам:

Возрастная группа

Иммуноглобулин G к ДПГ

Чувствительность, %

Специфичность, %

1 месяц – 2 года

66,7

94,6

2 года – 12 лет

95,6

96,1

12-21 год

75,0

100,0

>21 года

89,4

97,8

< 21 года (всего)

88,9

96,4

Всего

89,2

97,3

Точность и воспроизводимость

Оценка точности теста QUANTA Flash DPG IgG была осуществлена на 8 образцах, содержащих различные

концентрации антител класса иммуноглобулин G к ДПГ, в соответствии с документом EP5-A2 Института

клинических и лабораторных стандартов; обобщенные данные оценки приведены ниже:

Внутри серии

Между сериями

Между днями

Итого

Образец

Число

репликатов

Среднее

(ХЕ)

СО

(ХЕ)

Коэффици

ент

вариации

(%)

СО

(ХЕ)

Коэффици

ент

вариации

(%)

СО

(ХЕ)

Коэффици

ент

вариации

(%)

СО

(ХЕ)

Коэффиц

иент

вариации

(%)

1

80

5,8

0,2

3,1%

0,1

2,5%

0,1

2,0%

0,3

4,5%

2

80

16,8

0,5

3,0%

0,1

0,5%

0,2

1,5%

0,6

3,3%

3

80

20,7

0,5

2,5%

0,3

1,3%

0,5

2.2%

0,7

3,6%

4

80

24,6

0,5

1,9%

0,5

1,8%

0,4

1.5%

0,7

3,0%

5

80

85,1

1,9

2,2%

0,8

0,9%

2,5

2.9%

3,2

3,8%

6

80

411,6

7,7

1,9%

6,8

1,6%

9,4

2.3%

13,9

3,4%

7

80

791,0

24,3

3,1%

16,2

2,0%

5,9

0,7%

29,8

3,8%

8

80

1 781,4

52,1

2,9%

27,9

1,6%

48,3

2,7%

76,3

4,3%

Кроме того, в целях оценки воспроизводимости были проведены исследования точности на трех разных

экспериментальных

площадках

(компания

Inova

Diagnostics,

Inc.

и

две

независимые

испытательные

площадки). В качестве переменных на площадке Inova были использованы две партии реагентов, две партии

калибраторов и два оператора. Общую определили на основе точности внутри серии, между сериями, между

партиями, между партиями калибраторов, между операторами и между площадками:

Внутри серии

Между

сериями

Между

партиями

реагентов

Между

партиями

калибраторо

в

Между

операторами

Между

площадками

Итого

Образец

Среднее

значени

е

(ХЕ)

Число

репликатов

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэф

фици

ент

вариа

ции

(%)

СО

(ХЕ)

Коэфф

ициент

вариац

ии

(%)

Образец №1

13,4

80

0,3

2,6

0,8

5,9

0,5

4,0

1,0

7,5

0,5

3,6

1,0

8,1

1,8

13,5

Образец №2

21,0

80

0,5

2,3

1,2

5,5

0,7

3,5

1,5

7,3

0,8

4,0

1,5

7,6

2,7

12,9

Образец №3

118,9

80

2,8

2,4

5,9

4,9

2,8

2,3

2,8

2,3

4,7

4,0

9,4

8,1

13,0

10,9

Аналитический диапазон измерений

Нижний

предел

обнаружения

данного

теста,

согласно

документу

EP17-A

Института

клинических

и

лабораторных стандартов, составляет 469,2 ОСЕ, что меньше диапазона аналитических измерений (2,8 ХЕ).

АДИ в пределах 2,8 – 1 936,7 ХЕ является линейным. Исследование линейности провели в соответствии с

документом EP6-A Института клинических и лабораторных стандартов с использованием шести образцов

сыворотки с различными концентрациями иммуноглобулина G к ДПГ. Линейность разведения всех шести

образцов была продемонстрирована по отдельности; при этом, согласно сводным данным были получены

следующие результаты по линейной регрессии:

Образец

Диапазон

тестирования (ХЕ)

Угловой

коэффициент (при

95% ДИ)

Коэффициент сдвига по

оси Y

(при 95% ДИ)

Все образцы

1,9 – 2 565,4

1,03 (1,02 – 1,04)

4,78 (-4,99 – 14,54)

1,00

В анализе иммуноглобулин G к ДПГ положительные пробы с результатами, превышающими

аналитический диапазон измерений, не показывают хук-эффекта вплоть до 4 323,7 ХЕ.

Помехи, перекрестная реактивность

Каких-либо помех для гемоглобина до 200 мг/дл, триглицеридов до 1000 мг/дл, холестерина

до 224,3 мг/дл, билирубина до 10 мг/дл и RF-зависимого иммуноглобулина M до 500 МЕ/мл

обнаружено не было.

Для

оценки

перекрестной

реактивности

у

пациентов

с

различными

аутоиммунными

и

инфекционными заболеваниями взяли сто восемьдесят пять образцов. Две пробы из 31

образца с вирусным гепатитом, две из 17 образцов с хеликобактерной инфекцией и одна из

37 образцов с ревматоидным артритом имели положительную реакцию в рамках ХИА на

иммуноглобулин G к ДПГ. Всего, пять из 185 образцов (3%) были положительными, что

указывает на отсутствие перекрестной реактивности.

Реагенты QUANTA Flash dsDNA,

кат. № 701175, 701178

Для использования в диагностических целях в условиях In Vitro. Сложность

иммунохемилюминесцентного анализа: средняя

REF

701178, 701175

Rx Only

Назначение

QUANTA

Flash

dsDNA

это

хемилюминесцентный

иммунологический

анализ

для

количественного

определения

антител

класса

иммуноглобулин

G

против

двухцепочечной

двухспиральной дезоксирибонуклеиновой кислоты (дцДНК) в сыворотке человека. Присутствие

антител

против

дцДНК,

в

сочетании

с

клиническими

данными

и

другими

лабораторными

испытаниями, помогает диагностировать системную красную волчанку.

Краткая информация и пояснения по анализу

Аутоантитела к ДНК распознают либо одноцепочечные (оц), либо двухцепочечные (дц) формы

ДНК.

Аутоантитела

против

оцДНК

не

зависят

от

заболевания,

они

обусловлены

рядом

аутоиммунных

состояний,

в

том

числе:

медикаментозная

системная

красная

волчанка,

смешанное поражение соединительной ткани, ревматоидный артрит, склеродермия и синдром

Шёгрена.

1,2

Вместе

с

тем,

антитела

против

дцДНК,

которые

высокоспецифичны

к

системной

красной

волчанки (СКВ)

2-4

, присутствуют у пораженных пациентов с уровнем распространения данного

заболевания от 40% до 80%. Согласно Американской коллегии ревматологов, присутствие

антител против дцДНК является одним из 11 критериев классификации СКВ.

5,6

Эти антитела

отсутствуют при синдроме лекарственной волчанки, они также не связаны с подострой кожной

или дискоидной волчанкой.

Анти-дцДНК, вместе с антителами против хроматина, приводят к равномерной окраске ядер при

непрямых

иммунофлуоресцентных

тестах

на

антиядерные

антитела

(АЯА).

Наиболее

оптимальный метод обнаружения анти-дцДНК по-прежнему носит противоречивый характер.

7-9

Наиболее

распространенные

методы:

твёрдофазный

ИФА

на

дцДНК,

10

непрямой

иммунофлуоресцентный тест на клетках Crithidia luciliae (CLIF),

11

или иммунопреципитационные

анализа Фарра

12

. Используемы тип анализа влияет на прогностичность тестов.

9

Хотя в обычной

лабораторной практике доминирует технология твёрдофазного ИФА, она, как правило, приводит

к

получению

большего

количества

ложноположительных

и

истинно

слабоположительных

результатов, что может привести к снижению прогностичности теста, тогда как анализ Фарра,

обладая высокой специфичностью, aтем не менее также позволяет обнаруживать антитела всех

изотопов. Высокоаффинные антитела к дцДНК, возможно, более актуальны для патогенеза СКВ,

в

особенности,

при

нефрите.

Хотя

низкоаффинные

антитела

невозможно

обнаружить

с

помощью анализа Фарра, считается, что их можно выявить при применении твёрдофазного

ИФА.

8,9

Количественное определение антител против дцДНК используется при клиническом лечении

пациентов с СКВ. В нескольких исследованиях документально подтверждено наличие тесной

связи между титром антител и активностью заболевания, в особенности, при волчаночном

нефрите.

13,14

Принципы проведения анализа

Синтетический дцДНК нанесен на парамагнитные гранулы, которые хранятся в картридже с

реагентами в подвешенном состоянии. При первом использовании картриджа для анализа,

переверните весь картридж несколько раз, чтобы тщательно перемешать реагенты. Затем

картридж с реагентами загружают в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Образец

сыворотки

пациента

разводят

в

приборе

в

соотношении

1:10

и

добавляют

в

одноразовую пластиковую кювету. Небольшие количества разведенной сыворотки пациента,

гранул дцДНК и аналитического буфера объединяют вместе во второй кювете и перемешивают.

Данную кювету выдерживают в термостате при 37°C. Затем гранулы намагничивают и несколько

раз промывают. Далее

в кювету

добавляют антитело к

IgG человека, конъюгированное с

изолюминолом, и выдерживают ее в термостате при 37°C. Гранулы повторно намагничивают и

неоднократно

промывают.

Конъюгат

изолюминола

дает

люминесцентную

реакцию

при

добавлении в кювету реагентов Trigger. Световое излучение, создаваемое в результате данной

реакции,

измеряется

оптической

системой

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

в

относительных

световых

единицах

(ОСЕ).

ОСЕ

пропорциональны

количеству

связанного

конъюгата

изолюминола, который в свою очередь пропорционален количеству антител против дцДНК,

связанных с дцДНК на гранулах.

Для

количественного

определения

антител

против

дцДНК

в

тесте

QUANTA

Flash

dsDNA

используется

заранее

установленная

для

определенной

партии

Мастер-кривая,

которая

загружается в прибор по штрих-коду картридж с реагентами. Мастер-кривая создается на этапе

изготовления

путем

применения

внутренних

стандартов,

которые

привязаны

к

подготовке

первых международных стандартов по дцДНК (код ВОЗ: Wo/80). Основываясь на Мастер-кривой

и исходя из результатов, полученных с помощью двух калибраторов, создается привязанная к

прибору

Рабочая

кривая,

которая

используется

программным

обеспечением

для

подсчета

международных единиц (МЕ)/мл на основе значения ОСЕ, полученного для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash dsDNA содержит следующие реагенты для

выполнения 50 определений (701178) или 100 определений (701175):

a.

Покрытые дцДНК парамагнитные гранулы в буфере, содержащие протеиновые

стабилизаторы и консервант.

b.

Аналитический буфер – буфер, содержащий протеиновые стабилизаторы и

консерванты.

c.

Tracer Иммуноглобулин G – меченные изолюминолом, помещенные в буфер

антитела к иммуноглобулину G человека, содержащие протеиновые

стабилизаторы и консервант.

Предупреждения

1.

В качестве консерванта используется азид натрия, который может вступать в реакцию с

санитарно-техническим оборудованием, выполненным из свинца или меди, образуя при

этом взрывоопасные азиды металлов. При использовании для утилизации реагентов

промойте раковины большим количеством воды, чтобы не допустить скопление азидов.

2.

При работе с полученными реагентами используйте соответствующие средства

индивидуальной защиты.

3.

Пролитые реагенты необходимо немедленно убрать. При утилизации отходов

соблюдайте все федеральные, государственные и местные нормативные документы по

охране окружающей среды.

Меры предосторожности

1.

Данное изделие предназначено для использования в диагностических целях в условиях

In Vitro.

2.

Настоящий тест предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH.

3.

После вскрытия, данный картридж с реагентами необходимо хранить в карусели для

реагентов прибора. Следует следить за тем, чтобы не допустить проливания реагентов

при первом размещении картриджа с реагентами в приборе.

4.

Химическое

загрязнение

реагентов

может

возникнуть

в

результате

ненадлежащей

очистки или промывки прибора. Остатки от обычных лабораторных химических веществ,

таких как формалин, раствор гипохлорита натрия, этанол или очищающее средство,

могут

привести

к

созданию

нежелательного

воздействия

при

анализе.

Обязательно

соблюдайте рекомендованный порядок очистки прибора, который описан в руководстве

по эксплуатации ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Условия хранения

1.

Храните невскрытые картриджи с реагентами при 2-8°C. Не замораживайте их. Реагенты

стабильны до срока своей годности при условии хранения и обращения с ними в

соответствии с указаниями

2.

Вскрытые

картриджи

с

реагентами

следует

хранить

в

приборе.

Программное

обеспечение контролирует срок хранения размещенного в приборе (используемого), а

также срок годности (сохранности) картриджа с реагентами по его партии. Система не

допустит использование картриджа с истекшим сроком годности.

Отбор проб

Данную

процедуру

необходимо

проводить

с

сывороточной

пробой.

Нельзя

использовать

загрязненные

микроорганизмами,

подвергнутые

термообработке

пробы

или

образцы,

содержащие видимые частицы. Образцы, содержащие до

10 мг/дл билирубина, 200 мг/дл

гемоглобина, 1 000 мг/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерола или 947 МЕ/мл ревматоидного

фактора типа IgM, не показали создание помех при анализе QUANTA Flash dsDNA. После

отбора

сыворотку

необходимо

выделить

из

сгустка

крови.

Рекомендуется

использовать

следующие условия хранения образцов:

1.

Храните образцы при комнатной температуре в течение не более 48 часов.

2.

Образцы можно хранить при температуре 2-8

°

C на протяжении максимум 10 дней.

3.

В случае не завершения анализа в течение 10 дней, либо в случае необходимости

транспортировки образца, заморозьте его при температуре не менее -20°C. Образцы

можно замораживать и размораживать не более 3 раз. После размораживания проб и до

проведения теста их необходимо хорошо перемешать

Процедура

Материалы, входящие в комплект поставки

1

Картридж с реагентами для QUANTA Flash dsDNA

Дополнительные материалы, которые необходимы, но не

входят в комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH с работающим компьютером

Системный раствор System Rinse для ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Реагенты Trigger для ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибраторы теста QUANTA Flash dsDNA (Каталожный номер: 701176)

Контроли для QUANTA Flash dsDNA (Каталожный номер: 701177)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по использованию хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH и программного обеспечения см. в руководстве по эксплуатации,

которое

входит

в

комплект

поставки

системы

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH.

Для

получения

дополнительной

информации,

в

том

числе

по

поиску

и

устранению

неисправностей, просим обращаться в техническую службу компании Inova Diagnostics,

Inc. по адресу или номеру телефона, указанному в конце данной Инструкции-вкладыш.

2.

Для опорожнения контейнера с твердыми отходами, откройте выдвижную секцию для

отходов.

Извлеките

контейнер

с

твердыми

отходами

и

утилизируйте

надлежащим

образом использованные кюветы. Замените контейнер с твердыми отходами, закройте

выдвижную

секцию

для

отходов

и

нажмите Yes

(Да)

в

окне

Empty

Waste

Drawer

(Очистить выдвижную секцию для отходов).

3.

Для замены реагентов Trigger, нажмите кнопку Bulks Inventory F9 (Учет основных

материалов F9) (в правом верхнем углу).

a.

В экране Inventory – Bulks (Учет – Основные материалы), нажмите кнопку Triggers

слева. Всплывет новое окно под названием Add Triggers – Remove old bottles

(Добавить реагенты Triggers – Удалить использованные флаконы).

b.

Откройте и извлеките выдвижную секцию для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH. Удалите все кюветы в выдвижную секцию для сухих отходов. Выберите

Yes в окне Empty Waste Drawer. Извлеките из держателей флаконы с реактивами

Trigger и нажмите кнопку Next (Далее). Снимите крышки с пробирок со старыми

реактивами и замените их на новые реактивы Trigger. Обязательно сделайте это

поочередно, соблюдая цветовую маркировку крышек (белый цвет к белому, а красный

к красному).

c.

Следуйте

указаниям

в

появившемся

окне

Add

Triggers

Add

Trigger2

bottle

(Добавить

реагенты

Triggers

Добавить

флакон

с

реагентом

Trigger

2).

После

принятия штрих-кода поместите реагент Trigger 2 в держатель с белой цветовой

маркировкой. Выберите Next.

d.

Следуйте указаниям в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle (Добавить реагенты

Triggers – Добавить флакон с реагентом Trigger 1). После принятия штрих-кода

поместите реагент Trigger 1 в держатель с красной цветовой маркировкой. Выберите

Finish (Завершить). Замените и закройте выдвижную секцию для отходов.

4.

Для замены контейнера с системным раствором System Rinse, нажмите кнопку Bulks

Inventory F9 (в правом верхнем углу). В экране Inventory – Bulks, нажмите кнопку Sys.

Rinse (Системный раствор Sys. Rinse). В появившемся окне Add System Rinse – Remove

bottles (Добавить System Rinse – Удалить флаконы) выберите Next. Следуйте указаниям

в появившемся окне Add System Rinse – Add bottle (Добавить System Rinse – Добавить

флакон). После принятия штрих-кода, при необходимости, выберите Finish.

5.

Для опорожнения контейнера с жидкими отходами, нажмите в экране Inventory – Bulks

кнопку Fluid Waste (Жидкие отходы). Удалите и утилизируйте жидкие отходы. Выберите

Next. После замены пустой флаконы выберите Finish.

Методика работы

Подготовка картриджа с реагентами

При

первом

использовании

картриджа

с

реагентами

необходимо

выполнить

следующие

действия, чтобы обеспечить точную установку картриджа в прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Примечание: Не используйте картридж с реагентами при наличии любых видимых признаков его

повреждения.

Картридж с реагентами для QUANTA Flash dsDNA: Во время перевозки и хранения происходит

оседание микрочастиц, что требует выполнение смешения для их ресуспендирования.

1, При первом использовании картриджа, аккуратно

переверните

картридж

30

раз,

избегая

образования

пены.

Убедитесь

в

полном

ресуспендировании

микрочастиц.

Если

они

ресуспендировались

не

полностью, продолжайте переворачивать картридж до

полного

ресуспендирования

микрочастиц.

Если

ресуспендирования

микрочастиц

не

происходит,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ КАРТРИДЖ.

2.

После

ресуспендирования

микрочастиц

поместите

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность,

чтобы

удалить

отрывной

язычок

красного цвета. Удерживая картридж с реагентами

на

месте

одной

рукой,

другой

прочно

захватите

красный

отрывной

язычок

с

задней

стороны

картриджа с реагентами и полностью вытяните его.

3.

Одновременно

с

нажатием

двух

выступов

по

сторонам пробивной крышки (деталь серого цвета),

надавите на верхнюю часть картриджа с реагентами

до

щелчка,

указывающего

на

его

нахождение

в

положении фиксации. При этом, выступы больше не

видны.

НЕ

ПЕРЕВОРАЧИВАЙТЕ

ВСТРЫТЫЙ

КАРТРИДЖ.

4. Аккуратно поместите картридж с реагентами в любой открытый паз в карусели для реагентов

прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. После помещения картриджа в карусель для реагентов

прибор выполняет дополнительное периодические перемешивание гранул.

Калибровка для целей анализа

1.

Каждый новый лот картриджа с реагентами необходимо откалибровать перед его первым

использованием. Программное обеспечение разрешит использовать новый лот только

после его калибровки.

2.

Подробные указания о порядке калибровки картриджа с реагентами см. в разделе под

названием «Калибраторы 701176 для QUANTA Flash

®

dsDNA» настоящей Инструкции-

вкладыша.

3.

После проверки и подтверждения калибровки, лот картриджа с реагентами, который был

подвергнут калибровке, готов к использованию.

Программирование и использование образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist (Рабочий список) в верхней части экрана и выберите внизу

вкладку Racks (Штативы).

2.

Выберите

штатив

для

образцов,

который

будет

использоваться,

путем

выделения

штатива на экране или сканирования его штрих-кода с помощью портативного сканера

штрих-кодов. Сканируйте или введите с клавиатуры название образца, выберите тип

образца, тип контейнера (пробирка/чашка), также выберите dsDNA на аналитической

панели. Повторите данные действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные положения в штативе для образцов, который затем

загрузите в карусель для образцов прибора.

4.

Если все требуемые образцы находятся в приборе, доступной станет зеленая иконка

пуска вверху экрана. Чтобы запустить рабочий цикл, нажмите иконку пуска.

Контроль качества

Контроли для QUANTA Flash dsDNA (продаются отдельно – артикул 701177) содержат контроли

на дцДНК как низкого, так и высокого уровня. Для получения подробных инструкций о том, как

ввести в программное обеспечение всю необходимую информацию по каждому контролю, а

также о порядке использования контролей см. раздел под названием «Контроли 701177 для

QUANTA Flash

®

dsDNA» Инструкции-вкладыша. Контроли рекомендуется применять один раз в

день

использования

теста;

однако,

при

этом

пользователи

также

должны

учитывать

национальные/местные нормативные требования.

Подсчет результатов

Для каждой новой партии QUANTA Flash dsDNA компания Inova создает семиточечную мастер-

кривую. Параметры кривой закодированы в штрих-коде каждого картриджа с реагентами. Во

время калибровки, для преобразования значения ОСЕ в МЕ/мл, используется привязанная к

прибору рабочая кривая, созданная на основе мастер-кривой. Реактивность антител к дцДНК

может быть классифицирована в соответствии с таблицей ниже.

Реактивность

МЕ/мл

Отрицательная

<27

Неопределенная

27-35

Положительная

>35

Реактивность

в

МЕ/мл

напрямую

связана

с

титром

аутоантитела

в

образце

пациента.

Увеличение и уменьшение концентрации аутоантител у пациента будет отражаться в виде

соответствующего

повышения

или

снижения

в

МЕ/мл,

которое

пропорционально

объему

антитела.

Если результат попадает в переменный диапазон, это означает, что вероятность возникновения

СКВ низкая, но, все еще выше, чем у обычной популяции. Результаты сорока одного из 644

пациентов с СКВ (6,4%), которые были протестированы во время валидационных исследований,

попали в промежуточный диапазон. Частота промежуточных результатов по антителам к дцДНК

в протестированной обычной популяции (кол-во = 300 чел.) составила 2,0%. Так как в нескольких

исследованиях документально подтверждено наличие тесной связи между титром антител и

активностью

заболевания,

в

особенности,

при

волчаночном

нефрите

13,14

,

промежуточные

результаты по антителам к дцДНК, вероятнее всего, возникают при неактивном, вылеченным

заболевании по сравнению с впервые выявленной СКВ.

Аналитический диапазон измерения (АДИ) теста (определяемый по самой низшей и самой

высокой точкам мастер-кривой) составляет 9,8 – 666,9 МЕ/мл, что соответствует линейному

диапазону теста. Если результат пациента составляет менее 9,8 МЕ/мл, система ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст его в виде «<9,8 МЕ/мл». Поскольку данное значение меньше 27

МЕ/мл, оно считается отрицательным результатом. Если результат пациента превышает 666,9

МЕ/мл, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст его в виде «>666,9 МЕ/мл». Это считается

положительным

результатом.

Программное

обеспечение

имеет

опцию

автоматического

повторного запуска. При выборе данной опции, прибор автоматически повторно проанализирует

любой образец с результатом >666,9 МЕ/мл после дополнительного 10-кратного разведения,

тем самым поместив измеренное значение в пределы АДИ. Окончательный результат будет

рассчитан программным обеспечением с учетом дополнительного коэффициента разведения.

Поскольку максимальное значение, которое можно измерить, составляет 666,9 МЕ/мл, самое

высокое значение, которое может быть зарегистрировано, составляет 6669 МЕ/мл.

Интерпретация результатов

Каждой

лаборатории

рекомендуется

проверять

заявленный

производителем

эталонный

диапазон, так как он может установить собственный нормальный диапазон на основе своих

средств

контроля

и

популяции

пациентов

в

соответствии

со

своими

собственными

установленными процедурами.

Предполагается, что результаты, сообщаемые лабораторией, должны включать следующее:

«Нижеприведенные

результаты

были

получены

с

помощью

хемилюминесцентного

анализа

QUANTA Flash dsDNA от компании Inova. Значения, полученные с помощью методов анализа

различных производителей, нельзя при использовании считать взаимозаменяемыми».

Процедурные ограничения

1.

Данный набор используется только для упрощения постановки диагноза. Положительный

результат предполагает наличие СКВ, что должно быть подтверждено клиническими

данными и другими диагностическими тестами.

2.

Результаты, полученные в рамках данного анализа, не являются диагностическим

доказательством присутствия или отсутствия болезни.

3.

Сомнительные результаты могут повторяться, либо на свежем образце, либо на более

позднем этапе. Важно тестировать пациентов регулярно для того, чтобы отслеживать

изменения уровня аутоантител к дцДНК.

4.

Рабочие характеристики данного теста определены только для сыворотки, но не других

матричных растворов.

5.

В

литературе,

4,9,16

описаны

расхождения

между

различными

количественными

определениями

антител

к

дцДНК,

которые

могут

быть

вызваны

несколькими

аналитическими

и

технологическими

различиями,

включая,

помимо

прочего,

тип

и

источник антигена, способ обнаружения и гетерогенность авидности антител к дцДНК.

Пороговое значение и промежуточный диапазон

Пороговое значение анализа определили путем тестирования образцов от 170 пациентов,

образующих

контрольную

группу.

Пороговое

значение

установили

при

>95-го

процентиля

результатов, полученных по контрольным пациентам на уровне 27 МЕ/мл. Верхнюю границу

промежуточного диапазона установили при >99-го процентиля результатов на уровне 35 МЕ/мл.

Ожидаемые показатели

Уровни антител против дцДНК проанализировали с использованием QUANTA Flash dsDNA в

группе из 300 практически здоровых доноров крови (131 женщина/169 мужчин, в возрасте от 19

до 68 лет, со средним и медианным возрастом, равным 44 года). При использовании порогового

значения 27 МЕ/мл и промежуточного диапазона 27-35 МЕ/мл, шесть образцов (2,0%) попали в

промежуточный диапазон, еще четыре (1,3%) образца показали положительную реакцию при

применении QUANTA Flash dsDNA. Средняя концентрация составила 11,6 МЕ/мл, а диапазон

значений – от <9,8 до 81,9 МЕ/мл.

Прослеживаемость

Стандарты по мастер-кривой можно проследить до этапа подготовки первых международных

стандартов

по

дцДНК

(код

ВОЗ:

Wo/80).

Исходя

из

данной

стандартизации,

результаты

оформляются в международных единицах (МЕ)/мл.

Клиническая чувствительность и специфичность

В клиническом валидационном исследовании было всего использовано 1 151 образец, в том

числе

644

образца

от

пациентов

с

СКВ

и

485

контрольных

образцов

от

пациентов

с

ревматоидным

артритом,

аутоиммунной

болезнью

щитовидной

железы,

другими

аутоиммунными

синдромами

и

различными

инфекционными

заболеваниями.

Более

того,

проанализировали 22 образца, взятых у пациентов с синдромом лекарственной волчанки.

Распределение образцов и процент лиц с положительной реакцией на анти-дцДНК в

валидационном исследовании:

QUANTA Flash dsDNA

Диагноз

Кол-во

Неопределенная

реакция

Положительная

реакция

Системная красная волчанка (СКВ)

644

41

275

Первичный антифосфолипидный

синдром (PAPS)

20

2

3

Синдром Шёгрена (СШ)

50

1

3

Глютеновая болезнь (ГБ)

20

3

0

Системная склеродермия (СС)

40

4

3

Идиопатическая воспалительная

миопатия (ИВМ)

20

2

0

Смешанная болезнь соединительной

ткани

20

3

3

Болезнь Крона

20

0

1

Диффузный токсический зоб

21

1

0

Болезнь Хашимото

61

4

3

Гепатит B

20

1

0

Гепатит C

18

1

0

Сифилис

20

0

1

Ревматоидный артрит (РА)

101

6

8

Васкулит

34

4

1

Здоровые пациенты контрольной

группы*

20

0

0

Синдром лекарственной волчанки

(СЛВ)*

22

0

2

Всего

1 151

73

303

* Не включено в расчеты по клинической чувствительности и специфичности

Клиническую чувствительность и специфичность QUANTA Flash dsDNA проанализировали

двумя способами; с использованием промежуточных результатов в качестве отрицательного и

положительного контроля:

Клинический анализ (кол-во =

1 109 чел.)

Промежуточный =

Отрицательный

Диагноз

Анализ

(95% доверительный уровень)

СКВ

Контроли

Всего

QUANTA

Flash

®

dsDNA

Положительно

275

26

301

Чувствительность = 42,7% (38,9-

46,6%)

Отрицательно

369

439

808

Специфичность = 94,4% (91,9-96,3%)

Всего

644

465

1 109

Клинический анализ (кол-во =

1 109 чел.)

Промежуточный =

Положительный

Диагноз

Анализ

(95% доверительный уровень)

СКВ

Не СКВ

Всего

QUANTA

Flash

®

dsDNA

Положительно

316

58

374

Чувствительность = 49,1% (45,2-

52,9%)

Отрицательно

328

407

735

Специфичность = 87,5% (84,2-90,2%)

Всего

664

465

1 109

Было известно, что из 644 пациентов с СКВ 25 чел. Имели активную форму волчаночного

нефрита. Клиническая чувствительность теста QUANTA Flash dsDNA для данной популяции

составила 80%, так как 20 из 25 образцов продемонстрировали положительную реакцию.

Сравнение методов с использованием устройства-образца

Все образцы из клинического валидационного исследования

были протестированы с помощью

как QUANTA Flash

dsDNA

, так и утвержденного твердофазного ИФА.

Из 1 151 образца, 481 образец находился в пределах АДИ как при применении теста QUANTA

Flash, так и при проведении утвержденного твёрдофазного ИФА. По триста тридцать-трем

образцам получены результаты, выходящие за нижний предел АДИ теста QUANTA Flash (< 9,8

МЕ/мл), а у 30 образцов результаты превысили АДИ (> 666,9 МЕ/мл).

Согласованность между QUANTA Flash и устройством-образцом составила 98,8% для образцов

с результатами, вышедшими за нижний предел АДИ (4 из 333 показали положительную реакцию

на утвержденный анализ), и 100% для образцов с результатами, превысившими АДИ (все

образцы показали положительную реакцию при использовании устройства-образца).

В таблицах ниже показано сравнение образцов в пределах АДИ. Дана проанализировали с

интервалом два дня, сомнительные результаты рассмотрели с применением обоих анализов

вначале как положительные, а затем как отрицательные.

Сравнение методов -

В пределах АДИ (кол-во =

481 чел.)

Промежуточное =

отрицательное

QUANTA Flash® dsDNA

Согласованность в процентах

(95%

доверительный уровень)

Отрицате

льно

Положит

ельно

Всего

Утвержденный

твёрдофазный

ИФА

Отрицател

ьно

200

53

253

Положительная согласованность:

80,3% (74,6 – 84,9%)

Положител

ьно

45

183

228

Отрицательная согласованность:

79,1% (73,6 – 83,6%)

Всего

245

236

481

Общая согласованность: 79,6% (75,8

– 83,0%)

Сравнение методов -

В пределах АДИ (кол-во =

481 чел.)

Промежуточное =

положительное

QUANTA Flash® dsDNA

Согласованность в процентах

(95%

доверительный уровень)

Отрицате

льно

Положит

ельно

Всего

Утвержденный

твёрдофазный

ИФА

Отрицател

ьно

77

33

110

Положительная согласованность =

68,5% (63,6 – 73,0%)

Положител

ьно

117

254

371

Отрицательная согласованность =

70,0% (60,9 – 77,8%)

Всего

194

287

481

Общая согласованность = 68,8%

(64,5 – 72,8%)

Точность и воспроизводимость

Оценка точности теста QUANTA Flash dsDNA была осуществлена на 9 образцах, содержащих

различные концентрации антител к дцДНК, в соответствии с документом EP5-A3 «Оценка

точности

методов

количественных

измерений.

Одобренное

руководство»

Института

клинических и лабораторных стандартов. Образцы анализировали по два, дважды в день, на

протяжении 20 или 21 дня. Расчеты произвели внутри серии, между сериями, между днями, а

также по суммарным расхождениям; обобщенные данные приведены в таблице ниже:

QUANTA Flash® dsDNA

Внутри серии

(повторяемость)

Между сериями

Между днями

Итого

ID-номер

образца

Кол-во

Среднее

(МЕ/мл)

СО

(МЕ/мл)

Коэффиц

иент

вариации

(%)

СО

(МЕ/мл)

Коэффиц

иент

вариации

(%)

СО

(МЕ/мл)

Коэффиц

иент

вариации

(%)

СО

(МЕ/мл)

Коэффиц

иент

вариации

(%)

1

80

14,1

0,5

3,3

0,3

2,1

0,3

2,1

0,6

4,4

2

84

27,3

1, 5

5,4

1,1

3,9

0,8

2,9

2,0

7,3

3

80

35,6

0,8

2,3

0,8

2,2

0,6

1,7

1,3

3,6

4

84

49,0

2,4

4,9

2,2

4,5

1,2

2,5

3,5

7,1

5

84

86,4

4,0

4,7

3,5

4,0

3,1

3,5

6,1

7,1

6

84

132,4

6,8

5,1

6,6

4,9

5,3

4,0

10,8

8,2

7

84

137,6

6,5

4,7

2,9

2,1

5,5

4,0

9,0

6,6

8

84

344,8

23,1

6,7

2,4

0,7

8,0

2,3

24,6

7,1

9

84

402,8

27,9

6,9

0,0

0,0

14,1

3,5

31,2

7,8

Аналитический диапазон измерений

Нижний предел обнаружения (НПО) теста QUANTA Flash dsDNA составляет 786 ОСЕ (что

соответствует

3

МЕ/мл).

Он

был

определен

согласно

руководству

EP17-A2

Института

клинических и лабораторных стандартов, с использованием ложноположительных (альфа) и

ложноотрицательных (бета) результатов соответственно на уровне менее 5%; на основе 264

определений, с выполнением 144 измерений на холостых пробах и 120 измерений образцов

низкого уровня. Предел холостой пробы (ПХП) составляет 520 ОСЕ (что соответствует 2,2

МЕ/мл). Предел количественного определения (ПКО) составляет 1 805 ОСЕ (6,6 МЕ/мл). Он был

определен согласно документу EP17-A2 Института клинических и лабораторных стандартов, на

основе 120 определений, с целевой суммарной погрешностью 20%. ПХП, НПО и ПКО выходят за

нижнюю границу АДИ.

Аналитический диапазон измерений (АДИ) теста – от 9,8 МЕ/мл до 666,9 МЕ/мл. Линейность АДИ

оценили

путем

проведения

исследования

в

соответствии

с

документом

EP6-A

«Оценки

линейности

методов

количественных

измерений:

статистический

метод;

одобренное

Руководство» Института клинических и лабораторных стандартов. Пять образцов сыворотки с

различными

концентрациями

антител

к

дцДНК

последовательно

развели

до

получения

значений,

попадающих

в

АДИ.

Линейность

разведения

всех

пяти

образцов

была

продемонстрирована по отдельности; при этом, согласно сводным данным были получены

следующие результаты по линейной регрессии:

Образец

Угловой коэффициент

(при 95% ДИ)

Все образцы (кол-во = 5)

1,03 (1,02 - 1,05)

0,99

1

Реагенты QUANTA Flash β2GP-1-Domain1,

кат. № 701188

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

П о л н о с т ь ю

а в т о м а т и з и р о в а н н ы й

и м м у н о х е м и л ю м и н и с ц е н т н ы й

а н а л и з

для

полуколичественного

определения

антител

к

β2

гликопротеину-1

(β2GP1)

Домен

I

в

сыворотке крови

человека

на

приборе ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

®

предназначен

для

диагностирования тромботических нарушений, связанных с антифосфолипидным синдромом

(АФС), в сочетании с результатами других лабораторных анализов и клинической картиной.

Общее описание

Антифосфолипидный

синдром

(АФС)

это

аутоиммунная

патология,

характеризующаяся

частыми тромбозами артерий и вен и/или самопроизвольными абортами. Аутоантитела к

фосфолипидам и к ß2-гликопротеину 1 (ß2GP1) играют важную роль в патогенезе АФС.

Антитела к Домену 1 ß2GP1 (ß2GP1-D1) были предложены в качестве маркера тромбоза, и в

меньшей степени, маркера возможных осложнений беременности, у пациентов, страдающих

АФС

Принципы метода

Очищенный

рекомбинантный

ß2GP1-Domain1

нанесенный

на

парамагнитные

частицы,

которые содержатся в картридже с реагентом, при условиях, которые позволяют сохранять

активное состояние антигена. Когда картридж готов к первому использованию, в пробирку,

содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и содержимое перемешивается.

Затем картридж с реагентами помещается в прибор «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH»

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется 1:10 в приборе буферным

раствором, в одноразовой пластиковой кювете. Небольшое количество разбавленной

сыворотки пациента, ß2GP1-Domain1 и буфер для анализа помещаются во вторую кювету и

перемешиваются. Смесь инкубируется при температуре 37

°

C. Затем микрочастицы

намагничиваются и несколько раз промываются. После этого человеческие анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

°

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы «ACUSTAR И/

ИЛИ BIO-FLASH». Результат, выраженный в ОСЕ, пропорционален количеству связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству анти-

ß2GP1-Domain1 антител связанных с ß2GP1-Domain1 на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

Flash

ß2GP1-Domain1

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании

результатов анализа двух калибраторов строится калибровочная кривая для конкретного

прибора, которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы

(ХЕ) для каждого образца.

2

Реагенты

1.

Картридж

с

реагентами

QUANTA

Flash

ß2GP1-Domain1,

содержит

следующие

реагенты для проведения 50 тестов:

a.

Парамагнитные микрочастицы, покрытые ß2GP1-Domain1, законсервированные

до первого использования.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Трейсер IgG – Человеческие анти-IgG антитела, связанные с изолюминолом;

солевой раствор, стабилизаторы и консерванты.

2.

Буфер

для

ресуспендирования,

1

флакон

подкрашенный

раствор,

содержащий

буфер, стабилизаторы и консерванты.

3.

ß2GP1-Domain1 Калибратор 1, содержащий: Пробирка (1 x 1 мл) с нанесенным штрих-

кодом,

содержащая

раствор

с

анти-

ß2GP1-Domain1

в

буферном

растворе,

стабилизаторы и консервант.

4.

ß2GP1-Domain1 Калибратор 2, содержащий: Пробирка (1 x 1 мл) с нанесенным штрих-

кодом,

содержащая

раствор

с

анти-

ß2GP1-Domain1

в

буферном

растворе,

стабилизаторы и консервант.

Калибраторы зависят от серии и не могут быть использованы с другими сериями реагентов

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

5.

Человеческий

материал

в

данном

продукте

тестировался

посредством

методов,

утвержденных

Федеральным

управлением

США

по

контролю

качества

продуктов

питания, напитков и лекарственных препаратов. Реакция материала на антитела к

поверхностному антигену гепатита В, вирусу гепатита С и ВИЧ 1/2 обнаружена не

была. Обращаться как с потенциально зараженным материалом

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе «ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH».

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

ß2GP1-Domain1 Калибраторы используются совместно с реагентом QUANTA Flash

ß2GP1-Domain1

5.

Не переносить калибратор во вторичную пробирку, баркод на пробирке с

калибратором используется (считывается) прибором.

6.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

3

7.

После открытия пробирки с калибратором, стабильность сохраняет до 8 часов или 4

калибровки, после которых калибратор должен быть утилизирован.

8.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

«ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH», должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 20 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

3.

Калибраторы хранить до открывания при температуре 2-8

C. Не замораживать. При

надлежащем хранении и обращении реагенты сохраняют стабильность до истечения

срока годности.

4.

Открытые калибраторы должны быть утилизированы через 8 часов от момента

открытия.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов:

1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2)

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8

C.

3)

Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если образец необходимо

транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более низкой температуре.

Замороженные образцы должны быть хорошо перемешаны после размораживания и до

проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA ß2GP1-Domain1

1

Буфера для ресуспендирования

1

Пипетка

1

Калибратор 1

1

Калибратор 2

4

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH» с компьютерным модулем

Промывочный раствор «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH»

Триггеры «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH»

Кюветы «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH»

Контроли QUANTA Flash ß2GP1-Domain1 Контрольные материалы (кат.номер: 701187)

Использование хемилюминесцентного анализатора «ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH»

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором «ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH» и программным обеспечением изложены в руководстве

пользователя, поставляемом с системой «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH». Для

получения дополнительной информации и устранения неполадок, связанных с

данным тестом, обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA

Diagnostics, Inc. по адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH».

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и поменять их на новые.

Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой маркировки

(белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH», следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На

экране «Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System

Rinse – Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне

«Add System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа, для правильной установки картриджа в анализатор

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание:

Не используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

5

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать

ß2GP1-Domain1

микрочастицы:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

Если

микрочастицы

не

ресуспендируются,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

ДАННЫЙ

КАРТРИДЖ.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

других отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH».

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

6

Flash

®

ß2GP1-Domain1 Калибраторы данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки лот картриджа с реагентами, для

которого проводили калибровку, готов к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране,

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать ß2GP1-Domain1 из панели тестов. Повторить эти шаги для

всех образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Контроль качества

Контрольные

материалы

QUANTA

Flash

ß2GP1-Domain1

(продаются

отдельно

-

номер

позиции INOVA 701187) содержат положительный и отрицательный контроли ß2GP1-Domain1.

Подробные инструкции о том, как вводить единичное значение и стандартное отклонение

каждого контроля в программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA

Flash

®

ß2GP1-Domain1

Контроли

701187

данного

вкладыша.

Контрольные

пробы

рекомендуется анализировать один раз в каждый день проведения анализа.

Прослеживаемость

В настоящее время нет ни одной международно апробированной сыворотки (референсная) по

ß2GP1-Domain1 для стандартизации анализов ß2GP1-Domain1.

Расчет результатов

Для

каждой

новой

серии

QUANTA

Flash

ß2GP1-Domain1

рассчитана

шеститочечная

обобщающая

кривая.

Данная

кривая

зашифрована

в

штрих-коде

каждого

картриджа

с

реагентами.

После

калибровки

картриджа

с

реагентами

преобразование

ОСЕ

в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфичной

для

конкретного

устройства.

После этого реактивность антител к ß2GP1-Domain1 можно классифицировать

согласно приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с титром

аутоантител

в

образце

пациента.

Увеличение

и уменьшение

концентрации

антител

у

пациента

будет

отражено

в

с о о т в е т с т в у ю щ е м

п о в ы ш е н и и

и л и

с н и ж е н и и

Х Е ,

к о л и ч е с т в о

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый диапазон теста составляет от 3,6 ХЕ до 1380,4 ХЕ. Если результат пациента

будет менее 3,6 ХЕ, то система «ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH» отобразит его в виде «<3,6

CU». Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если

результат

пациента

будет

больше

1380,4

ХЕ,

система

«ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH»

отобразит

его

в

виде

«>1380,4

CU».

Этот

результат

считается

положительным.

В

программном обеспечении есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный анализ).

Если эта опция выбрана, прибор будет

7

автоматически

производить

повторный

анализ

любого

образца,

результат

которого

превышает 1380,4 ХЕ, путем дополнительного разведения его в 10 раз. Фактическое значение

в

ХЕ

будет

рассчитано

с

учетом

дополнительного

коэффициента

разведения.

Функция

автоматического повторного анализа расширяет диапазон анализа на 13804 ХЕ.

Интерпретация результатов

Для каждой лаборатории рекомендуется подтверждать нормальный диапазон, указанный

производителем.

Также,

лаборатория

может

установить

свой

собственный

нормальный

диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно процедурам,

установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующее

утверждение:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного

теста

INOVA

QUANTA

Flash

ß2GP1-Domain1.

Значения,

полученные

с

помощью

тестов

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо. Указанные значения содержания аутоантител не всегда соотносятся с

титром конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не все пациенты, страдающие АФС положительны по ß2GP1-Domain1 антителам.

2.

Результаты данного теста следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное ресуспендирование ß2GP1-Domain1 микрочастиц может привести к

получению меньших значений, чем при должном ресуспендировании.

4.

Технические характеристики данного теста были установлены только для сыворотки

крови.

5.

Калибраторы

разработаны

для

4

калибровок.

После

открытия

калибратора,

его

стабильность составляет не более 8 часов. По истечении 8 часов, калибратор должен

быть утилизирован. Не использовать калибратор свыше 8 часов, так как в таком

случае результаты калибровки и последующие результаты исследования могут быь

некорректными.

Ожидаемые значения

Пороговое

значение

было

установлено

путем

тестирования

431

образцов

доноров.

10

образцов были положительны в отношении антител к сифилису, 4 образца позитивны в

отношении

антител

к

гепатиту

В,

1

образец

позитивный

в

отношении

антител

к

ВИЧ.

Пороговое значение в значении 20 ХЕ, установлено для специфичности >99%.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было

проведено

клиническое

исследование

с

использованием

273

образцов

с

антифосфолипидным синдромом (АФС), 109 образцов от пациентов с болезнью Крона, 94

образца от пациентов с Язвенным колитор, 88 с инфекционными заболеваниями и 374

пациента с другими заболеваниями. Результаты исследования приведины ниже:

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash ß2GP1-Domain1 при СШ:

Клинический анализ

n = 938

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

АФС

Нет АФС

Всего

QUANTA

Flash®

Domain 1 CIA

Положительных

136

3

139

Чувствительность = 49,8%

(43,7-55,9%)

Отрицательных

137

662

799

Специфичность

=

99,5%

(98,7-99,9%)

Когорта

n=

число (%) позитивных

8

Антифосфолипидный синдром (АФС)

273

136 (49,8%)

Первичный АФС

182

100 (54,9%)

Вторичный АФС

91

36 (39,6%)

Болезнь Крона

109

1 (0,9%)

Язвенный колит

94

0 (0,0%)

Инфекционные заболевания

88

1 (1,1%)

Сифилис

50

1 (2,0%)

Вирусный гепатит В (HBV)

28

0 (0,0%)

Вирусный гепатит С (HCV)

10

0 (0,0%)

Другие заболевания

374

1 (0,3%)

Остеоартир

49

0 (0,0%)

Ревматойдный артрит

168

0 (0,0%)

Системный склероз

132

1 (0,8%)

Другие заболевания (не специфические)

25

0 (0,0%)

Метод сравнения

Образцы

для

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований,

которые

находились

в

пределах

регистрируемого

диапазона

теста.

Эти

образцы были проанализированы с помощью теста QUANTA Flash ß2GP1-Domain1 и QUANTA

Flash ß2GP1.

Сравнение методов

(N=622)

ИФА – как негативный

QUANTA Flash ß2GP1 CIA

Анализ

(95% достоверность)

Положит.

Отриц.

Всего

QUANTA

Flash

ß2GP1-

Domain1

Отрицательных

119

2

121

Положительное согласование =

51,1% (44,5-57,7%)

Положительных

114

387

501

Отрицательное согласование =

99,5% (98,2-99,9%)

Всего

233

389

622

Общее согласование =

81,4% (78,1-84,3%)

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость теста QUANTA Flash ß2GP1-Domain1 была оценена с использованием 6 образцов

сыворотки,

в

соответствии

с

руководством

EP5-A2

CLSI.

Результаты

исследования

представлены ниже:

В одном тесте

Между

тестами

В разные дни

Всего

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

Pt 1

80

10,4

0,9

8,3%

0,5

4,3%

0,0

0,0%

1,0

9,4%

Pt 2

80

18,4

0,9

4,6%

0,5

2,6%

0,5

2,9%

1,1

6,0%

Pt 3

80

22,8

1,4

6,1%

0,0

0,0%

0,9

3,8%

1,6

7,2%

Pt 4

80

54,3

2,5

4,6%

1,2

2,2%

1,4

2,5%

3,1

5,6%

Pt 5

80

99,6

6,4

6,5%

0,0

0,0%

0,0

0,0%

6,4

6,5%

Pt 6

80

318,3

18,6

5,9%

4,9

1,6%

0,0

0,0%

19,3

6,1%

Pt 7

80

538,1

30,3

5,6%

28,7

5,3%

7,9

1,5%

42,5

7,9%

Pt 8

80

947,8

82,8

8,7%

0,0

0,0%

57,3

6,0%

100,7

10,6%

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

9

Регистрируемый диапазон (РД) составляет 4,9 ХЕ – 1374,8 ХЕ.

Предел

обнаружения

данного

теста

равен

1296

ОСЕ,

что

ниже

РД

теста

(3,6

ХЕ).

В

соответствии с руководством CLSI EP17-А

Весь РД, 3,6 ХЕ – 1380,4 ХЕ является линейным. Исследование на линейность проводили в

соответствии с CLSI EP6-A:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Отклонение (95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения

с осью ординат (95 %

доверительный

интервал)

1

1444,7 – 321,0

1,05 (0,98 – 1,13)

-100,4 (-172,8 - -28,0)

0,98

2

454,7 – 45,5

0,99 (0,96 – 1,03)

0,2 (-10,3 – 10,6)

0,99

3

124,9 – 12,5

1,03 (1,00 – 1,05)

-1,9 (-3,9 – 0,1)

1,00

4

81,1 – 8,1

1,01 (0,95 – 1,08)

-2,1 (-5,4 – 1,3)

0,98

5

10,3 – 1,0

0,96 (0,91 – 1,01)

0,2 (-0,1 – 0,5)

0,99

Реагенты QUANTA Flash Centromere,

кат. № 701198

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA

Flash

Centromere

это

иммунохемилюминесцентный

анализ

(ИХЛА),

предназначенный

для

полуколичественного

определения

аутоантител

к

белку

B

центромеры в сыворотке крови человека на приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

®

. Этот

тест

применяется

совместно

с

другими

клиническими

данными

для

выявления

заболеваний соединительной ткани, в том числе системного склероза.

Общее описание и объяснение анализа

Аутоантитела, специфичные к центромерному участку хромосом, были впервые описаны в

1980

г.

1

Содержание

антител

к

белкам

центромеры

(CENP)

принято

определять

методом

непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) с

использованием быстро делящихся линий клеток

тканевых культур (таких как HEp-2) в качестве субстрата.

1

В настоящее время известно, что

структура, называемая «центромерой» состоит из нескольких белковых

составляющих, из

которых диагностически наиболее важными являются CENP-A,

CENP-B

и

CENP-C.

1,2

Многие

субъединицы

центромеры

были

выделены

или

клонированы.

Были

также

определены

несколько других антигенов, но антитела к ним обнаруживаются гораздо реже. Большинство

анализов, предназначенных для определения антител к CENP, основаны на рекомбинантном

белке CENP-B

1

. Чувствительность таких анализов, согласно известным данным, составляет

около 95 % чувствительности анализа НИФ с использованием клеточного субстрата HEp-2.

1-3

Антитела

к

центромере

являются

серологическим

маркером

особой

формы

системного

склероза (склеродермии), обычно описываемой под названием «CREST-синдром» (кальциноз,

ф е н о м е н

Р е й н о ,

н а р у ш е н и е

м о т о р и к и

п и щ е в о д а ,

с к л е р о д а к т и л и я ,

телеангиэктазия).

1,2

У

пациентов, в сыворотке которых обнаруживаются антитела к центромере, часто наблюдается

более

легкая

форма

системного

склероза

с

меньшей

с т е п е н ь ю

с и с т е м н ы х

поражений.

Антитела к белкам центромеры практически отсутствуют в образцах с

антителами к РНК-

полимеразе III или Scl-70.

1

Принципы метода

Рекомбинантный

белок

B

центромеры

иммобилизован

на

поверхности

парамагнитных

микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в условиях, позволяющих антигену

оставаться

в

реактивном

состоянии.

Когда

картридж

для

анализа

готов

к

первому

использованию, в пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор,

и содержимое

перемешивается.

Затем

картридж

с

реагентами

помещается

в

прибор

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

®

.

Образец

сыворотки

пациента

предварительно

разбавляется

в

приборе

с

помощью

ополаскивателя

системы,

налитого

в

одноразовую

пластиковую

кювету.

Небольшие

количества разбавленной сыворотки пациента, микрочастицы, покрытые CENP-B, и буфер

для анализа помещаются во вторую кювету и перемешиваются. Данная кювета инкубируется

при температуре 37

°

C. Затем микрочастицы намагничиваются и несколько раз промываются.

После

этого

антитела,

конъюгированные

с

изолюминолом,

добавляются

в

кювету

и

инкубируются при температуре 37

°

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз

промываются. Конъюгат изолюминола вызывает люминесцентную реакцию при добавлении

реагентов

(«триггеров»)

в

кювету.

Свечение,

возникающее

в

результате

этой

реакции,

измеряется в относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата

изолюминола,

которое,

в

свою

очередь,

пропорционально количеству антител к CENP, связанных с CENP-B на микрочастицах.

В

анализе

QUANTA

Flash

Centromere

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании

результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора, которая используется для пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для

каждого пациента.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash Centromere содержит следующие реагенты для

проведения 50 определений:

a.

парамагнитные микрочастицы, покрытые антигенами центромеры, хранящиеся

до первого использования.

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Метка IgG – меченые изолюминолом антитела к IgG человека, содержащие

буфер, стабилизаторы белка и консервант.

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

Буфер для анализа содержит вещество (0,02 % хлорамфеникола), которое по данным

штата Калифорния вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления

азида

раковины,

использованные

для

утилизации

реагента,

следует

промыть большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный анализ предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

5.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

ф о р м а л и н ,

о т б е л и в а т е л ь ,

э т а н о л

и л и

д е т е р г е н т ,

м о г у т

п о в л и я т ь

н а

результаты

анализа. Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве

пользователя ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

т е м п е р а т у р е

2-8

°

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 56 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые частицы, не должны использоваться. При анализе образцов, содержавших до 10

мг/дл билирубина, 200 мг/дл гемоглобина, 1000 мг/дл триглицеридов, 224 мг/дл холестерола

или 500 МЕ/мл ревматоидного фактора IgM при помощи набора QUANTA Flash Centromere

явление интерференции не наблюдалось.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A4 Института

клинических и лабораторных стандартов рекомендуются следующие условия хранения для

образцов.

1.

Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в

холодильник при температуре 2-8°C.

3.

Если анализ не будет завершено в течение 48 часов или если образец необходимо

транспортировать,

он

должен

быть

заморожен

при

-20

°

C

или

более

низкой

температуре.

Замороженные

образцы

должны

быть

хорошо

перемешаны

после

размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения анализа

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash Centromere

1

Буфер для ресуспендирования

1

Пипетка с одной меткой

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH с компьютерным управлением

Ополаскиватель системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибровочные препараты QUANTA Flash Centromere (номер детали: 701196)

Контрольные препараты QUANTA Flash Centromere (номер детали: 701197)

Использование хемилюминесцентного анализатора

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR И/

ИЛИ BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве оператора,

поставляемом с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Для получения

дополнительной информации и устранения неполадок в связи с данным анализом

обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его

д о л ж н ы м

образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes»

в окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране

«Inventory – Bulks» нажать

к н о п к у

«Triggers» слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer». Извлечь

т р и г г е р н ы е

ф л а к о н ы

и з

з а ж и м о в

и

н а ж а т ь

кнопку

« N e x t » .

Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на новые.

Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой маркировки

(белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2

bottle». После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив с

цветовой маркировкой. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle».

После принятия

штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив с цветовой

маркировкой. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks

Inventory

F 9»

(в верхнем

правом

углу) .

Н а

экране

«Inventory – Bulks» нажать

кнопку

«Sys.

Rinse».

В

новом

окне « Add

System

Rinse

– R e m o v e

bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо проколоть пробки на

пробирках

с

реагентами

и

смешать

микрочастицы,

покрытые

антигеном

центромеры,

с

буферным раствором для ресуспендирования. Примечание: Не использовать картридж с

реагентами, если видны какие-либо признаки повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать реагенты комплекта:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами,

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

НЕ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ

КАРТРИДЖ,

если

микрочастицы

не

ресуспендируются.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

другие отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH После помещения картриджа в карусель для

реагентов прибор выполняет дополнительное периодическое смешивание

микрочастиц.

Калибровка анализа

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash

®

Centromere Калибраторы 701196 данного вкладыша.

3.

После подтверждения правильности калибровки серия картриджа с реагентами, на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) ,и выбрать Centromere из панели анализа. Повторить эти шаги для

всех образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы начать анализ.

Контроль качества

Контрольные препараты QUANTA Flash Centromere (продаются отдельно - номер детали

INOVA 701197) содержат положительный и отрицательный контроли анализа Centromere.

Подробные инструкции о том, как вводить единичное значение и стандартное отклонение

каждого контроля в программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA

Flash

®

Centromere

Контроли

701197

данного

вкладыша.

Рекомендуется

анализировать

контрольные препараты один раз в каждый день проведения анализа; однако пользователи

должны также учитывать национальные/местные нормативные требования.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash Centromere рассчитана шеститочечная обобщающая

кривая. Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-коде

каждого картриджа с реагентами. После калибровки картриджа с реагентами преобразование

ОСЕ

в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфической

для

конкретного

устройства.

После

этого

реактивность

антител

к

центромере

можно

классифицировать согласно приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥20

Реактивность, выраженная в ХЕ, непосредственно связана с титром аутоантител в образце

пациента. Увеличение и уменьшение концентрации антител у пациента будет отражено в

соответствующем

повышении

или

снижении

ХЕ,

количество

которых

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый

диапазон

анализа

составляет

от

3,4

ХЕ

до

708,9

ХЕ.

Если

результат

пациента будет меньше 3,4 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASHотобразит его в виде

«<3,4 CU ». Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом.

Если результат пациента будет больше 708,9 ХЕ, система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

отобразит

его

в

виде

«>708,9

CU

»

.

Этот

результат

считается

положительным.

В

программном

обеспечении

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

есть

опция

«Auto-

Rerun» (Автоматический

повторный

анализ).

Если

эта

опция

выбрана,

прибор

будет

автоматически

производить

повторный

анализ

любого

образца,

результат

которого

превышает

708,9

ХЕ,

путем

дополнительного

разведения

его

в

20

раз. Фактическое

значение в ХЕ будет рассчитано с учетом дополнительного коэффициента разведения.

Интерпретация результатов

Набор

реагентов

QUANTA Flash

способен

обнаружить

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов.

Каждая

лаборатория

должна

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующие

данные:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного

анализа

INOVA QUANTA

Flash

Centromere.

Значения,

полученные

с

помощью

методик

анализа

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо.

Указанные

значения

содержания

антител

не

всегда

соотносятся с титром конечной точки».

Ограничения методики

1.

Не все больные системным склерозом положительны в отношении антител к CENP-B.

2.

Результаты данного анализа следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное ресуспендирование микрочастиц, покрытых антигенами центромеры,

может

привести

к

получению

меньших

значений,

чем

при

должном

ресуспендировании.

4.

Технические

характеристики

данного

анализа

не

были

установлены

для

матриц,

отличных от сыворотки.

Ожидаемые результаты

Для

установления

ожидаемых

значений

была

испытана

сыворотка,

полученная

от

400

практически здоровых доноров крови. Среднее значение составило <3,4 ХЕ, а доверительный

интервал с вероятностью 95 % был определен как <3,4 ХЕ.

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое валидационное исследование с участием 137 образцов больных

системным склерозом, 50 – ревматоидным артритом, 137 – системной красной волчанкой, 49

– воспалением кишечника, 27 – болезнью Крона, 30 – язвенным колитом, 19 – множественным

склерозом,

31

вирусным

гепатитом

B,

24

вирусным

гепатитом

C,

8

вирусом

иммунодефицита человека, 9 – сифилисом и 37 пациентов с другими заболеваниями. Кроме

этого, в исследование были включены 400 образцов, взятых у здоровых доноров крови.

Результаты данного тестирования представлены ниже:

Клиническое исследование

(N = 898)

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

Системный

склероз

Нет

системного

склероза

Всего

QUANTA

Flash

®

Centromere

Положительных

32

8*

40

Чувствительность = 23,4% (16,6-

31,3%)

Отрицательных

105

813

918

Специфичность = 99,0% (98,1-

99,6%)

Всего

137

821

958

*

5 образцов были взяты у практически здоровых участников, один – у пациента со смешанным

заболеванием соединительной ткани (СЗСТ), один – у пациента с неполным CREST-синдромом

(CRES) и один – у пациента с СКВ; 7/8 образцов также показали положительный результат в

твердофазном ИФА

Сравнение метода с устройством-образцом

В

состав

образцов

для

анализа

сравнения

методов

вошли

образцы

из

клинических

валидационных

исследований

и

аналитического

сравнения.

Эти

образцы

были

проанализированы

с

помощью

анализа

QUANTA

Flash

Centromere

и

эталонного

твердофазного ИФА.

Сравнение методов (N= 361)

Centromere ELISA

Процентное совпадение

(95% достоверность)

Положительных

Отрицательных

Всего

QUANTA Flash

®

Centromere CIA

Положительных

74

1

#

75

Совпадение положит.

результатов = 85,7% (75,8-

91,8%)

Отрицательных

13*

273

286

Совпадение отрицательных

результатов = 99,6% (98,0-

100,0%)

Всего

87

274

361

Общее совпадение = 96,1%

(93,6-97,9%)

* три образца были взяты у пациентов с системным склерозом, а 8 – с СКВ; у двух диагноз не был

установлен

#

Больной СЗСТ с синдромом Рейно

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость анализа QUANTA Flash Centromere была оценена в исследовании с участием 8

пациентов, проведенном в соответствии с руководством EP5-A2 Института клинических и

лабораторных стандартов. Результаты исследования представлены ниже:

В одном

анализе

Между

анализами

В разные дни

Всего

Образ

ец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

СО

КВ, %

A

80

6,2

0,2

2,6%

0,2

3,0%

0,3

5,4%

0,4

6,7%

B

80

13,5

0,5

3,7%

0,3

2,1%

0,7

4,9%

0,9

6,5%

C

80

22,9

0,9

3,7%

0,5

2,2%

0,9

4,0%

1,4

5,9%

D

80

60,9

2,0

3,2%

1,3

2,1%

3,4

5,5%

4,1

6,7%

E

80

103,3

5,7

5,6%

0,4

0,4%

4,2

4,1%

7,1

6,9%

F

80

197,9

13,2

6,7%

0,0

0,0%

11,9

6,0%

17,7

9,0%

G

80

321,4

24,5

7,6%

0,0

0,0%

27,8

8,7%

37,1

11,5%

H

80

463,2

33,6

7,3%

0,0

0,0%

22,9

4,9%

40,7

8,8%

Пределы обнаружения; линейные и аналитические диапазоны измерения

Нижний предел обнаружения для данного анализа, согласно руководству EP17-A Института

клинических

и

лабораторных

стандартов

(CLSI),

составляет

примерно

370,2

ОСЕ,

что

эквивалентно

значению

1,0

ХЕ,

которое

значительно

ниже

нижнего

порога

диапазона

аналитического измерения. Верхний предел обнаружения составляет около 774 000 ОСЕ, что

примерно на 39 % выше порога диапазона аналитического измерения. Весь регистрируемый

диапазон составляет от 3,4 ХЕ до 708,9 ХЕ и является линейным. Исследование линейности

проводили согласно руководству EP6-A CLSI. Результаты приведены ниже:

Образе

ц

Диапазон теста

(ХЕ)

Наклон прямой

(95%

доверительный

интервал)

Y – точка

пересечения с осью

ординат (95 %

доверительный

интервал)

1

1,77 - 17,7

0,94 (от 0,91 до

0,97)

1,01 (от 0,69 до 1,33)

1,00

2

6,3 - 63,7

0,98 (от 0,96 до

1,00)

1,89 (от 1,15 до 2,64)

1,00

3

9,33 - 93,26

0,98 (от 0,96 до

1,01)

2,45 (от 1,16 до 3,74)

1,00

4

12,74 - 127,4

0,99 (от 0,97 до

1,01)

2,27 (от 0,89 до 3,64)

1,00

5

6

24,44 - 244,4

113,59 - 1135,9

0,99 (от 0,97 до

1,01)

0,99 (от 0,95 до

1,03)

-0,20 (от -3,18 до 2,78)

-39,07 (от -67,38 до -

10,76)

1,00

0,99

1

Реагенты QUANTA Flash ENA7,

кат. № 701255, 701258

Для диагностики In Vitro. Уровень сложности по закону CLIA: Умеренный

701258, 701255

Назначение

QUANTA

Flash

ENA7

представляет

собой

хемилюминесцентный

иммуноанализ

для

качественного определения аутоантител класса IgG против Sm, RNP, Ro60 (SS-A), Ro52/TRIM21,

SS-B

(La),

Scl-70

(топоизомераза

I)

и

Jo-1

в

сыворотке

крови

человека.

Присутствие

этих

аутоантител

используется

для

диагностики

системной

красной

волчанки

(СКВ),

системной

склеродермии

(ССД),

полимиозита

(ПМ),

дерматомиозита

(ДМ),

синдрома

Шегрена

(СШ)

и

смешанных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) в сочетании с клиническими данными и

другими результатами лабораторных исследований.

Сводная информация и описание процедуры анализа

Антиядерные

антитела

(ANA)

обнаруживаются

при

широком

разнообразии

заболеваний

соединительной

ткани

и,

как

таковые,

служат

в

качестве

чувствительного

скринингового

анализа.

1,2,3

Хотя

ANA-тестирование

является

отличным

скрининговым

тестом

на

СКВ

(отрицательный результат практически исключает активную форму СКВ), оно ни в коем случае не

является специфическим тестом.

2,3

Антитела против экстрагируемых ядерных антигенов (ENA)

могут предоставить значительную диагностическую и прогностическую информацию при оценке

пациентов с подозрением на различные заболевания соединительной ткани, такие как СКВ, ССД,

СШ и аутоиммунный миозит (АИМ).

1

Семь из наиболее полезных и наиболее часто тестируемых

аутоантител против ENA реагируют с антигенами Sm4, RNP4, Ro605,6, Ro525,6, SS-B1, Scl-707 и

Jo-11.

Набор ИХЛА QUANTA Flash ENA7 позволяет одновременно анализировать образцы пациентов на

аутоантитела Sm, RNP, Ro60, Ro52, SS-B, Scl-70 и Jo-1 в одной лунке. Образцы, которые

оказались отрицательными в этом скрининговом анализе, вероятно, будут отрицательными в

отношении

антител

против

Sm,

RNP,

Ro60,

Ro52,

SS-B,

Scl-70

и

Jo-1.

Образцы,

которые

оказались положительными в этом скрининговом тесте, должны быть повторно проверены с

помощью других специальных тестов на ENA, таких как ИХЛА или ELISA, для подтверждения

положительности,

для

определения

специфичности

аутоантител

и,

если

необходимо,

для

количественного определения уровней специфических антител.

Для выявления антител против Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70 и Jo-1 использовались различные

методы, включая двойную диффузию по Оухтерлону и пассивную агглютинацию. Также были

разработаны клинически полезные анализы ELISA для выявления антител против Sm, RNP, SS-A,

SS-B, Scl-70 и Jo-1.

1,4,5,6,7

Принципы процедуры анализа

Рекомбинантные Ro60, Scl-70, Jo-1, Ro52, SS-B (La) и нативные Sm и RNP наносятся на

парамагнитные

шарики,

которые

хранятся

в

картридже

с

реагентами

в

условиях,

которые

сохраняют антиген в его реактивном состоянии. Когда картридж для анализа готов к первому

использованию, в пробирку, содержащую законсервированные шарики, добавляется буферный

раствор,

и

шарики

повторно

перемешиваются

с

буферным

раствором.

Затем

картридж

с

реагентами помещается в анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

®

.

В приборе в одноразовой пластиковой кювете образец сыворотки крови пациента разбавляется в

соотношении 1:17 посредством промывочного раствора. Небольшие количества разведенной

сыворотки пациента, шарики с ENA7 и аналитический буферный раствор помещаются во вторую

Rx Only

REF

2

кювету и перемешиваются. Эта кювета подвергается инкубации при температуре 37 °C. После

этого шарики намагничиваются и несколько раз промываются. Затем в кювету добавляется

антитело

IgG,

конъюгированное

с

изолюминолом,

после

чего

происходит

инкубация

при

температуре 37 °C. После этого шарики снова намагничиваются и несколько раз промываются.

При добавлении в кювету реагентов-триггеров конъюгат изолиминола вызывает люминесцентную

реакцию.

Излучаемый

в

результате

этой

реакции

свет

измеряется

оптической

системой

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH в относительных световых единицах (ОСЕ). Интенсивность света в

ОСЕ пропорциональна количеству связанного конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь,

пропорционально количеству антител против ENA, связанных с ENA7 на шариках.

Для анализа QUANTA Flash ENA7 используется заранее заданная, специфическая для каждой

партии

обобщенная

кривая,

которая

загружается

в

прибор

через

штрихкод

картриджа

с

реагентами. На основании результатов, полученных при использовании двух калибровочных

образцов, строится рабочая кривая для конкретного прибора, которая используется программным

обеспечением для расчета значения, выражаемого в хемилюминесцентных единицах (ХЕ), по

значению, выраженному в относительных световых единицах (ОСЕ) для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash ENA7 содержит следующие реагенты в количестве,

необходимом

для

проведения

50

тестов

(артикул

701258)

или

100

тестов

(артикул

701255):

a.

Парамагнитные

шарики

с

нанесенным

на

них

ферментом

ENA7,

законсервированные перед первым применением.

b.

Аналитический буферный раствор – флакон розового цвета, содержащий ТРИС-

буферизированный

физраствор,

эмульгатор

Tween

20

(полисорбат-20),

стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Индикатор

IgG

антитела

против

IgG

человека,

меченное

изолуминолом:

содержит буферный раствор, белковые стабилизаторы и консервант.

2.

Буферный раствор для ресуспендирования – 1 флакон, содержащий буферный раствор,

белковые стабилизаторы и консерванты.

Предупреждения

1.

Аналитический

буферный

раствор

содержит

химическое

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола), которое, как известно в штате Калифорния, вызывает рак.

2.

В качестве консерванта используется азид натрия. Азид натрия ядовит и может оказывать

токсичное воздействие на организм при попадании на кожу или в глаза. Азид натрия

может

вступать

в

реакцию

с

свинцовыми

или

медными

трубами

с

образованием

потенциально взрывоопасных азидов металлов. Чтобы предотвратить накопление азидов,

тщательно

промойте

раковины,

используемые

для

утилизации

реагентов,

большим

количеством воды.

3.

При

работе

с

имеющимися

реагентами

используйте

соответствующие

средства

индивидуальной защиты.

4.

В случае утечки реагентов необходимо немедленно произвести очистку. Соблюдайте все

действующие федеральные, государственные и местные нормы и правила по утилизации

отходов.

Меры предосторожности

1.

Продукт предназначен для диагностики In Vitro.

2.

Продукт предназначен только для работы с анализатором ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

3.

Необходимо строго соблюдать протокол ресуспендирования.

3

4.

После вскрытия картридж с реагентами должен храниться на карусельном штативе для

реагентов. Соблюдайте осторожность и оберегайте реагенты от случайной утечки при

первой установке картриджа с реагентами в анализатор.

5.

В результате неправильной чистки или промывки анализатора возможно химическое

загрязнение реагентов. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как формалин,

отбеливатель,

этанол

или

моющее

средство,

могут

создавать

помехи

при

работе

прибора-анализатора. Строго соблюдайте рекомендуемую процедуру чистки, описанную в

руководстве по эксплуатации анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Условия хранения

1.

Невскрытые картриджи с реагентами и буферным раствором для ресуспендирования

следует хранить при температуре 2-8 °C. Не замораживать! При условии соблюдения

требований к хранению и обращению реагенты сохраняют стабильность до истечения

срока годности.

2.

Вскрытые

картриджи

с

реагентами

следует

хранить

в

анализаторе.

Программное

обеспечение

анализатора

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

контролирует

срок

годности

реагентов,

находящихся

в

анализаторе

во

время

их

использования,

и

общий

срок

годности (дату окончания срока годности) серии, указанной на картридже с реагентами.

Система не будет работать с картриджами, срок годности которых истек.

Сбор образцов, приготовление и хранение

Ниже описана процедура, выполняемая с образцами сыворотки. Категорически запрещается

использовать

образцы,

загрязненные

микроорганизмами,

образцы,

прошедшие

термическую

обработку, или образцы, содержащие видимые частицы примесей.

После сбора образцы сыворотки должны быть отделены от сгустков крови. Документ H18-A4

Института клинических и лабораторных стандартов устанавливает для образцов следующие

условия хранения:

1.

Образцы следует хранить при комнатной температуре не более 8 часов.

2.

Если

анализ

не

будет

завершен

в

течение

8

часов,

следует

поместить

образцы

в

холодильную камеру с температурой 2-8 °C.

3.

Если

анализ

не

будет

завершен

в

течение

48

часов,

или

если

планируется

транспортировка образца, допускается замораживание образцов до температуры -20 °C

или ниже. После размораживания, перед проведением анализа, замороженные образцы

следует тщательно перемешать.

Описание процедуры

Комплект поставки

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash ENA7

1

Буферный раствор для ресуспендирования

1

Пипетка для переноса жидкости

Необходимые дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, подключенный к персональному компьютеру

Раствор для промывки гидравлической системы анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Растворы-триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

4

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибровочные образцы QUANTA Flash ENA7 (артикул: 701256)

Контроли QUANTA Flash ENA7 (артикул: 701257)

Применение хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH приводятся в

руководстве по эксплуатации хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH и в руководстве по программному обеспечению для анализатора. Для

получения

дополнительной

информации

и

устранения

неполадок,

связанных

с

анализом, обратитесь в техническую службу INOVA Diagnostics, Inc. по адресу или

номеру телефона, указанному в конце данного листка-вкладыша.

2.

Чтобы опорожнить контейнер для твердых отходов, откройте ящик для отходов. Удалите

контейнер для твердых отходов и утилизируйте использованные кюветы надлежащим

образом. Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и нажмите

кнопку Yes («Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнение ящика для отходов»).

3.

Чтобы заменить реагенты-триггеры, нажмите кнопку Bulks Inventory (F9) («Инвентарь –

Бестарный») (вверху справа).

a.

В окне Inventory – Bulks («Инвентарь – Бестарный») нажмите кнопку Triggers

(«Триггеры») слева. Откроется новое всплывающее окно Add Triggers – Remove old

bottles («Добавить триггеры – Удалить старые флаконы»).

b.

Откройте ящик для отходов и удалите отходы из прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH. Утилизируйте все кюветы, находящиеся в ящике для сухих отходов. Нажмите

кнопку Yes («Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнить ящик для отходов»).

Удалите флаконы из-под раствора-триггера из держателей и нажмите кнопку Next

(«Далее»).

Отвинтите

колпачки

от

старых

флаконов

для

растворов-триггеров

и

установите новые флаконы с растворами-триггерами. Выполняйте эту операцию для

каждого флакона по отдельности, соблюдая цветовую кодировку колпачков (белый

колпачок к белому флакону, красный – к красному).

c.

Следуйте инструкциям, выводимым в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 2»). После считывания и

проверки штрихкода поместите флакон с триггером 2 в держатель белого цвета.

Нажмите кнопку Next («Далее»).

d.

Следуйте инструкциям, выводимым в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 1»). После считывания и

проверки штрихкода поместите флакон с триггером 1 в держатель красного цвета.

Нажмите кнопку Finish («Готово»). Установите ящик для отходов на место и закройте

его.

4.

Чтобы заменить контейнер для промывочного раствора Bulks Inventory (F9) («Инвентарь

– Бестарный») (в верхнем правом углу). В окне Inventory – Bulks («Инвентарь –

Бестарный») нажмите кнопку Sys. Rinse («Промывочный раствор»). В новом окне Add

System

Rinse

Remove

bottles

(«Добавить

раствор

для

промывки

удалить

флаконы») нажмите кнопку Next («Далее»). Следуйте инструкциям, выводимым в новом

окне Add System Rinse – Add bottle («Добавить промывочный раствор – Добавить

флакон»). После считывания и проверки штрихкода, если требуется, нажмите кнопку

Finish («Готово»).

5.

Чтобы опорожнить контейнер для жидких отходов, в окне Inventory – Bulks («Инвентарь

– Бестарный») нажмите кнопку Fluid Waste («Жидкие отходы»). Удалите жидкие отходы

и

утилизируйте

их

надлежащим

образом.

Нажмите

кнопку

Next

(«Далее»).

После

установки пустого флакона на место нажмите кнопку Finish («Готово»).

5

Описание методики анализа

Подготовка картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо тщательно соблюсти все

описанные ниже указания по правильной установке картриджа в анализатор ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH. Примечание: Запрещается использовать картридж, имеющий признаки повреждения.

1.

Поместите картридж с реагентами на твердую

поверхность. Придерживайте его рукой.

Второй рукой потяните за красный язычок,

расположенный в задней части корпуса

картриджа, и достаньте его полностью.

2.

Нажав на два выступа по бокам

прокалывающего колпачка (деталь серого

цвета), надавите на верхнюю часть картриджа

с реагентами таким образом, чтобы он

опустился вниз и зафиксировался до щелчка.

Теперь эти выступы больше не будут видны.

ЗАПРЕЩАЕТСЯ ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ

ВСКРЫТЫЙ КАРТРИДЖ!

3.

Ресуспендируйте шарики:

a.

Снимите колпачок с флакона с

буферным раствором для

ресуспендирования и наберите

жидкость в пипетку, входящую в

комплект поставки. Следует

использовать все содержимое флакона.

b.

Сдвиньте крышку картриджа с

реагентами в открытое положение,

слегка нажав на узкую часть картриджа

с реагентами, и удерживайте ее в этом

положении. Аккуратно перенесите все

содержимое флакона в пробирку с

реагентами с шариками через

единственное отверстие в верхней

части картриджа с реагентами.

c.

Перемешайте содержимое пробирки с

реагентами с шариками, всасывая и

выпуская жидкость из пипетки не менее

30 раз подряд. Если после

перемешивания наблюдаются сгустки

шариков, продолжайте перемешивание

раствора еще не менее 30 раз. Если

суспензия из микрочастиц не

образовалась, КАРТРИДЖ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ НЕЛЬЗЯ!

d.

Перед извлечением пипетки из

пробирки используйте всю жидкость.

После этого утилизируйте пипетку.

4.

Снимите наклейку с верхней части картриджа с реагентами, открыв еще три отверстия.

5.

Поместите

картридж

с

реагентами

в

открытое

гнездо

на

карусельном

штативе

анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

6

Калибровка перед началом анализа

1.

Перед первым применением новой серии картриджей с реагентами следует произвести

калибровку. Программное обеспечение не допустит новую серию реагентов к работе без

калибровки.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами приводятся в разделе

«Калибровочные образцы QUANTA Flash

®

ENA7, артикул 701256» данного листка-

вкладыша.

3.

После валидации калибровки картридж с реагентами, прошедший калибровку, готов к

работе.

Программирование и введение образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist («Рабочий список») в верхней части окна и выберите вкладку

Racks («Стойки») в нижней части окна.

2.

Выберите нужную стойку для образца, выделив его на экране или путем считывания ее

штрихкода специальным ручным считывателем. Отсканируйте или введите с клавиатуры

название

образца,

выберите

тип

образца

(пробирка/чашка)

и

выберите

на

панели

анализов опцию «ENA7». Повторите эти действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные гнезда на стойке для образцов, а затем вставьте стойку в

карусельный штатив анализатора.

4.

После того как все требуемые материалы будут помещены в анализатор, армяк запуска

анализа в верхней части экрана компьютера станет активным (зеленый цвет). Чтобы

начать анализ, нажмите кнопку Start («Пуск») F4.

Контроль качества

Контроли QUANTA Flash ENA7 (приобретаются отдельно, артикул INOVA 701257) содержат

материалы для положительного и отрицательного контроля антител против ENA7. Подробные

инструкции по вводу всей необходимой информации для каждого контроля в программу и

указания по работе с контролями приводятся в разделе «Контроли QUANTA Flash

®

ENA7,

артикул 701257» данного листка-вкладыша. Рекомендуется использовать контроли один раз в

день каждый день проведения анализов. Однако следует соблюдать действующие указания

местных или государственных норм и правил.

Получение результатов

Для каждой новой серии реагента QUANTA Flash ENA7 специалистами INOVA составлена

специальная эталонная кривая по шести точкам. Эта четырехпараметрическая логистическая

кривая закодирована в штрих-коде каждого картриджа с реагентами. После калибровки картриджа

с реагентами рабочая кривая для конкретной машины будет использоваться для преобразования

относительных световых единиц (ОСЕ) в хемилюминесцентные единицы (ХЕ). Реакционная

способность антител против ENA7 определяется по приведенной ниже таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательная

<20

Положительность

≥20

7

Реакционная способность в единицах ХЕ приблизительно соответствует титру аутогенных антител

в образце сыворотки пациента.

Диапазон аналитических измерений (ДАИ) анализа находится в пределах от 3,6 ХЕ до 429,4 ХЕ.

Если результат, полученный для пациента, не превышает 3,6 ХЕ, анализатор ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH выдаст результат «<3,6 ХЕ». Поскольку этот результат меньше 20 ХЕ, он считается

отрицательным. Если результат, полученный для пациента, превышает 429,4 ХЕ, анализатор

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH выдаст результат «>429,4 ХЕ». Он будет считаться положительным.

Программное

обеспечение

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

имеет

функцию

автоматического

повторного анализа. Если выбрана эта опция, прибор автоматически повторит анализ для любого

образца, который имеет результат> 429,4 ЕД, дополнительно разбавив его в 20 раз, и вычислит

фактическое

значение

в

ХЕ

с

использованием

этого

дополнительного

коэффициента

разбавления; результат должен быть представлен как положительный результат.

Интерпретация результатов

Каждой лаборатории рекомендуется проверять предоставленный производителем референтный

диапазон и устанавливать свой собственный нормальный диапазон на основе своих собственных

контролей и популяции пациентов в соответствии со своими собственными установленными

процедурами.

Предполагается, что результаты, представленные лабораторией, должны включать следующие

сведения: «Указанные результаты были получены с помощью иммунохемилюминесцентного

анализа INOVA QUANTA Flash ENA7. Значения, полученные с помощью методов, разработанных

разными производителями, не являются взаимозаменяемыми».

Ограничения процедуры

1.

Не все пациенты с СКВ, ССД, СШ, ПМ или СЗСТ имеют положительный результат на

антитела против ENA7.

2.

Результаты этого анализа должны использоваться в сочетании с клиническими данными и

результатами других серологических исследований.

3.

Неправильное ресуспендирование шариков, покрытых ENA7, может привести к получению

более низких результатов, чем в случае правильного ресуспендирования.

4.

Рабочие

характеристики

этого

анализа

не

были

разработаны

для

других

образцов,

отличных от образцов сыворотки.

Прогнозируемые значения

Для установления ожидаемых значений были протестированы образцы сыворотки, полученные

от 196 практически здоровых доноров крови. Среднее значение составило <9,1 ХЕ, а 95%-ный

доверительный интервал – от 5,65 до 12,49 ХЕ.

Прослеживаемость

Отсутствуют какие-либо международные стандарты, регламентирующие уровень антител против

ENA

в

анализах

на

определение

уровней

антител

против

ENA7.

Вместо

этого

была

протестирована

панель

контрольных

сывороток

для

определения

антител

против

ENA,

полученная

из

Центра

по

контролю

и

профилактике

заболеваний;

полученные

значения

концентрации приводятся ниже.

8

Идентификаци-

онный номер

ЦКЗ

Идентификаци-

онный номер

INOVA

Результат

Ожидаемый результат ENA7

IS2072

CDC~ANA~1

Отрицательный

Флуоресценция ANA (гомог./ по периферии); анти-нативная ДНК

дцДНК)

IS2073

CDC~ANA~2

Положительный

Флуоресценция ANA (пятнистый тип свечения); антитела анти-SS-B/La

IS2074

CDC~ANA~3

Положительный

Флуоресценция ANA (пятнистый тип свечения)

IS2075

CDC~ANA~4

Положительный

Антитела анти-U1 RNP (ядерный RNP)

IS2076

CDC~ANA~5

Положительный

Антитела анти-Sm

IS2100

CDC~ANA~6

Отрицательный

Нуклеолярный тип свечения FANA; анти-фибрилларин (U3 RNP)

IS2105

CDC~ANA~7

Положительный

Антитела анти-SS-A/Ro

IS2134

CDC~ANA~8

Отрицательный

Центромерный тип свечения FANA

IS2135

CDC~ANA~9

Положительный

Антитела анти-Scl-70 (ДНК топосомераза I)

IS2187

CDC~ANA~10

Положительный

Антитела анти-Jo1 (гистидил-тРНК-синтетаза)

IS2310

CDC~ANA~11

Отрицательный

Антитела анти-PM/Scl

IS2706

CDC~ANA~12

Отрицательный

Антитела против рибосомальных белков

Клиническая чувствительность и специфичность

Клиническое валидационное исследование включало 261 образец пациентов с СКВ, 68 образцов

пациентов с ССД, 31 образец пациентов с ПМ, 13 образцов пациентов с дерматомиозитом (ДМ),

12 образцов пациентов с СЗСТ, 65 образцов пациентов с СШ и 102 образца пациентов с другими

заболеваниями соединительной ткани, а также 698 образцов контрольной группы заболеваний,

как указано ниже. Результаты проверки приводятся ниже:

Количество пациентов

(n = 1250)

СКВ, ССД, СШ, ПМ, ДМ, НДСТ,

СЗСТ

Процентная доля согласованных

результатов (ДИ 95 %)

Поло-

житель-

ный

Отрица-

тельный

Итого

ИХЛА QUANTA

Flash® ENA 7

Положи-

тельный

349

57

406

Чувствительность = 63,2 %

(59,0-67,3 %)

Отрица-

тельный

203

641

844

Специфичность = 91,8 %

(89,5-93,8 %)

Итого

552

698

1250

Клиническая чувствительность в целевой популяции

Клинически диагностированная когорта

n =

Кол-во

полож.

результатов

чувствитель

ность

Системная красная волчанка (СКВ)

261

166

63,6 %

Системная склеродермия (ССД)

68

39

57,4 %

Полимиозит (ПМ)

31

16

51,6 %

Дерматомиозит (ДМ)

13

7

53,8 %

Смешанное заболевание соединительной

ткани (СЗСТ)

12

10

83,3 %

Синдром Шегрена (СШ)

65

55

84,6 %

Прочие заболевания соединительной ткани*

102

56

54,9 %

Всего образцов с заболеваниями

соединительной ткани

552

349

63,2 %

*

Прочие

заболевания

соединительной

ткани:

недифференцированная

болезнь

соединительной

ткани

(74),

миозит

(9)

и

перекрестный синдром ПМ или ДМ (19)

9

Клиническая специфичность в целевой популяции

Образцы с заболеваниями, отличными от

заболеваний соединительной ткани

n =

Кол-во

полож.

результатов

Специ-

фичность

Ревматоидный артрит (РА)

132

10

92,4 %

Остеоартрит

50

2

96,0 %

Прочие артриты*

48

1

97,9 %

Первичный билиарный цирроз (ПБЦ)

52

10

80,8 %

Болезнь Крона

20

1

95,0 %

Язвенный колит

20

2

90,0 %

Тиреоидит Хашимото (ТХ)

21

1

95,2 %

Болезнь Грейвса (БГ)

21

0

100,0 %

ГПД (васкулит)

75

9

88,0 %

Первичный антифосфолипидный синдром

(PAPS)

52

11

78,8 %

Целиакия (ГЦ)

63

5

92,1 %

Аутоиммунный гепатит (АИГ)

50

5

90,0 %

Инфекционное заболевание

94

0

100,0 %

Общая численность контрольной группы

заболеваний

698

57

91,8 %

*

Прочие

артриты:

ревматическая

полимиалгия

(21),

псориатический

артрит

(14)

и

анкилозирующий

спондилит

(13)

† Инфекционные заболевания: гепатит B (36), гепатит C (44), вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) (7), сифилис (7)

Сравнение данного метода с аналогами

Для анализа методом сравнения использовалось 747 образцов из клинических валидационных

исследований. Исследование этих образцов производилось с использованием анализов QUANTA

Flash ENA7 и по аналогичному методу ELISA.

Сравнение методов

(N = 747)

QUANTA Lite

®

ENA6 ELISA

Процентная доля согласованных

результатов (ДИ 95 %)

Положи-

тельный

Отрица-

тельный

Итого

ИХЛА QUANTA

Flash

®

ENA7

Положи-

тельный

235

29

264

Соглас. полож. рез. = 91,1 %

(86,9-94,3 %)

Отрица-

тельный

23

460

483

Соглас. отриц. рез. = 94,1 %

(91,6-96,0 %)

Итого

258

489

747

Общ. соглас. = 93,0 %

(91,0-94,8 %)

Точность и воспроизводимость

Точность

анализа

QUANTA

Flash

ENA7

оценивалась

путем

обследования

8

пациентов

в

соответствии с требованиями CLSI EP12-A, и результаты этой оценки приводятся в следующей

таблице.

10

Образец

n

Среднее

значение

(ХЕ)

Ожидаемый

результат

Доля полож.

рез-тов. (%)

Доля отриц.

рез-тов. (%)

Диапазон

результатов (ХЕ)

Pt 1

80

7,9

Отрицатель-

ный

0 %

100 %

7,0-8,8

Pt 2

80

19,1

Отрицатель-

ный

37,5 %

62,5 %

16,1-21,4

Pt 3

80

19,8

Отрицатель-

ный

40,0 %

60,0 %

17,9-21,6

Pt 4

80

30,1

Положитель-

ный

100 %

0 %

20,6-33,1

Pt 5

80

42,9

Положитель-

ный

100 %

0 %

38,9-47,7

Pt 6

80

100,9

Положитель-

ный

100 %

0 %

91,2-115,2

Pt 7

80

207,8

Положитель-

ный

100 %

0 %

184,8-226,1

Pt 8

80

386,8

Положитель-

ный

100 %

0 %

352,9-429,4

Интерференционный тест

Образцы,

содержащие

до

10 мг/дл

билирубина,

200 мг/дл

гемоглобина,

1000 мг/дл

триглицеридов,

224 мг/дл

холестерина

и

500 МЕ/мл

ревматоидного

фактора

класса

IgM,

продемонстрировали интерференцию в размере <15 % при проведении анализа QUANTA Flash

ENA7.

1

Реагенты QUANTA Flash Ro52,

кат. № 701263

Для проведения диагностики In Vitro

Предназначенное использование

QUANTA Flash Ro52 – это иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА), предназначенный

для

полуколичественного

определения

анти-Ro52

(SS-A

52)

антител

в

сыворотке

крови

человека.

Наличие

антител

к

Ro52

может

использоваться

в

сочетании

с

клиническими

данными

и

другими

лабораторными

анализами

для

облегчения

диагностики

системной

красной волчанки, синдрома Шегрена, системного склероза, полимиозита и дерматомиозита.

Общее описание

Анти-Ro антитела (SS-A), которые впервые были описаны при системной красной волчанке

(СКВ)

и

синдроме

Шегрена

(СШ),

являются

наиболее

высокоспецифичными,

из

идентифицированных

лабораториями,

к

экстрагируемым

ядерным

антигенам

(ЭЯА).

1

Существует два типа анти-Ro антител: анти-Ro 52 кДа (SS-A 52) и анти-Ro 60 кДа (SS-A 60),

специфичные

к

разным

антигенам.

Исторически

сложилось,

что

эти

антитела

рассматривались

как

единая

система

аутоантител.

Однако,

недавние

исследования

свидетельствуют, что Ro60 и Ro52 не являются частью стабильного макромолекулярного

комплекса и, что анти-Ro52 и анти-Ro60 антитела ассоциированы с разными клиническими

проявлениями.

2

Ro52 антиген недавно был идентифицирован как белок TRIM21.

3

Ro52 аутоантитела часто присутствуют в сыворотке пациентов с СШ (40-70%) или СКВ (20-

40%).

Кроме

того,

анти-Ro

антитела

имеют

диагностическую

значимость

в

врожденной

блокаде сердца (ВБС). Изолированная врожденная полная атриовентрикулярная блокада

(ПАВБ) имеет тесную связь с материнскими анти-Ro и анти-SS-B (La) антителами; самые

высокий относительный риск ПАВБ наблюдаются в потомстве матерей с антителами к 52-кДа

Ro и 48-кДа SS-B белкам.

4

Антитела к Ro52 могут остаться незамеченными при обычно используемых серологических

методах для детекции Ro. Следует отметить, что отдельная реакционная активность Ro52

или Ro60 может быть не обнаружена при измерении классическим ИФА, основанном на смеси

обоих антигенов. Примерно 20% положительных образцов Ro52 или Ro60 могут оставаться

незамеченными с использованием смеси обоих антигенов.

2,5

Поэтому важно тестировать на

каждый из типов антител отдельно.

В то время как анти-Ro52 в основном присутствует вместе с анти-Ro60 у пациентов с СКВ и

СШ, высокая частота встречаемости анти-Ro52 отдельно была описана в случаях системного

склероза (СС), полимиозита (ПМ) и дерматомиозита (ДМ) пациентов.

5,7

Распространенность

анти-Ro52 при СС и миозите значительно выше, чем анти-Ro60. Было установлено, что

встречаемость анти-Ro52 равна 15-38% в исследовании включающем 1010 больных с СС.

5

В

подгруппах,

определенных

анти-Ro60

и

анти-аминоацил-тРНК

синтетазой,

анти-Ro52

присутствовал в 92% и 100 % соответственно. Изолированные анти-Ro52 (без анти-Ro60)

можно найти в до 20-37% больных миозитом. Тем не менее, в анти-Jo-1 положительных

сыворотках больных миозитом, частота встречаемости анти-Ro52 гораздо выше (58%). Кроме

того,

похоже,

что

сосуществование

анти-Ro52

и

анти-Jo-1

антител

является

прогнозом

относительно

тяжелого

поражения

легочной

ткани

при

воспалительных

миопатиях

пациентов.

8,9

Принципы метода

2

Очищенный рекомбинантный Ro52 антиген иммобилизован на поверхности парамагнитных

латексных микрочастиц, которые хранятся в картридже для реагентов в условиях, которые

позволяют антигену оставаться в реактивном состоянии. Когда картридж готов к первому

использованию, в пробирку, содержащую микрочастицы, добавляется буферный раствор и

содержимое перемешивается. Затем картридж с реагентами помещается в прибор ACUSTAR

И/ИЛИ BIO-FLASH

®

.

Образец сыворотки пациента предварительно разбавляется в приборе буферным раствором,

в

одноразовой

пластиковой

кювете.

Небольшое

количество

разбавленной

сыворотки

пациента,

Ro52-микрочастицы

и

буфер

для

анализа

помещаются

во

вторую

кювету

и

перемешиваются.

Смесь

инкубируется

при

температуре

37

C.

Затем

микрочастицы

намагничиваются

и

несколько

раз

промываются.

После

этого

человеческие

анти-IgG

антитела, конъюгированные с изолюминолом, добавляются в кювету и инкубируются при

температуре 37

C. Микрочастицы снова намагничиваются и несколько раз промываются.

Конъюгат c изолюминолом вызывает люминесцентную реакцию при добавлении реагентов

(«Триггеров») в кювету. Свечение, возникающее в результате этой реакции, измеряется в

относительных световых единицах (ОСЕ) посредством оптической системы ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH.

Результат,

выраженный

в

ОСЕ,

пропорционален

количеству

связанного

конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально количеству анти-Ro52

антител связанных с Ro52 антигеном на микрочастицах.

В

тесте

QUANTA

Flash

Ro52

используется

предварительно

определенная

обобщающая

кривая,

специфическая

для

каждой

серии,

которая

загружается

в

прибор

посредством

считывания штрих-кода, нанесенного на картридж с реагентами. На основании результатов

анализа

двух

калибраторов

строится

калибровочная

кривая

для

конкретного

прибора,

которая используется для расчета пересчета ОСЕ в хемилюминесцентные единицы (ХЕ) для

каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash Ro52, содержит следующие реагенты для

проведения 50 тестов:

a.

Парамагнитные

микрочастицы,

покрытые

Ro52,

законсервированные

до

первого использования

b.

Буфер для анализа – раствор розового цвета, содержащий забуференный Трис

солевой раствор, полисорбат Твин 20, стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Трейсер IgG – Человеческие анти-IgG антитела связанные с изолюминолом,

солевой раствор, стабилизаторы белка и консерванты

2.

Буфер для ресуспендирования, 1 флакон – раствор розового цвета, содержащий

буфер, стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

ВНИМАНИЕ!

Буфер

для

анализа

содержит

вещество

(0,02 %

хлорамфеникола),

которое по данным штата Калифорния (США) вызывает злокачественные опухоли.

2.

Азид натрия применяется в качестве консерванта. Азид натрия – яд и может быть

токсичен при принятии внутрь или при абсорбировании через кожу или глаза. Азид

натрия

может

реагировать

со

свинцовыми

или

медными

трубопроводами

и

образовывать

потенциально

взрывчатые

азиды

металлов.

Для

предотвращения

накопления азида в раковине, после утилизации реагентов, необходимо промыть

большим количеством воды.

3.

При

работе

с

данными

реагентами

необходимо

пользоваться

средствами

индивидуальной защиты.

4.

Необходимо незамедлительно убирать разлитые реагенты. При утилизации отходов

необходимо соблюдать все федеральные, государственные и местные экологические

нормы.

3

Меры предосторожности

1.

Настоящий продукт применяется для диагностики In Vitro.

2.

Данный тест предназначен только для использования в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH.

3.

Рекомендуется строго выполнять протокол ресуспендирования.

4.

После открытия картриджа с реагентами он должен храниться в карусели для

реагентов прибора. При первом помещении картриджа в прибор следует проявлять

осторожность, чтобы избежать проливания реагентов.

5.

Химическое загрязнение реагентов может быть результатом неправильной очистки

или промывания прибора. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как

формалин, отбеливатель, этанол или детергент могут повлиять на результаты теста.

Рекомендуемая процедура очистки прибора, указанная в руководстве пользователя

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, должна быть обязательно выполнена.

Условия хранения

1.

Картриджи с реагентами и буфер для ресуспендирования хранить до открывания при

температуре 2-8

C. Не замораживать. При надлежащем хранении и обращении

реагенты сохраняют стабильность до истечения срока годности.

2.

Открытые картриджи с реагентами должны храниться в приборе. Они сохраняют

стабильность в течение 20 дней, по истечении которых должны быть утилизированы.

Программное обеспечение контролирует даты истечения срока годности картриджей,

находящихся в приборе, а также серий картриджей с реагентами.

Сбор образцов

Данная

процедура

должна

осуществляться

с

образцом

сыворотки

крови.

Образцы,

загрязненные микроорганизмами, подвергшиеся термическому воздействию или содержащие

видимые

частицы,

не

должны

использоваться.

Не

допускается

использование

сильно

гемолизированной или желтушной сыворотки.

После сбора сыворотка должна быть отделена от сгустка. В документе H18-A3 Института

клинических и лабораторных стандартов (CLSI) рекомендуются следующие условия хранения

для образцов: 1) Образцы хранят при комнатной температуре не более 8 часов. 2) Если

анализ не будет завершен в течение 8 часов, образец необходимо поместить в холодильник

при температуре 2-8

C. 3) Если анализ не будет завершен в течение 48 часов, или если

образец необходимо транспортировать, он должен быть заморожен при -20

C или более

низкой

температуре.

Замороженные

образцы

должны

быть

хорошо

перемешаны

после

размораживания и до проведения анализа.

Процедура проведения теста

Предоставляемые материалы

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash Ro52

1

Буфера для ресуспендирования

1

Пипетка

Необходимые дополнительные материалы, не входящие

в комплект поставки

Прибор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH с компьютерным модулем

Промывочный раствор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

4

Калибраторы QUANTA Flash Ro52 (номер детали: 701261)

Контроли QUANTA Flash Ro52 (номер детали: 701262)

Использование хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с хемилюминесцентным анализатором ACUSTAR И/

ИЛИ BIO-FLASH и программным обеспечением изложены в руководстве пользователя,

поставляемом с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH. Для получения

дополнительной информации и устранения неполадок, связанных с данным тестом,

обратитесь в службу технической поддержки компании INOVA Diagnostics, Inc. по

адресу или телефону, указанному в конце этого вкладыша.

2.

Чтобы очистить контейнер для твердых отходов, следует открыть отсек для отходов.

Извлечь контейнер для твердых отходов и утилизировать его должным образом.

Заменить контейнер для твердых отходов, закрыть отсек для отходов и нажать «Yes» в

окне «Empty Waste Drawer».

3.

Для замены триггеров нужно нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (вверху справа).

a.

На экране «Inventory – Bulks»

нажать кнопку «Triggers»

слева. Появится новое

окно с названием «Add Triggers – Remove old bottles».

b.

Открыть и извлечь отсек для отходов в приборе ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Утилизировать все кюветы в отсеке для сухих отходов. Нажать «Yes» в окне

«Empty Waste Drawer» . Извлечь триггерные флаконы из зажимов и нажать кнопку

«Next». Открутить крышки старых флаконов с триггерами и установить их на

новые. Крышки следует заменять поочередно, следя за совпадением цветовой

маркировки (белая к белому и красная к красному).

c.

Далее следовать инструкциям в новом окне «Add Triggers – Add Trigger 2 bottle».

После принятия штрих-кода поместить Триггер 2 в белый штатив, на который

нанесена цветная маркировка. Нажать кнопку «Next».

d.

Далее следовать инструкциям в окне «Add Triggers – Add Trigger 1 bottle». После

принятия штрих-кода поместить Триггер 1 в красный штатив, на который нанесена

цветная маркировка. Нажать «Finish». Заменить и закрыть отсек для отходов.

4.

Чтобы заменить контейнер с ополаскивателем системы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH,

следует нажать кнопку «Bulks Inventory F9» (в верхнем правом углу). На экране

«Inventory – Bulks» нажать кнопку «Sys. Rinse». В новом окне «Add System Rinse –

Remove bottles» нажать «Next». Далее следовать инструкциям в новом окне «Add

System Rinse – Add bottle». После принятия штрих-кода нажать «Finish», если

необходимо.

5.

Чтобы очистить контейнер для жидких отходов, на экране «Inventory – Bulks» следует

нажать кнопку «Fluid Waste». Извлечь и утилизировать жидкие отходы. Нажать кнопку

«Next». После замены пустого флакона нажать «Finish».

Метод

Приготовление картриджа с реагентами

При первом использовании картриджа, для правильной установки картриджа в анализатор

ACUSTAR и/или BIO-FLASH, необходимо следовать следующим шагам. Обратите внимание:

Не используйте картридж, если вы заметили какие-либо повреждения.

1.

Поместить

картридж

с

реагентами

на

твердую

поверхность.

Картридж

с

реагентами

необходимо

удерживать

одной

рукой.

Второй

рукой

крепко

взяться

за

красный

язычок

на

задней

стороне

5

картриджа

с

реагентами

и

полностью

вытащить его.

2.

Нажать

на

два

фиксатора

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(серая

часть)

и

надавить

на

верхнюю

часть

картриджа

с

реагентами, пока он не окажется в закрытом

положении. Язычки больше не должны быть

видны.

3.

Ресуспендировать Ro52 микрочастицы:

a.

Открыть

флакон

с

буфером

для

ресуспендирования

и

забрать

жидкость

из

него

в

прилагаемую

пипетку.

Необходимо

использовать

все содержимое флакона.

b.

Отодвинуть

крышку

картриджа

с

реагентами,

слегка

нажав

на

узкую

сторону

картриджа

с

реагентами

и

зафиксировать ее в этом положении.

Аналитически

перенести

все

содержимое

флакона

в

пробирку

c

микрочастицами через единственное

отверстие в верхней части картриджа

с реагентами.

c.

Перемешать содержимое пробирки с

реагентами,

забирая

и

выпуская

жидкость

не

менее

30

раз.

Если

видны

скопления

микрочастиц,

раствор необходимо перемешать еще

30

раз.

Если

микрочастицы

не

ресуспендируются,

НЕ

ИСПОЛЬЗУЙТЕ

ДАННЫЙ

КАРТРИДЖ.

d.

До

извлечения

из

пробирки

и

утилизации

пипетки

следует

убедиться в том, что из нее выпущена

вся жидкость.

4.

Отклеить наклейку с верхней части картриджа для реагентов, чтобы открыть три

другие отверстия.

5.

Поместить картридж с реагентами в любой свободный слот карусели для реагентов

прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

Калибровка теста

1.

Каждая новая серия картриджа с реагентами должна быть откалибрована до первого

использования. Программное обеспечение не позволит использовать новую серию,

пока она не будет откалибрована.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами см. в разделе QUANTA

Flash

®

Ro52 Калибраторы 701261 данного вкладыша.

3.

После

подтверждения

правильности

калибровки

лот

картриджа

с

реагентами,

на

которой проводили калибровку, готова к использованию.

Программирование и анализ образцов

6

1.

Нажать кнопку «Worklist» в верхней части экрана и выбрать вкладку «Racks» внизу.

2.

Выбрать стойку для образцов, которая будет использоваться, выделив ее на экране

или

путем

сканирования

штрих-кода

портативным

считывателем

штрих-кодов.

Сканировать или набрать название образца, выбрать тип образца, тип контейнера

(пробирка/чашка) и выбрать Ro52 из панели тестов. Повторить эти шаги для всех

образцов.

3.

Поместить образцы в выбранные положения в стойке для образцов и установить

стойку для образцов в карусель прибора.

4.

Если все необходимые материалы находятся в приборе, значок запуска вверху экрана

станет зеленым, что сигнализирует о готовности к запуску. Нажать на значок «Start

F4», чтобы запустить тест.

Контроль качества

Контрольные материалы QUANTA Flash Ro52 (продаются отдельно - номер детали INOVA

701262) содержат положительный и отрицательный контроли Ro52. Подробные инструкции о

том,

как

вводить

единичное

значение

и

стандартное

отклонение

каждого

контроля

в

программу, а также по выполнению контроля см. в разделе QUANTA Flash

®

Ro52 Контроли

701262 данного вкладыша. Контрольные пробы рекомендуется анализировать один раз в

каждый день проведения анализа.

Расчет результатов

Для каждой новой серии QUANTA Flash Ro52 рассчитана пятиточечная обобщающая кривая.

Данная четырехпараметрическая логистическая кривая зашифрована в штрих-коде каждого

картриджа с реагентами. После калибровки картриджа с реагентами преобразование ОСЕ в

ХЕ

осуществляется

при

помощи

калибровочной

кривой,

специфичной

для

конкретного

устройства.

После этого реактивность антител к Ro52 можно классифицировать согласно

приведенной ниже таблице.

Реактивность образца

ХЕ

Отрицательный

<20

Положительный

≥30

Реактивность,

выраженная

в

ХЕ,

непосредственно

связана

с титром

аутоантител

в

образце

пациента.

Увеличение

и уменьшение

концентрации

антител

у

пациента

будет

отражено

в

с о о т в е т с т в у ю щ е м

п о в ы ш е н и и

и л и

с н и ж е н и и

Х Е ,

к о л и ч е с т в о

к о т о р ы х

пропорционально

концентрации антител.

Регистрируемый диапазон теста составляет от 2,3 ХЕ до 1685,3 ХЕ. Если результат пациента

будет менее 2,3 ХЕ, то система ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH отобразит его в виде «<2,3 CU».

Поскольку это значение меньше 20 ХЕ, его считают отрицательным результатом. Если

результат

пациента

будет

больше

1685,3

ХЕ,

система

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

отобразит

его

в

виде

«>1685,3

CU».

Этот

результат

считается

положительным.

В

программном обеспечении есть опция «Auto-Rerun» (Автоматический повторный анализ).

Если эта опция выбрана, прибор будет автоматически производить повторный анализ любого

образца, результат которого превышает 1685,3 ХЕ, путем дополнительного разведения его в

10

раз.

Фактическое

значение

в

ХЕ

будет

рассчитано

с

учетом

дополнительного

коэффициента разведения.

7

Интерпретация результатов

Результаты

теста

QUANTA Flash

могут

иметь

небольшие

различия

между

популяциями

пациентов. Для каждой лаборатории рекомендуется подтверждать нормальный диапазон,

указанный

производителем.

Также,

лаборатория

может

установить

свой

собственный

нормальный диапазон на основании собственных контролей и популяции пациентов согласно

процедурам, установленным самими лабораториями.

Предполагается,

что

результаты,

полученные

лабораторией,

должны

включать

в

себя

следующее

утверждение:

«Данные

результаты

получены

с

помощью

иммунохемилюминесцентного теста INOVA QUANTA Flash Ro52. Значения, полученные с

помощью

тестов

разных

производителей,

не

могут

использоваться

взаимозаменяемо.

Указанные

значения

содержания

аутоантител

не всегда

соотносятся

с

титром конечной

точки».

Ограничения методики

1.

Не

все

пациенты,

страдающие

СКВ,

СШ,

СС,

и

аутоиммунным

миозитом

положительны к Ro52 антителам

2.

Результаты данного теста следует использовать вместе с клинической картиной и

другими серологическими тестами.

3.

Недостаточное ресуспендирование Ro52 микрочастиц может привести к получению

меньших значений, чем при должном ресуспендировании.

4.

Технические характеристики данного теста были установлены только для сыворотки

крови.

Ожидаемые значения

Пороговое значение было установлено путем тестирования 155 референсных образцов. 115

из них от здоровых доноров (15 мужчин/100 женщин, 19-69 лет), 8 образцов положительных

по вирусу гепатита (6 мужчин/2 женщины, 19-44 года), 5 положительных по сифилису (1

мужчина/4 женщины, 27-57 лет), 5 положительных на ВИЧ (4 мужчины/1 женщина, 28-51 год),

и 22 RA образцов (данные о поле/возрасте отсутствуют На основе полученных результатов

референсных

образцов

было

установлено

пороговое

значение

равное

20

ХЕ

(>98

перцентиля).

Клиническая чувствительность и специфичность

Было проведено клиническое исследование с использованием 289 образцов, из которых: 81

пациент с СКВ, 24 с СШ, 48 с СС, и 40 пациентов с аутоиммунным миозитом. В качестве

контроля,

мы

включили

50

пациентов

в

ревматоидным

артритом,

20

пациентов

с

аутоиммунным

тиреоидитом,

11

пациентов

с

целиакией,

и

15

пациентов

с

различными

инфекционными заболеваниями. Клиническая чувствительность и специфичность для СШ

(n=24), СКВ (n=81), СС (n=48) и аутоиммунного миозита, используя контрольную популяцию

(n=96) рассчитаны в нижеследующих четырех таблицах:

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro52 при СШ:

Клинический анализ

n = 120

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СШ

Нет СШ

Всего

QUANTA

Flash

Ro52

Положительных

14

3

17

Чувствительность = 58,3%

(36,6-77,9%)

Отрицательных

10

93

103

Специфичность

=

96,9%

(91,1-99,4%)

Всего

24

96

120

8

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro52 при СКВ:

Клинический анализ

n = 177

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СКВ

Нет СКВ

Всего

QUANTA

Flash

Ro52

Положительных

36

3

39

Чувствительность = 44,4%

(33,4-55,9%)

Отрицательных

45

93

138

Специфичность = 96,9%

(91,1-99,4%)

Всего

81

96

177

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro52 при СС:

Клинический анализ

n = 177

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

СС

Нет СС

Всего

QUANTA

Flash

Ro52

Положительных

6

3

9

Чувствительность = 12,5%

(4,7-25,2%)

Отрицательных

42

93

135

Специфичность = 96,9%

(91,1-99,4%)

Всего

48

96

144

Клиническая чувствительность и специфичность QUANTA Flash Ro52 при аутоиммунном

миозите (АИМ):

Клинический анализ

n = 177

Диагноз

Анализ

(95% достоверность)

АИМ

Нет АИМ

Всего

QUANTA

Flash

Ro52

Положительных

14

3

17

Чувствительность = 35,0%

(20,6-51,7%)

Отрицательных

26

93

119

Специфичность = 96,9%

(91,1-99,4%)

Всего

40

96

136

Сходимость и воспроизводимость

Сходимость

теста

QUANTA

Flash

Ro52

была

оценена

с

использованием

6

образцов

сыворотки,

в

соответствии

с

руководством

EP5-A2

CLSI.

Результаты

исследования

представлены ниже:

В одном тесте

Между

тестами

В разные

дни

Всего

Образец

N

Среднее

значение

(ХЕ)

СО

КВ, %

СО

КВ,

%

СО

КВ,

%

СО

КВ, %

1

84

13.43

0.56

4.1

0.29

2.2

1.55

11.6

1.68

12.5

2

84

21.36

0.90

4.2

0.42

2.0

2.26

10.6

2.47

11.5

3

84

61.56

2.86

4.6

1.39

2.3

5.12

8.3

6.03

9.8

4

84

144.15

9.49

6.6

0.00

0.0

14.16

9.8

17.04

11.8

5

88

275.83

16.62

6.0

0.00

0.0

25.67

9.3

30.58

11.1

6

80

820.46

56.42

6.9

33.78

4.1

51.26

6.2

83.37

10.2

9

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

Регистрируемый диапазон (РД) составляет от 2,3 ХЕ 1685,3 ХЕ. Предел обнаружения данного

теста равен 668,9 ОСЕ, что ниже РД теста (2.3 ХЕ). В соответствии с руководством CLSI

EP17-А, пропорция ложноположительных результатов (α) менее 5% и ложноотрицательных

(β) менее 5%.

Весь РД, с 2,3 ХЕ до 1685,3 ХЕ является линейным. Исследование на линейность проводили

в

соответствии

с

CLSI

EP6-A

с

использованием

6

образцов

сыворотки

с

различными

концентрациями анти-Ro52. Все шесть образцов показали индивидуальную линейность при

разбавлении,

и

после

объединения

данных,

были

получены

следующие

результаты

с

линейной регрессией:

Образец

Диапазон теста

(ХЕ)

Отклонение (95%

доверительный

интервал)

Y – точка пересечения

с осью ординат (95 %

доверительный

интервал)

Все

образцы

0.6 to 1758.6

1.03 (1.02 to 1.04)

3.61 (-0.86 to 8.08)

1.00

Пределы обнаружения; линейные и регистрируемые диапазоны

Интерференции не было обнаружено: гемоглобин до 200 мг/дл, триглицериды до 1000 мг/дл

холестерин до 224,3 мг/дл, билирубин до 10 мг/дл и РФ IgM до 500 МЕ/мл.

Девяносто шесть образцов от пациентов с различными аутоиммунными и инфекционными

заболеваниями было обследовано на перекрестную реактивность. Один образец от пациента

с

вирусным

гепатитом,

и

два

образца

от

пациентов

с

ревматоидным

артритом

были

положительными на Quanta флэш Ro52.

Сравнение метода с устройством-образцом

Образцы

для

сравнения

метода

включали

в

себя

образцы

клинических

валидационных

исследований (пациенты с СШ, СС, СКВ, аутоиммунным миозитом, контроли с другими

заболеваниями, и здоровые доноры крови), которые находились в пределах регистрируемого

диапазона теста. Эти образцы были проанализированы с помощью теста QUANTA Flash Ro52

и эталонного твердофазного ИФА. Данные представлены в таблице:

Сравнение методов

(N=62)

Ro52 ELISA

Анализ

(95% достоверность)

Отриц.

Положит.

Всего

QUANTA

Flash

Ro52

Отрицательных

40

2

42

Положительное согласование =

90.0% (68.3 – 98.8%)

Положительных

2

18

20

Отрицательное согласование =

95.2% (83.8 – 99.4%)

Всего

42

20

62

Общее согласование = 93.5%

(84.3 – 98.2%)

1

Реагенты QUANTA Flash LKM-1,

кат. № 701298

Для диагностики In Vitro. Уровень сложности по закону CLIA: Умеренный

701298

Назначение

QUANTA

Flash

LKM-1

представляет

собой

иммунохемилюминесцентный

анализ,

предназначенный для полуколичественного определения уровня антител класса IgG против

печеночных/почечных микросом типа 1 в сыворотке крови человека. Наличие антител против

печеночных/почечных микросом типа 1 в сочетании с результатами клинических обследований и

других лабораторных анализов способствует диагностике аутоиммунного гепатита 2 типа.

Сводная информация и описание процедуры анализа

Аутоиммунный

гепатит

(АИГ)

это

прогрессирующее

хроническое

заболевание

печени

неизвестной

этиологии,

характеризующееся

перипортальным

воспалением

в

печени,

повышенными иммуноглобулинами и аутоантителами.

1-3

Аутоиммунный гепатит 1-го типа (АИГ-1)

является наиболее распространенным типом АИГ и характеризуются наличием антиядерных

антител (ANA) и (или) реакционной способности антител к клеткам гладкой мускулатуры (SMA) и

актиновых антигенов. Аутоиммунный гепатит типа 2 (АИГ-2) связан с наличием антител против

печеночных/почечных

микросом (LKM-1). Реакционная способность LKM-1 характеризуется окрашиванием цитоплазмы

гепатоцитов и проксимальных, но не дистальных канальцев почек на срезах ткани почек и печени

грызунов методом непрямой иммунофлюоресценции. В качестве основного антигена-мишени

антител

LKM-1

был

идентифицирован

цитохром

P450

2D6,

микросомальный

белок,

обнаруженный в эндоплазматическом ретикулуме.

1-3

Антитела против LKM-1 также были зарегистрированы у пациентов с хроническим вирусом

гепатита С (ВГС).

4,5

Вирусный гепатит, в частности ВГС, должен быть исключен для диагностики

АИГ-2.

Помимо антител к LKM-1, у некоторых пациентов с АИГ-2 также могут обнаруживаться антитела

против уридиндифосфатглюкоронозилтрансфераз (LKM-3) (также ассоциированные с гепатитом

D) и антитела против цитозола печени типа 1 (LC1) или антитела против растворимого антигена

печени/печени и поджелудочной железы (анти-SLA/LP).

6

Принципы процедуры анализа

Рекомбинантный антиген цитохрома P450 2D6 (LKM-1) наносится на парамагнитные шарики,

которые хранятся в картридже с реагентами в лиофилизированном состоянии. Когда картридж

для анализа готов к первому использованию, в пробирку, содержащую шарики, добавляется

буферный раствор для ресуспендирования шариков. Затем картридж с реагентами загружается в

анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

В приборе в одноразовой пластиковой кювете образец сыворотки крови пациента разбавляется в

соотношении 1:23 с использованием промывочного раствора. Аликвота разведенной сыворотки

пациента, шарики со связанным LKM-1 и аналитический буферный раствор помещаются во

вторую кювету и перемешиваются. Эта кювета подвергается инкубации при температуре 37 °C.

После этого шарики намагничиваются и несколько раз промываются. Затем в кювету добавляется

антитело против IgG человека, после чего происходит инкубация при температуре 37 °C. После

этого шарики снова намагничиваются и несколько раз промываются. При добавлении в кювету

реагентов-триггеров конъюгат изолиминола вызывает люминесцентную реакцию. Излучаемый в

результате этой реакции свет измеряется оптической системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH в

относительных

световых

единицах

(ОСЕ).

Интенсивность

света

в

ОСЕ

пропорциональна

REF

Rx Only

2

количеству связанного конъюгата изолюминола, которое, в свою очередь, пропорционально

количеству антител против LKM-1, связанных с антигеном на шариках.

Для анализа QUANTA Flash LKM-1 используется заранее заданная, специфическая для каждой

партии

обобщенная

кривая,

которая

загружается

в

прибор

через

штрихкод

картриджа

с

реагентами. На основании результатов, полученных при использовании калибровочных образцов,

строится

рабочая

кривая

для

конкретного

прибора,

которая

используется

программным

обеспечением для расчета значения, выражаемого в хемилюминесцентных единицах (ХЕ), по

значению, выраженному в относительных световых единицах (ОСЕ) для каждого образца.

Реагенты

1.

Картридж с реагентами QUANTA Flash LKM-1 содержит следующие реагенты для 50

анализов:

a.

Парамагнитные шарики, покрытые LKM-1, лиофилизированные.

b.

Аналитический

буферный

раствор

флакон

розового

цвета,

содержащий

стабилизаторы белка и консерванты.

c.

Индикатор

IgG

антитело

против

IgG

человека,

меченное

изолуминолом:

содержит буферный раствор, белковые стабилизаторы и консервант.

2.

Буферный раствор для ресуспендирования – бесцветный флакон, содержащий буферный

раствор, стабилизаторы белка и консерванты.

Предупреждения

1.

В качестве консерванта используется азид натрия. Азид натрия ядовит и может оказывать

токсичное воздействие на организм при попадании на кожу или в глаза. Азид натрия

может

вступать

в

реакцию

с

свинцовыми

или

медными

трубами

с

образованием

потенциально взрывоопасных азидов металлов. Чтобы предотвратить накопление азидов,

тщательно

промойте

раковины,

используемые

для

утилизации

реагентов,

большим

количеством воды.

2.

При

работе

с

имеющимися

реагентами

используйте

соответствующие

средства

индивидуальной защиты.

3.

В случае утечки реагентов необходимо немедленно произвести очистку. Соблюдайте все

действующие федеральные, государственные и местные нормы и правила по утилизации

отходов.

Меры предосторожности

1.

Продукт предназначен для диагностики In Vitro.

2.

Продукт предназначен только для работы с анализатором ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH®.

3.

Необходимо строго соблюдать протокол ресуспендирования.

4.

После вскрытия картридж с реагентами должен храниться на карусельном штативе для

реагентов. Соблюдайте осторожность и оберегайте реагенты от случайной утечки при

первой установке картриджа с реагентами в анализатор.

5.

В результате неправильной чистки или промывки анализатора возможно химическое

загрязнение реагентов. Остатки обычных лабораторных химикатов, таких как формалин,

отбеливатель,

этанол

или

моющее

средство,

могут

создавать

помехи

при

работе

прибора-анализатора. Строго соблюдайте рекомендуемую процедуру чистки, описанную

в руководстве по эксплуатации анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

3

Условия хранения

1.

Невскрытые картриджи с реагентами и буферным раствором для ресуспендирования

следует хранить при температуре 2-8 °C. Не замораживать! При условии соблюдения

требований к хранению и обращению реагенты сохраняют стабильность до истечения

срока годности.

2.

Вскрытые

картриджи

с

реагентами

следует

хранить

в

анализаторе.

Программное

обеспечение

анализатора

контролирует

срок

годности

реагентов,

находящихся

в

анализаторе во время их использования, и общий срок годности (дату окончания срока

годности) серии, указанной на картридже с реагентами. Система не будет работать с

картриджами, срок годности которых истек.

Сбор образцов, приготовление и хранение

Ниже описана процедура, выполняемая с образцами сыворотки. Категорически запрещается

использовать

образцы,

загрязненные

микроорганизмами,

образцы,

прошедшие

термическую

обработку, или образцы, содержащие видимые частицы примесей. Образцы, содержащие до

1 мг/дл билирубина, 2 мг/мл гемоглобина, 1000 мг/дл триглицеридов, 332,5 мг/дл холестерина,

35 мг/мл IgG,

0,3 мг/л

преднизона,

2,99 мг/л

азатиоприна,

0,33 мг/л

интерферона

альфа

или

153,4 МЕ/мл

ревматоидного фактора класса IgM не создают помех при проведении анализа QUANTA Flash

LKM-1.

После сбора образцы сыворотки должны быть отделены от сгустков крови. Образцы

рекомендуется хранить в следующих условиях:

1.

Образцы могут храниться при комнатной температуре в течение максимум 48 часов.

2.

Образцы могут храниться при температуре 2-8 °C в течение максимум 14 дней.

3.

Если анализ не будет завершен в течение 14 дней, или если планируется транспортировка

образца, образцы следует заморозить до температуры

-20 °C или ниже. Образцы могут замораживаться с последующим размораживанием до

3 раз. После размораживания, перед проведением анализа, замороженные образцы

следует тщательно перемешать.

Описание процедуры

Комплект поставки

1

Картридж с реагентами QUANTA Flash LKM-1

1

Буферный раствор для ресуспендирования 7

1

Пипетка для переноса жидкости

Необходимые дополнительные материалы, не входящие в

комплект поставки

Анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH, подключенный к персональному компьютеру

Раствор для промывки гидравлической системы анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Растворы-триггеры ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Кюветы ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

Калибровочные образцы QUANTA Flash LKM-1 (артикул: 701296)

Контроли QUANTA Flash LKM-1 (артикул: 701297)

4

Применение хемилюминесцентного анализатора

ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH

1.

Подробные инструкции по работе с системой ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH приводятся в

руководстве по эксплуатации хемилюминесцентного анализатора ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH и в руководстве по программному обеспечению для анализатора. Для

получения

дополнительной

информации

и

устранения

неполадок,

связанных

с

анализом, обратитесь в техническую службу Inova Diagnostics, Inc. по адресу или

номеру телефона, указанному в конце данного листка-вкладыша.

2.

Чтобы опорожнить контейнер для твердых отходов, откройте ящик для отходов. Удалите

контейнер для твердых отходов и утилизируйте использованные кюветы надлежащим

образом. Замените контейнер для твердых отходов, закройте ящик для отходов и нажмите

кнопку Yes («Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнение ящика для отходов»).

3.

Чтобы заменить реагенты-триггеры, нажмите кнопку Bulks Inventory (F9) («Инвентарь –

Бестарный») (вверху справа).

a.

В окне Inventory – Bulks («Инвентарь – Бестарный») нажмите кнопку Triggers

(«Триггеры») слева. Откроется новое всплывающее окно Add Triggers – Remove old

bottles («Добавить триггеры – Удалить старые флаконы»).

b.

Откройте ящик для отходов и удалите отходы из прибора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH. Утилизируйте все кюветы, находящиеся в ящике для сухих отходов. Нажмите

кнопку Yes («Да») в окне Empty Waste Drawer («Опорожнить ящик для отходов»).

Удалите флаконы из-под раствора-триггера из держателей и нажмите кнопку Next

(«Далее»).

Отвинтите

колпачки

от

старых

флаконов

для

растворов-триггеров

и

установите новые флаконы с растворами-триггерами. Выполняйте эту операцию для

каждого флакона по отдельности, соблюдая цветовую кодировку колпачков (белый

колпачок к белому флакону, красный – к красному).

c.

Следуйте инструкциям, выводимым в новом окне Add Triggers – Add Trigger 2 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 2»). После считывания и

проверки штрихкода поместите флакон с триггером 2 в держатель белого цвета.

Нажмите кнопку Next («Далее»).

d.

Следуйте инструкциям, выводимым в окне Add Triggers – Add Trigger 1 bottle

(«Добавить триггеры – Добавить флакон с триггером 1»). После считывания и

проверки штрихкода поместите флакон с триггером 1 в держатель красного цвета.

Нажмите кнопку Finish («Готово»). Установите ящик для отходов на место и закройте

его.

4.

Чтобы заменить контейнер для промывочного раствора Bulks Inventory (F9) («Инвентарь

– Бестарный») (в верхнем правом углу). В окне Inventory – Bulks («Инвентарь –

Бестарный») нажмите кнопку Sys. Rinse («Промывочный раствор»). В новом окне Add

System

Rinse

Remove

bottles

(«Добавить

раствор

для

промывки

удалить

флаконы») нажмите кнопку Next («Далее»). Следуйте инструкциям, выводимым в новом

окне Add System Rinse – Add bottle («Добавить промывочный раствор – Добавить

флакон»). После считывания и проверки штрихкода, если требуется, нажмите кнопку

Finish («Готово»).

5.

Чтобы опорожнить контейнер для жидких отходов, в окне Inventory – Bulks («Инвентарь

– Бестарный») нажмите кнопку Fluid Waste («Жидкие отходы»). Удалите жидкие отходы

и

утилизируйте

их

надлежащим

образом.

Нажмите

кнопку

Next

(«Далее»).

После

установки пустого флакона на место нажмите кнопку Finish («Готово»).

5

Описание методики анализа

Подготовка картриджа с реагентами

Перед первым использованием картриджа с реагентами необходимо тщательно соблюсти все

описанные ниже указания по правильной установке картриджа в анализатор ACUSTAR И/ИЛИ

BIO-FLASH. Примечание: Запрещается использовать картридж, имеющий признаки повреждения.

1.

Поместите картридж с реагентами на твердую

поверхность.

Придерживайте

его

рукой.

Второй

рукой

потяните

за

красный

язычок,

расположенный

в

задней

части

корпуса

картриджа, и достаньте его полностью.

2.

Нажав

на

два

выступа

по

бокам

прокалывающего

колпачка

(деталь

серого

цвета), надавите на верхнюю часть картриджа

с

реагентами

таким

образом,

чтобы

он

опустился вниз и зафиксировался до щелчка.

Теперь эти выступы больше не будут видны.

ЗАПРЕЩАЕТСЯ

ПЕРЕВОРАЧИВАТЬ

ВСКРЫТЫЙ КАРТРИДЖ!

3.

Ресуспендирование микрочастиц с LKM-1:

a.

Снимите

колпачок

с

флакона

с

буферным

раствором

для

ресуспендирования

и

наберите

жидкость

в

пипетку,

входящую

в

комплект

поставки.

Следует

использовать

все

содержимое

флакона.

b.

Сдвиньте

крышку

картриджа

с

реагентами

в

открытое

положение,

слегка нажав на узкую часть картриджа

с реагентами, и удерживайте ее в этом

положении. Аккуратно перенесите все

содержимое

флакона

в

пробирку

с

реагентом

с

микрочастицами

через

единственное

отверстие

в

верхней

части картриджа с реагентами.

c.

Перемешайте содержимое пробирки с

реагентом с микрочастицами, всасывая

и

выпуская

жидкость

из

пипетки

не

менее

30

раз

подряд.

Если

после

перемешивания

наблюдаются

сгустки

шариков, продолжайте перемешивание

раствора еще не менее

30 раз. Если суспензия из микрочастиц

не

образовалась,

КАРТРИДЖ

ИСПОЛЬЗОВАТЬ НЕЛЬЗЯ!

d.

Перед

извлечением

пипетки

из

пробирки

используйте

всю

жидкость.

После этого утилизируйте пипетку.

4.

Снимите наклейку с верхней части картриджа с реагентами, открыв еще три отверстия.

5.

Поместите

картридж

с

реагентами

в

открытое

гнездо

на

карусельном

штативе

анализатора ACUSTAR И/ИЛИ BIO-FLASH.

6

Калибровка перед началом анализа

1.

Перед первым применением новой серии картриджей с реагентами следует произвести

калибровку. Программное обеспечение не допустит новую серию реагентов к работе без

калибровки.

2.

Подробные инструкции по калибровке картриджа с реагентами приводятся в разделе

«Калибровочные образцы QUANTA Flash

®

LKM-1, артикул 701296» данного листка-

вкладыша.

3.

После валидации калибровки картридж с реагентами, прошедший калибровку, готов к

работе.

Программирование и введение образцов

1.

Нажмите кнопку Worklist («Рабочий список») в верхней части окна и выберите вкладку

Racks («Стойки») в нижней части окна.

2.

Выберите нужную стойку для образца, выделив его на экране или путем считывания ее

штрихкода специальным ручным считывателем. Отсканируйте или введите с клавиатуры

название

образца,

выберите

тип

образца

(пробирка/чашка)

и

выберите

на

панели

анализов опцию «LKM-1». Повторите эти действия для всех образцов.

3.

Загрузите образцы в выбранные гнезда на стойке для образцов, а затем вставьте стойку в

карусельный штатив анализатора.

4.

После того как все требуемые материалы будут помещены в анализатор, армяк запуска

анализа в верхней части экрана компьютера станет активным (зеленый цвет). Чтобы

начать анализ, нажмите кнопку Start («Пуск») F4.

Контроль качества

Контроли QUANTA Flash LKM-1 (приобретаются отдельно, артикул Inova 701297) содержат

материалы для положительного и отрицательного контроля антител против LKM-1. Подробные

инструкции по вводу всей необходимой информации для каждого контроля в программу и

указания по работе с контролями приводятся в разделе «Контроли QUANTA Flash

®

LKM-1,

артикул 701297» данного листка-вкладыша. Рекомендуется использовать контроли один раз в

день каждый день проведения анализов. Однако следует соблюдать действующие указания

местных или государственных норм и правил.

Получение результатов

Для каждой новой серии реагента QUANTA Flash LKM-1 составлена специальная эталонная

кривая. Параметры этой кривой закодированы в штрихкоде, который нанесен на корпусе каждого

картриджа

с

реагентами.

При

калибровке,

на

основании

эталонной

кривой

строится

индивидуальная рабочая кривая для каждого анализатора. Она используется для перевода

значений из относительных световых единиц (ОСЕ) в хемилюминесцентные единицы (ХЕ).

Реакционная способность антитела к LKM-1 определяется по приведенной ниже таблице.

Реакционная способность

ХЕ

Отрицательная

<20

Положительность

≥20

Реакционная способность в единицах ХЕ прямо пропорциональна титру аутогенных антител в

образце сыворотки пациента. Увеличение или уменьшение концентрации аутогенных антител в

сыворотке пациента отражается соответствующим увеличением или уменьшением значения в

единицах ХЕ, пропорционального количеству антител.

Диапазон аналитических измерений (ДАИ) анализа находится в пределах от 1,6 до 400,0 ХЕ. Если

результат, полученный для пациента, не превышает 1,6 ХЕ, анализатор ACUSTAR И/ИЛИ BIO-

FLASH выдаст результат «<1,6 ХЕ». Поскольку этот результат меньше 20 ХЕ, он считается

отрицательным. Если результат, полученный для пациента, превышает 400,0 ХЕ, анализатор

ACUSTAR

И/ИЛИ

BIO-FLASH

выдаст

результат

«>400,0

ХЕ».

Он

будет

считаться

положительным. Программное обеспечение имеет функцию автоматического

7

повторного анализа. При выборе этой функции анализатор выполнит автоматический повтор

анализа любого образца, для которого ранее был получен результат «>400,0 ХЕ»; анализ данного

образца будет повторно проведен после дополнительного 20-кратного разведения, что позволит

перенести измеряемое значение в пределы ДАИ. Затем программа выдаст окончательный

результат с учетом коэффициента дополнительного разведения. Поскольку значение 400,0 ХЕ

является максимально возможным, то максимальное значение в таком случае будет составлять

8000,0 ХЕ.

Интерпретация результатов

Каждой лаборатории рекомендуется проверять предоставленный производителем референтный

диапазон и устанавливать свой собственный нормальный диапазон на основе своих собственных

контролей и популяции пациентов в соответствии со своими собственными установленными

процедурами.

Предполагается, что результаты, представленные лабораторией, должны включать следующие

сведения: «Указанные результаты были получены с помощью иммунохемилюминесцентного

анализа Inova QUANTA Flash LKM-1. Значения, полученные с помощью методов, разработанных

разными производителями, не являются взаимозаменяемыми».

Ограничения процедуры

1.

Не

все

пациенты

с

аутоиммунным

гепатитом

типа

2

(АИГ-2)

имеют

положительный

результат на антитела против LKM-1.

2.

Антитела

против

LKM-1

могут

быть

обнаружены

у

небольшого

числа

пациентов

в

результате ВИЧ-инфекции и могут не являться следствием АИГ-2. LKM-1 положительные

образцы должны быть проверены на наличие ВИЧ-инфекци.

4,5

3.

Результаты этого анализа должны использоват